干擾素在動物疫病預防及治療中的應用

為切實做好全國動物疫病強制免疫工作，各級、各地區(qū)不斷強化免疫指導，根據(jù)當?shù)匦竽琉B(yǎng)殖情況和所管轄區(qū)內(nèi)動物疫病流行情況，制定針對性動物疫病預防及治療方案。其中，干擾素防治就是其中之一，通過細胞表面受體作用使細胞產(chǎn)生抗病毒蛋，最終起到調(diào)節(jié)免疫、增強動物抗病毒能力的作用，在動物疫病防控方面具有廣闊的應用前景。1干擾素應用背景在十四五規(guī)劃期間，各地區(qū)堅持防疫優(yōu)先，立足維護養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展安全，切實筑牢動物防疫屏障，持續(xù)跟蹤病原變化和流行趨勢，并制定綜合性、全面性、針對性想措施，防控動物疫病出現(xiàn)，抑制疫病大規(guī)模暴發(fā)和蔓延。近年來隨著動物病原菌新毒株的流行，如H5N1高致病性禽流感病、狂犬病病毒、豬瘟病毒、藍耳病病毒等，變異株不斷出現(xiàn)，加重人畜共患病的出現(xiàn)。傳統(tǒng)防控措施多采用抗生素治療，并加以中藥輔助，不能否認的是這種用藥措施可以有效控制患病畜禽繼發(fā)性感染，但是只能從“按癥給藥”，而不能從根本上實現(xiàn)抵抗病毒作用，臨床應用效果不佳，難以實現(xiàn)病毒、病原、支原體的徹底根治。而干擾素是一種高活性、多功能的糖蛋白，由巨噬細胞、淋巴細胞及體細胞產(chǎn)生。經(jīng)過干擾素誘生劑刺激后，可直接應用于圓環(huán)病毒II型感染、細小病毒病、偽狂犬病、輪狀病毒感染等多種疾?。ㄒ陨细蓴_素屬于重組豬干擾素α），對犬貓疫病，如狂犬病、傳染性肝炎、偽狂犬病、犬冠狀病毒病等可直接用重組干擾素ω進行防控。2干擾素特點和基本功能干擾素是一種廣譜抗病毒制劑，可分為三類，即：淋巴細胞型（γ型）、成纖維細胞型（β型）、白細胞（α型）。其中α型和β型被稱為Ⅰ型干擾素，IFN-α/β二者結(jié)合相同受體，γ型干擾素也被稱為Ⅱ型干擾素，由活化TH1細胞、T細胞產(chǎn)生，以細胞外基質(zhì)相連的形式存在，3種干擾素的理化及生物學性質(zhì)有明顯差異，生物學作用也不盡相同，但是在動物疫病防治中均通過細胞表面受體作用，在不直接殺傷或抑制病毒的基礎(chǔ)上，增強自然殺傷細胞活力，使細胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，起到免疫調(diào)節(jié)作用。干擾素基本功能為：（1）抗菌作用，比如IFN-γ可增加單核巨噬細胞的吞噬小體，下調(diào)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體減少細菌供鐵量，凸顯溶酶體溶解細菌作用，并誘導產(chǎn)生內(nèi)源性NO直接抑制細胞內(nèi)細菌，通過以上途徑共同達到抗菌作用。（2）抗病毒作用，α型和β型干擾素可間接抑制病毒的復制過程，在抗病毒的同時防御和調(diào)節(jié)因子，可控制病毒的生長和增殖，還具有活化自然殺傷細胞和巨噬細胞，防止誘導抗體細胞死亡的功能。同時，經(jīng)相關(guān)研究報道，IFN-γ與IFN-β共同使用，有相互加強抗病毒的作用。（3）參與免疫調(diào)節(jié)，有利于巨噬細胞對抗原的吞噬作用，尤其在IFN-γ型干擾素的使用下，可對IgG的Fc受體表達，增強機體免疫應答能力，通過增強巨噬細胞表面表達Fc受體，增加巨噬細胞表面MHCⅡ類分子的表達，以此活化細胞，起到免疫調(diào)節(jié)作用。（4）抗寄生蟲作用，IFN-γ刺激微血管內(nèi)皮細胞，γ型干擾素可激活巨噬細胞，能抑制弓形蟲生長，并催化畜禽體內(nèi)的L-精氨酸，巨噬細胞發(fā)揮作用后產(chǎn)生NO，可有效滅殺寄生蟲。3干擾素的類型與應用方法本文主要以生豬養(yǎng)殖為例，分析豬瘟、豬輪狀病毒病、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病中的應用方法。