DB5115T 127-2024 小琴絲竹組培快繁技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.40CCSB66

5115??發(fā)布202406152024-05-14發(fā)布四川省（宜賓市）地方標(biāo)準(zhǔn)DB5115/T127—2024小琴絲竹組培快繁技術(shù)規(guī)程CodeofpracticefortissuecultureofBambusamultiplexⅠDB5115/T127-2024Ⅰ目 次前 言 III范圍 1規(guī)范性引用文件 1術(shù)語(yǔ)和定義 1組培設(shè)施 1培養(yǎng)基配制 1誘導(dǎo)培養(yǎng) 2增殖培養(yǎng) 3生根培養(yǎng) 4煉苗 4組培苗移栽管理 4檔案管理 5IIIDB5115/T127-2024III前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由宜賓林竹產(chǎn)業(yè)研究院提出。本文件由宜賓市林業(yè)和竹業(yè)局歸口。本文件起草單位：宜賓林竹產(chǎn)業(yè)研究院、浙江農(nóng)林大學(xué)、宜賓標(biāo)計(jì)商品檢測(cè)研究院。本文件主要起草人：周?chē)?guó)強(qiáng)、高會(huì)彬、楊海蕓、余英、趙翔。本文件為首次制定。小琴絲竹組培快繁技術(shù)規(guī)程

DB5115/T127-2024115.1 培養(yǎng)基類(lèi)型的選擇5 培養(yǎng)基配制按照NY/T2306第4章中的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。4 組培設(shè)施組培苗plantlet利用植物組織、器官或細(xì)胞等作為起始材料，通過(guò)植物組織培養(yǎng)方式生產(chǎn)獲得的植株。3.4消毒disinfection通過(guò)物理、化學(xué)方法去除物體表面大部分有害病原微生物的過(guò)程。3.3接種inoculation將消毒后的外植體或干凈培養(yǎng)材料在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過(guò)程。3.2外植體explant從自然生長(zhǎng)的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。3.1范圍本文件適用于小琴絲竹組培苗快速培育。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程術(shù)語(yǔ)和定義NY/T2306界定的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。6.1 外植體選擇6.1 外植體選擇宜選擇小琴絲竹當(dāng)年生枝條的節(jié)間帶芽部分，節(jié)上部保留0.5cm，節(jié)下部保留1.0cm。26 誘導(dǎo)培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)基宜使用直徑3.0cm、高度1.2cm的培養(yǎng)皿分裝，每個(gè)培養(yǎng)皿分裝5ml；增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基宜使用外徑2.5cm、高度15.0cm的試管分裝，每個(gè)試管分裝15ml。分裝時(shí)培養(yǎng)基不應(yīng)沾附在培養(yǎng)容器口及周?chē)缇囵B(yǎng)基滅菌配制的培養(yǎng)基應(yīng)在12h內(nèi)宜使用高壓滅菌鍋滅菌，在121℃條件下滅菌15min；滅菌后不應(yīng)與未滅菌物品混放。接種工具滅菌剪刀、鑷子等接種工具應(yīng)使用高壓滅菌鍋滅菌，在121℃條件下滅菌25min；滅菌后不應(yīng)與未滅菌物品混放。超凈工作臺(tái)滅菌將已滅菌的培養(yǎng)基和接種工具放置在超凈工作臺(tái)上，打開(kāi)超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)和紫外燈滅菌30min，滅菌后關(guān)閉紫外燈。5.6.3.2 75%乙醇擦拭一遍。宜選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。MS按照NY/T2306第7章中的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。培養(yǎng)基配方誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖30g/L+瓊脂3.5g/L。增殖培養(yǎng)基MS+6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）3mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.5g/L。生根培養(yǎng)基MS+NAA（萘乙酸）0.1mg/L+6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）0.3mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂3.5g/L。