《微生物基礎(chǔ)》課件-任務(wù)超凈工作臺的使用、微生物接種與分離

一、無菌室的消毒處理任務(wù)二

微生物接種、分離純化在微生物實驗中，一般小規(guī)模的接種操作使用（）或（），工作量大時使用（）接種，要求嚴(yán)格的在（）內(nèi)再結(jié)合使用（）。任務(wù)二

微生物接種、分離純化（一）無菌室的結(jié)構(gòu)兩部分：緩沖間和工作間應(yīng)具備的基本條件1.面積多少？2.無菌室要求嚴(yán)密、避光，通風(fēng)條件好，隔板以采用（）為佳。3.緩沖間與工作間的比例？哪個是外間？對工作間和緩沖間的門有特殊要求嗎？4.對門、窗要求的關(guān)鍵點有哪些？5.里外兩間均裝日光燈和紫外燈嗎？紫外燈規(guī)格、安裝高度的要求？任務(wù)二

微生物接種、分離純化（二）無菌室的使用要求使用無菌室前如何處理？打開紫外燈照射半小時，關(guān)閉紫外燈半小時后再開始工作工作后如何處理？臺面清理干凈，所有物品使用后放回原處，取出培養(yǎng)物品及廢物桶，用5%石炭酸噴霧，再打開紫外燈照半小時。任務(wù)二

微生物接種、分離純化（三）無菌室消毒處理常用方法1.紫外線殺菌2.噴灑石碳酸3%~5%3熏蒸甲醛、高錳酸鉀開啟時間：30min左右。過長，紫外燈管易損壞，其產(chǎn)生的臭氧對工作人員不利。任務(wù)二

微生物接種、分離純化（四）無菌室無菌程度的測定一般采用平板法在兩個時間進(jìn)行：一是在滅菌后使用前二是在操作完畢后測定方法？結(jié)果判定？霉菌過多如何處理？細(xì)菌呢？

二超凈工作臺的使用任務(wù)二

微生物接種、分離純化1.工作原理核心：幾種方法的結(jié)合？2.操作方法需使用物品放超凈臺上→開啟無菌風(fēng)→開啟紫外燈→30min后關(guān)閉紫外燈（無菌風(fēng)不關(guān)閉）→打開照明燈→點燃酒精燈→酒精棉擦拭雙手及臺面→進(jìn)行操作→操作完畢清理臺面→酒精棉擦拭臺面→開啟紫外燈→30min后關(guān)閉紫外燈→關(guān)閉無菌風(fēng)→切斷電源超凈工作臺總結(jié)：使用前是紫外燈消毒滅菌，使用時是通過吸入空氣，更換氣體來保持里面空氣的潔凈，使用后紫外燈消毒滅菌。

[任務(wù)驗收標(biāo)準(zhǔn)]任務(wù)二微生物接種、分離純化操作練習(xí)1.會正確使用無菌室及超凈工作臺。2.會進(jìn)行斜面接種。3.會進(jìn)行劃線分離、涂布分離。

[任務(wù)完成條件]菌種、滅菌吸管、已滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（斜面）、75%酒精、超凈工作臺、無菌室、記號筆、接種針、標(biāo)簽紙、涂布棒、打火機、酒精燈、酒精棉、鑷子、電爐、廢物缸、已滅菌的培養(yǎng)基平板。一、無菌室的消毒處理及超凈臺的使用

[任務(wù)指導(dǎo)]使用無菌室前如何處理？打開紫外燈照射半小時，關(guān)閉紫外燈半小時后再開始工作工作后如何處理？臺面清理干凈，所有物品使用后放回原處，取出培養(yǎng)物品及廢物桶，用5%石碳酸噴霧，再打開紫外燈照半小時。