3.1干擾素在豬瘟防治中的應用豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是豬的一種傳染病，該病在自然條件下只感染豬，不是人畜共患病，但該病發(fā)病快、蔓延快，且家豬野豬均易感染，以內(nèi)臟器官嚴重出血和高死亡率為特征，潛伏期一般為5～7d，發(fā)病初期病豬精神差，發(fā)熱，喜臥，弓背，后續(xù)隨著病情的逐漸加劇，體溫在40～42℃，結(jié)膜發(fā)炎，流膿性分泌物，食欲減退或廢絕，后期腹瀉，糞便惡臭，腹部及四肢內(nèi)側(cè)伴有出血點，經(jīng)過病理檢驗和實驗室診斷發(fā)現(xiàn)，粘膜和內(nèi)臟器官有不同程度的出血，如果是慢性型，主要表現(xiàn)為壞死性腸炎。豬瘟病毒的基因組是單股正鏈RNA，病毒先與細胞表面的受體結(jié)合，經(jīng)過內(nèi)吞作用后，病毒粒子裂解將其RNA釋放到胞質(zhì)中，單核巨噬細胞受到豬瘟病毒感染后，健康豬前列腺素E2可引起機體的炎癥反應，在單核巨噬細胞的誘導下，最終損傷機體的淋巴細胞，病毒粒子吸附在細胞表面，最終導致抵抗力弱的病豬死亡。自從2018年非洲豬瘟傳入后，中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所研制出α型白細胞干擾素可刺激PK-15細胞，對豬瘟病毒的抑制作用顯著。還可使用豬白細胞干擾素（凍干型），20000U/支，10支/盒，對乳豬（10日齡以內(nèi)），注射劑量為10頭/支，1次/d，連用2～3d；對10～50kg仔豬，注射劑量為3頭/支，1次/d，連用2～3d；對50kg以上仔豬，注射劑量為1頭/支，1次/d，連用2～3d；對150kg及以上育肥豬，注射劑量為2頭/支，1次/d，連用2～3d。但在用藥過程中，技術(shù)人員應該注意到，該α型白細胞干擾素應該在豬瘟病毒感染前使用，不能在確診后注射，否則療效降低。為響應國家畜禽疫病防控相關(guān)政策規(guī)定，一旦發(fā)現(xiàn)豬瘟病例應第一時間撲殺，以減低病毒傳播風險，因此在使用豬白細胞干擾素（凍干型）時，應該前置，充分發(fā)揮豬白細胞干擾素（凍干型）的預防作用，同時在給藥過程中，可以利用5mL生理鹽水、雙黃連、黃芪多糖等中藥稀釋，方便注射，可抑制病毒RNA的合成復制。3.2干擾素在輪狀病毒病防治中的應用輪狀毒病在臨床診斷與治療中，被定義為急性腸道傳染病，由豬輪狀病毒引起，中豬和大豬為隱性感染，而仔豬臨床表征更為明顯，主要癥狀為厭食、嘔吐，病初精神沉郁，食欲減退，繼而腹瀉，為水樣或糊狀。糞便為灰黑色或黃色，通常10～21日齡仔豬的癥狀顯著。解剖病死豬其病理變化病變主要在消化道，小腸壁變薄呈半透明，有時小腸出血，腸內(nèi)容物充滿凝乳塊和乳，腸系淋巴結(jié)腫大，用熒光抗體檢查可以直接診斷為輪狀病毒感染。由于該病病原為豬輪狀病毒，病毒腸毒素以NSP4基因為主，NSP4是非結(jié)構(gòu)糖蛋白（由第10段基因編碼），可以破壞細胞間的緊密連接，在病毒感染后，從腸上皮細胞頂端釋放繼而引起腹瀉癥，加劇病毒感染，在胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上作為病毒雙層顆粒受體，幫助病毒脫殼和進入細胞過程，通過劫持自噬機制促進病毒粒子成熟，抑制天然免疫發(fā)應，抑制下游抗病毒細胞因子產(chǎn)生，且病毒蛋白與宿主間關(guān)系十分復雜，在病毒與細胞膜上的受體結(jié)合之后，病毒受體被病毒劫持以協(xié)助其感染，再加之病毒在不斷變異，當前臨床投入藥物雖然可以增強某些病毒代謝過程，但在給藥的同時，也意味著細胞淘汰。對此，可利用I型干擾素，如植物血凝素，該藥劑屬于I型干擾素系列，在治療病毒性腹瀉、病毒型呼吸道疾病、傳染性胃腸炎、多系統(tǒng)衰竭綜合征、藍耳病等方面功效顯著，用法用量為：肌肉注射0.01mL/kg.bw，用5mL生理鹽水稀釋，對機體免疫力不足的仔豬，可用5mL黃芪多糖注射液稀釋，1次/d，連用2～3d，也可以通過混飲方式，將藥液稀釋后溶于水（按照1：10的比例勾兌），1次/d，連用3～5d。