PH應(yīng)用1mol/LHCl或1mol/LNaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至5.8。培養(yǎng)基分裝轉(zhuǎn)接應(yīng)將生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌小琴絲竹組培苗切成含2個(gè)～3個(gè)芽的小叢，轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。轉(zhuǎn)接應(yīng)將生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌小琴絲竹組培苗切成含2個(gè)～3個(gè)芽的小叢，轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件培養(yǎng)環(huán)境溫度宜設(shè)置為24℃～26℃，環(huán)境光照強(qiáng)度宜設(shè)置為2500lx，連續(xù)定時(shí)光照時(shí)間宜設(shè)置為16h/d。培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)間宜為14d～21d。培養(yǎng)代數(shù)37 增殖培養(yǎng)容器上。培養(yǎng)條件培養(yǎng)環(huán)境溫度宜設(shè)置為24～2624h，后續(xù)環(huán)境光照強(qiáng)度宜設(shè)置為1500lx，連續(xù)定時(shí)光照時(shí)間宜設(shè)置為16h/d。培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)時(shí)間宜為7d～14d。外植體清洗應(yīng)將剪取的外植體用洗潔精沖洗1h。外植體消毒在超凈工作臺(tái)上，宜用75%的酒精消毒30sec，然后用0.5%次氯酸鈉消毒8min，至外植體略微發(fā)黃后取出；再用無(wú)菌水沖洗5遍～6遍后備用。外植體接種接種工具消毒接種時(shí)，應(yīng)將接種工具剪刀、手術(shù)刀和鑷子等用電熱滅菌器或酒精燈消毒后，冷卻至室溫備用。外植體處理應(yīng)將已消毒的外植體切除兩端消毒后發(fā)黃的部分，用無(wú)菌吸水紙吸干表面水分備用。接種將已處理好的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。每個(gè)培養(yǎng)皿宜接種1個(gè)莖段。標(biāo)記接種后,每批應(yīng)用記號(hào)筆將品種代號(hào)、培養(yǎng)基編號(hào)、工作人員編號(hào)及接種日期等信息標(biāo)注在培養(yǎng)設(shè)施移裁階段的圃區(qū)宜建有可控溫控光的溫室，雙層以上可活動(dòng)遮陽(yáng)網(wǎng)，溫室內(nèi)宜設(shè)有頂部噴淋的苗床或可數(shù)字化調(diào)控溫濕度的育苗箱。設(shè)施移裁階段的圃區(qū)宜建有可控溫控光的溫室，雙層以上可活動(dòng)遮陽(yáng)網(wǎng)，溫室內(nèi)宜設(shè)有頂部噴淋的苗床或可數(shù)字化調(diào)控溫濕度的育苗箱。育苗容器育苗容器宜使用邊長(zhǎng)8cm～10cm的方形容器。育苗基質(zhì)基質(zhì)應(yīng)以泥炭土、珍珠巖為主，體積比例宜為3:7。移栽煉苗后，用鑷子將組培苗從培養(yǎng)基中取出，應(yīng)洗掉基部附著的培養(yǎng)基，在溫室內(nèi)，栽植于基質(zhì)中。管理410 組培苗移栽管理開(kāi)或半打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋煉苗。9.3 煉苗時(shí)間煉苗時(shí)間宜為7d。繼代增殖可以達(dá)到15代。如果組培苗繼代后出現(xiàn)玻璃化、褐化等不良情況，應(yīng)終止繼代。生根培養(yǎng)增殖培養(yǎng)后，切取生長(zhǎng)健壯、長(zhǎng)勢(shì)一致，含有2個(gè)～3個(gè)分支的叢苗，轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)條件按7.2。培養(yǎng)時(shí)間7.3。瓶苗要求培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)組培苗長(zhǎng)出2條～3條長(zhǎng)度1.5cm～3.0cm的不定根，便可煉苗。煉苗條件培養(yǎng)瓶宜放置在遮光率為70%～75%，相對(duì)濕度為70%～90%，溫度為24℃～26℃的溫室中，打5DB5115/T127-20245組培苗移裁后，應(yīng)立即澆透水，30min～60min800倍～1000倍多菌靈或百菌清。然后根據(jù)天氣情況，每天澆水2次～4次。光照及溫濕度環(huán)境宜按照表1的要求執(zhí)行。表1移栽環(huán)境條件要求栽植后時(shí)間溫度光照空氣濕度1d～14d20℃～32℃遮光度為75%的遮陽(yáng)網(wǎng)75%14d～28d20℃～32℃全光照自然濕度10.6 出圃標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)植株