人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述3

人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述人工授精夫精人工授精贈精人工授精常規(guī)體外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）常規(guī)體外受精單精子卵胞質(zhì)內(nèi)注射（intracytoplasmicsperminjection,ICSI）射出精睪丸/附睪精植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantationgeneticdiagnsosi,PGD）人類輔助生殖技術(shù)2020/11/32人工授精夫精人工授精贈精人工授精常規(guī)體外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）常規(guī)體外受精單精子卵胞質(zhì)內(nèi)注射（intracytoplasmicsperminjection,ICSI）射出精睪丸/附睪精植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantationgeneticdiagnsosi,PGD）人類輔助生殖技術(shù)2020/11/32適應(yīng)證男方因素宮頸因素免疫因素女方排卵障礙不明原因性不孕步驟夫精人工授精臨床妊娠率10-15%2020/11/33促排卵治療誘發(fā)排卵有排卵障礙的情況下以誘發(fā)單個卵泡或少數(shù)卵泡的發(fā)育為目的超排卵在可控制的范圍內(nèi)誘發(fā)多卵泡發(fā)育和成熟為ART奠定基礎(chǔ)治療的對象很多本身有正常的排卵功能2020/11/34中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院IUI中促排卵的作用授精時間更精確糾正排卵障礙提供更多可用的卵子2020/11/35中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院適應(yīng)證輸卵管盆腔因素子宮內(nèi)膜異位癥排卵障礙經(jīng)促排卵治療無效嚴(yán)重少弱畸精癥無精癥反復(fù)IUI失敗免疫性不孕常規(guī)體外受精-胚胎移植（invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET）2020/11/36步驟藥物促排卵經(jīng)陰道穿刺取卵體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍新鮮周期失敗后解凍胚胎移植常規(guī)體外受精-胚胎移植

invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET2020/11/37GnRH激動劑：達(dá)必佳，達(dá)菲林GnRH拮抗劑：加尼瑞克，思則凱Gn：重組FSH：果納芬，普麗康尿源性FSH：麗申寶，福特蒙尿源性FSH和LH：賀美奇，HMG主要藥物2020/11/38促排卵方案-短效長方案GnRH-a0.1mgqd月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a0.05mgqdGn14-21天垂體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時注射HCG，36hr后取卵2020/11/39促排卵方案-長效長方案月經(jīng)第二十天黃體中期GnRH-a1.3mg單次注射Gn14-21天垂體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時注射HCG，36hr后取卵2020/11/310促排卵方案-拮抗劑方案Gn主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時注射HCG，36hr后取卵月經(jīng)第2-3天啟動促排5-6天加拮抗劑2020/11/311ART臨床治療風(fēng)險

穿刺并發(fā)癥血栓栓塞

妊娠相關(guān)并發(fā)癥

其它風(fēng)險2020/11/312經(jīng)陰道穿刺取卵術(shù)并發(fā)癥嚴(yán)重并發(fā)癥（0.5%-1.5%）陰道出血>100ml0.8%盆腔感染0.6%盆腔膿腫卵巢扭轉(zhuǎn)盆腔出血卵巢過度刺激綜合征2020/11/313取卵術(shù)后卵巢改變非常脆容易撕裂通過測定Hb和Hct的變化，推測通常取卵術(shù)后平均出血量232±130mL避免在卵巢內(nèi)橫向擺動2020/11/314卵巢過度刺激綜合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）

-促排卵最嚴(yán)重的醫(yī)源性并發(fā)癥

-正常妊娠中罕見

*發(fā)生率:-輕度：

8–23%

-重度：3.5-8%COH-輕中度：7.3%-重度：

4.2%2020/11/315病理及臨床表現(xiàn)體液外滲毛細(xì)血管通透性增加胸水、腹水、心包積液、全身水腫低血容量血液濃縮高凝狀態(tài)腎灌注減少少尿、無尿電解質(zhì)紊亂血栓形成氮質(zhì)血癥腹脹、惡心、嘔吐咳嗽、氣促2020/11/316卵巢過度刺激綜合征

