定點熒光標(biāo)記蛋白：輕松搞定CAR-T陽性率檢測

定點熒光標(biāo)記蛋白：輕松搞定CAR-T陽性率檢測CAR-T細(xì)胞療法在8月份提前進入“豐收季”。8月27日NMPA官網(wǎng)公示，國內(nèi)第五款CAR-T細(xì)胞療法——來自傳奇生物的西達基奧侖賽注射液獲批上市。這款靶向BCMA的細(xì)胞療法用于治療復(fù)發(fā)或難治性多發(fā)性骨髓瘤（R/RMM）成人患者。同一天，藥明巨諾靶向CD19的瑞基奧侖賽注射液新適應(yīng)癥上市申請獲得批準(zhǔn)，用于治療成人復(fù)發(fā)或難治性套細(xì)胞淋巴瘤（R/RMCL）。與傳統(tǒng)藥物不同，CAR-T在靜脈注射給藥后會分布在各個器官。在CAR與腫瘤靶點結(jié)合后，CAR-T細(xì)胞被激活并增殖，一般在2周內(nèi)達到峰值，之后根據(jù)個體差異呈現(xiàn)不同程度的下降趨勢，因此CAR細(xì)胞陽性率是CAR-T產(chǎn)品活性的關(guān)鍵指標(biāo)之一。CAR細(xì)胞陽性率檢測貫穿CAR-T療法始終，是其質(zhì)量控制的“基石”。在研發(fā)階段，為確保CAR結(jié)構(gòu)改進能最大化的提高緩解率，需要對CAR陽性細(xì)胞的數(shù)量和比例進行檢測。在CAR-T生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制、臨床試驗監(jiān)測以及患者體內(nèi)擴能和存活能力等各階段均需檢測細(xì)胞活性。因此CAR-T細(xì)胞治療產(chǎn)品從臨床前研究到患者治療后隨訪，都需要CAR陽性率檢測。圖源義翹講堂《定點標(biāo)記技術(shù)平臺——專為細(xì)胞檢測打造》講座課件選擇合適的技術(shù)是構(gòu)建CAR陽性率檢測的基礎(chǔ)。目前實驗室常用的檢測技術(shù)有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、抗獨特型抗體等。流式細(xì)胞術(shù)（FCM）基于熒光標(biāo)記，對細(xì)胞進行多參數(shù)、快速定量分析及分選。FCM具有高通量快速分析優(yōu)勢，每秒可達10萬個細(xì)胞，并且分選純度在99%以上。同時還能檢測多種細(xì)胞信息，如細(xì)胞群的比例、數(shù)量、T細(xì)胞功能、免疫分型、蛋白豐度等，進而判斷特定細(xì)胞類型及其蛋白豐度。利用熒光標(biāo)記蛋白與細(xì)胞表面重要標(biāo)志物特異性結(jié)合的特性，進行流式細(xì)胞術(shù)檢測，是現(xiàn)階段普遍公認(rèn)的主流檢測技術(shù)。然而，熒光標(biāo)記蛋白的選擇面臨諸多挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)化學(xué)標(biāo)記是主要的蛋白標(biāo)記技術(shù)，但批間一致性差，檢測結(jié)果不穩(wěn)定，影響對治療效果的評估。此外，傳統(tǒng)化學(xué)標(biāo)記蛋白易聚集，檢測時可能產(chǎn)生非特異信號。因此，開發(fā)高活性、高批間一致性的熒光標(biāo)記蛋白對細(xì)胞檢測尤為重要?；谝陨闲枨?，義翹神州憑借其特色定點標(biāo)記技術(shù)平臺，成功開發(fā)了一系列專為CAR細(xì)胞檢測打造的定點標(biāo)記蛋白產(chǎn)品，熒光標(biāo)記類型多樣，涵蓋PE、APC、AF488、AF647等，全方位滿足不同研究需求，如細(xì)胞藥物質(zhì)控和檢測、抗體篩選、蛋白互作研究等。義翹神州定點標(biāo)記蛋白義翹神州定點標(biāo)記蛋白優(yōu)勢★在某一特定氨基酸上標(biāo)記★在特定位置標(biāo)記★標(biāo)記數(shù)量確定；★保持天然構(gòu)象和活性★批內(nèi)高度均質(zhì)性★批間高度一致性詳細(xì)驗證數(shù)據(jù)特異性靈敏度高（Cat#:11880-H08W1-SG）AF647熒光定點標(biāo)記CD19蛋白經(jīng)FCM驗證可高特異性檢測CD19CAR細(xì)胞。Flowcytometricanalysisofanti-CD19CARexpression.293cellswerelentivirallytransducedwithanti-CD19CAR.FlowcytometricanalysiswasperformedwithanegativecontrolproteinandAF647-conjugatedhumanCD19protein(Cat#:11880-H08W1-SG),respectively.Non-transduced293cellswereusedasacontrol(left)(QCtested).非特異性背景低（Cat#:11880-H08W1-SG）AF647熒光定點標(biāo)記CD19蛋白經(jīng)未轉(zhuǎn)染CAR的PBMC細(xì)胞驗證，無特異性背景，保證CAR表達檢測結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性，適用于CAR細(xì)胞陽性檢測。BindingactivityofAF647-conjugatedCD19protein(Cat#:11880-H08W1-SG)toPBMCcells.PBMCcellswerestainedwithanti-CD3antibodyandAF647-conjugatedhumanCD19proteinanddetectedbyflowcytometry.PBMCcellsstainedwithanti-CD3antibodywereusedasacontrol(left)(QCtested).批間一致性穩(wěn)定（Cat#:11188-H86H-SD）：標(biāo)記前后蛋白活性、不同批次的標(biāo)記蛋白之間活性保持一致ComparisonofELISAactivitybetweenpre-conjugationanddifferentbatchesofsite-specificAF488conjugatedB7-H3(Cat#:11188-H86H-SD)(routinelytested).穩(wěn)定性高（Cat#:11188-H86H-SD）經(jīng)多次凍融和加速穩(wěn)定性測試，仍保持較高生物活性TheB7-H3protein(Site-specificconjugation,ECD,Histag.Cat#:11188-H86H-SD)showednoperformancereductiononflowcytometryaftermultiplefreeze-thawcycles(0,5,10cycles)andtwoweeks(Day0,Day7,Day14)ofstorageat37℃(routinelytested).純度高（Cat#:10001-H86H-SD）：標(biāo)記前后產(chǎn)品純度均高于90%Thepurityofsite-specificAF488conjugatedEGFRProtein(Cat#:10001-H86H-SD)ismorethan90%asdeterminedbySDSandSEC-HPLC(routinelytested).免責(zé)聲明：義翹神州內(nèi)容