二、超凈工作臺的使用需使用物品放超凈臺上→開啟無菌風(fēng)→開啟紫外燈→30min后關(guān)閉紫外燈→打開照明燈→點燃酒精燈→酒精棉擦拭雙手及臺面→進(jìn)行操作→操作完畢清理臺面→酒精棉擦拭臺面→開啟紫外燈→30min后關(guān)閉紫外燈→關(guān)閉無菌風(fēng)→切斷電源三、微生物接種技術(shù)（斜面）斜面接種技術(shù)(1)做標(biāo)記接種前在試管上用記號筆注明菌名、接種日期、接種人姓名等。記錄位置距試管口約2～3cm的位置。(2)點燃酒精燈。(3)接種用接種環(huán)將少許菌種移接到貼好標(biāo)簽的試管斜面上。操作必須按無菌操作法進(jìn)行。斜面接種技術(shù)簡述如下：1）手持試管2）旋松管塞3）取接種環(huán)灼燒滅菌4）拔管塞5）取菌灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管（皿）；冷卻接種環(huán)；取菌；從菌種管移出6）接種“Z”字型劃線或直線劃線7）塞管塞不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動時納入不潔空氣。8）將接種環(huán)灼燒滅菌放下接種環(huán)，再將棉花塞旋緊（4）將以上斜面置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。四微生物接種（平板）1.酵母菌懸液的制備2.用1支滅菌吸管吸取0.2ml酵母菌懸液于PDA平板培養(yǎng)基中（一皿），涂布。（涂布接種）稱取約0.1g酵母粉于盛有10ml蒸餾水（38-40℃）的試管中，每10min搖晃1次，30分鐘后活化完畢。3.使用接種環(huán)，以無菌操作的方式，挑取酵母菌，在平板培養(yǎng)基中做劃線練習(xí)。4.使用接種針，以無菌操作的方式，挑取霉菌孢子點接在一皿PDA平板培養(yǎng)基中。（點植接種）5.將以上平皿倒置培養(yǎng)，溫度28度，酵母菌時間2天。講解平板上的四種接種方法：1.澆混接種法（傾注平板法）特點：先注菌液再倒平板講解平板上的四種接種方法：2.涂布接種法特點：先倒平板，再注菌液，再涂布接種1.將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中2.取少量菌液（不超過0.1mL），滴加到培養(yǎng)基表面3.將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8~10s4.用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻注意：1.將涂布器末端浸在盛有體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精的燒杯中。取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2.操作中一定要注意火!不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。講解平板上的四種接種方法：2.涂布接種法講解平板上的四種接種方法：3.平板劃線接種平板劃線接種的接種工具分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法與連續(xù)劃線法（1）幾次燒灼接種環(huán)的目的①取菌種之前燒灼的目的?②每次劃線之前的燒灼目的?③劃線結(jié)束后燒灼的目的?殺死接種環(huán)上原有的微生物；殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線的菌種數(shù)目減少；殺死接種環(huán)上的微生物或細(xì)菌，避免細(xì)菌污染環(huán)境或感染操作者。

（2）從第二次以后劃線操作總是從上一次劃線末端開始，這樣能夠使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。分區(qū)劃線生長現(xiàn)象連續(xù)劃線生長現(xiàn)象

講解平板上的四種接種方法：4.點植接種用接種環(huán)蘸少許無菌生理鹽水，挑取斜面上少量菌絲或孢子，在瓊脂平板上點成等邊三角形的三點。經(jīng)培養(yǎng)后,每皿形成三個菌落。接種時最好倒置平皿，以免霉菌孢子飛揚。（二）、液體接種技術(shù)

(1)用斜面菌種接種液體培養(yǎng)基時，有下面兩種情況：如接種量小，可用接種環(huán)取少量菌體移入培養(yǎng)基容器(試管或三角瓶等)中，將接種環(huán)在液體表面振蕩或在器壁上輕輕摩擦把菌苔散開。若接種量大呢？如接種量大，可先在斜面菌種管中注入定量無菌水．接種環(huán)把菌苔刮下研開，再把菌懸液倒入液體培養(yǎng)基中，倒前需將試管口在火焰上滅菌。(2)用液體培養(yǎng)物接種液體培養(yǎng)基時，可用無菌的吸管或移液管吸取菌液接種。

（三）、穿刺接種技術(shù)接種有兩種手持操作法。一種是水平法，它類似于斜面接種法。一種則稱垂直法。穿刺接種法液體培養(yǎng)基接