該藥劑可刺激T細胞增殖分化，可刺激B細胞轉(zhuǎn)化為漿母細胞，同時產(chǎn)生大量效應T細胞，對病毒起到殺滅作用，也產(chǎn)生細胞毒T細胞，殺毒作用更為顯著，也可以增殖分化為漿細胞，干擾素的誘生能力是聚肌胞苷酸的30倍，并產(chǎn)生大量非特異性抗體。技術(shù)人員也應注意到，可以視病豬身體情況，可用干擾素配合雙黃連注射液使用，尤其對癥狀較為嚴重的豬，可用復方穿心蓮注射液，有良好的預防和治療作用。3.3干擾素在偽狂犬病防治中的應用偽狂犬病屬于豬的急性傳染病，由豬偽狂犬病病毒引起，其基因組是線狀雙鏈DNA分子，是皰疹病毒科中抵抗力較強的一種，可引起妊娠母豬流產(chǎn)和仔豬生長停滯，病毒粒子為圓形，在pH4～9保持穩(wěn)定，通過已感染豬排毒而傳給健康豬，傳播途徑多為鼻分泌、乳汁和精液，幼齡豬感染偽狂犬病毒后病情最重。在發(fā)病初期，病豬昏睡、嗚叫、嘔吐，有時見到肺水腫，精神極度委頓，這一階段死亡率在10%～20%，成年豬臨床癥狀多表現(xiàn)為體溫上升達41℃以上，懷孕母豬可發(fā)生流產(chǎn)，沒有明顯的季節(jié)性特征。病理檢測發(fā)現(xiàn)，病死豬腦膜明顯充血，淋巴細胞內(nèi)可見核內(nèi)嗜酸性包涵，中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的血管套，有時可見肝臟小葉周邊出現(xiàn)凝固性壞死。此時，對偽狂犬病，養(yǎng)殖技術(shù)人員可采用誘導白細胞介素，促進誘導I型干擾素的表達，如用白細胞介素-2，該藥物具有雙重藥理作用，臨床主要用于治療由豬附紅細胞體、大腸桿菌病、偽狂犬病、弓形體病、原蟲病等，即能抗菌，又能抗病毒，可有效對肺炎球菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、布魯氏菌、豬痢疾螺旋體等病原有較好的抑制作用。預防時，可以將本品100g兌水300kg，讓健康豬每次灌服250mL，并在30min內(nèi)飲用完畢，1次/d，若拌料，可以將本品100g拌料150kg，連用3～5d；用于治療時，可以將本品100g兌水200kg，讓病豬每次灌服300mL，并在50min內(nèi)飲用完畢，1次/d，治療拌料，可以將本品100g拌料100kg，連用5～7d。服藥之后，由于白細胞介素是T細胞分泌的一種生長因子，可以提高臨床免疫效果，通過特異性誘導機體細胞免疫和體液免疫，增強健康豬大腸桿菌病、支原體病等疫苗的免疫力，顯著提高免疫水平，高機體抗應激能力，發(fā)病情況下與藥物或疫苗配合使用能在短時間內(nèi)控制疾病。3.4干擾素在豬圓環(huán)病毒病防治中的應用豬圓環(huán)病毒粒子直徑約為17nm，在pH3的酸性環(huán)境中很長時間不被滅，可能引發(fā)病豬繁殖障礙、先天性顫抖。感染豬可自鼻液、體液、糞便中排出病毒，懷孕豬可經(jīng)胎盤垂直傳播感染仔豬，且病毒可水平傳播，病理變化為患豬消瘦，內(nèi)臟和外周淋巴結(jié)腫大，肺部有灰褐色炎癥和腫脹，肝小葉間結(jié)締組織增生，且組織學病變廣泛分布于全身器官，淋巴細胞缺失，心臟有多灶性心肌炎。此時，技術(shù)人員可以利用干擾素，如三防四聯(lián)工程干擾素，也被稱為1FNa+IFNp，每2g含1500萬活性單位（超濃縮型），該干擾素主要用于豬病毒性疾病的有效預防和治療，同時本品通過競爭體內(nèi)組胺受體，對母畜因生產(chǎn)所引起的免疫功能下降起到控制作用，對多種革蘭氏陽性菌及支原體均有強大的殺滅作用。用法用量為肌肉注射，1mL/30kg，1次/d，如果是應用于預防，肌肉注射，0.5mL/30kg，若病重豬或陽性病例的同群豬，給藥量為2mL/30kg，連用3d為一個療程，必要時可結(jié)合中醫(yī)治療手段，比如使用扶正解毒散，本品主要成分為板藍根、黃芪、淫羊藿可通過中藥誘導機體產(chǎn)生干擾素,在宿主細胞作用下而產(chǎn)生抗病毒蛋白,起到扶正祛邪、清熱解毒效果，抑制病毒蛋白合成,影響病毒釋放，在增