（ovarianhyperstimulationsyndrome,OHSS）臨床表現(xiàn)卵巢體積顯著增大血液濃縮，腹腔積液，胸腔積液少尿電解質(zhì)紊亂血栓形成、ARDS及多器官功能衰竭2020/11/317OHSS分度分類卵巢大小癥狀輕度5-10cm1級：腹脹不適2級：1級癥狀+惡心、嘔吐及/或腹瀉中度>10cm3級：2級癥狀+超聲確定腹水4級：3級癥狀+腹水、胸水的臨床表現(xiàn)和呼吸困難重度>12cm5級：4級癥狀+血液濃縮，血粘度增加、低血容量，腎灌注減少及少尿2020/11/318OHSS分度根據(jù)OHSS發(fā)生的時間，又分為早發(fā)型OHSS和晚發(fā)型OHSS早發(fā)型發(fā)生在HCG后3～7天，其發(fā)生與卵巢對促性腺激素的反應(yīng)性有關(guān)，并且被外源性HCG激發(fā)晚發(fā)型HCG后12～17天，多伴有多胎妊娠，系內(nèi)源性HCG所致晚發(fā)型OHSS程度往往比早發(fā)型嚴(yán)重2020/11/319體外授精-胚胎移植的實驗室步驟2020/11/320實驗室儀器設(shè)備實驗室質(zhì)控體外授精胚胎培養(yǎng)胚胎移植胚胎冷凍胚胎解凍體外授精-胚胎移植的實驗室步驟2020/11/321A、顯微操作系統(tǒng)B、程序冷凍儀及液氮罐C、CO2濃度測試儀和溫度測試儀D、電子天平，超純水儀和滲透壓儀E、冰箱F、空氣凈化設(shè)備G、CO2和N2，混合氣體氣瓶實驗室的儀器和設(shè)備2020/11/3221、顯微鏡A、相差顯微鏡B、體視鏡C、倒置顯微鏡D、熒光顯微鏡實驗室的儀器和設(shè)備2020/11/323IVF工作站實驗室的儀器和設(shè)備2020/11/324CO2培養(yǎng)箱：實驗室的儀器和設(shè)備ThermoK-systemG-185Cook?MINCBenchtopIncubator2020/11/3251、質(zhì)量控制：溫度：23±3℃濕度：30～60%氣壓：≥10Pa塵埃：百級（配子操作區(qū)），萬級（胚胎實驗室），十萬級（更衣室，取精室）可揮發(fā)有機(jī)物（VOC）：＜0.5ppm振動，光照及噪音：胚胎培養(yǎng)實驗室的質(zhì)量控制和管理2020/11/3262、管理：A、按功能和清潔度分區(qū)B、實驗室禁止吃，喝，抽煙以及使用化妝品C、培養(yǎng)箱和溫臺的監(jiān)測D、冰箱的監(jiān)測E、液氮罐的監(jiān)測胚胎培養(yǎng)環(huán)境的質(zhì)量控制和管理2020/11/327實驗室禁止使用酒精等可揮發(fā)性有機(jī)物和紫外照射可用蒸餾水擦拭臺面可用專用洗滌劑擦拭可能會被污染的臺面或者區(qū)域可使用吸塵器吸走灰塵培養(yǎng)箱的清潔和消毒實驗室的清潔2020/11/3281、溫度和濕度：37.0±0.1℃，>90%2、pH：7.1≤

pHi≤7.2，7.2≤pHe≤7.43、氣體：CO2和O24、滲透壓：270～290mOsm/kg胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)2020/11/329培養(yǎng)基的基本組成水：99%無機(jī)鹽：維持培養(yǎng)基的滲透壓和酸堿度碳水化合物：提供胚胎發(fā)育的能量氨基酸：促進(jìn)胚胎體內(nèi)外發(fā)育維生素：調(diào)控細(xì)胞代謝激素和生長因子：促進(jìn)胚胎發(fā)育大分子物質(zhì)：維持膠體滲透壓，中和毒素抗氧化劑：減少氧自由基對胚胎的損傷螯合劑：螯合重金屬離子抗生素：防止污染胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)2020/11/330培養(yǎng)液配制和平衡胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)2020/11/3312020/11/332單氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(21%)和N2(74%)三氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(5%)和N2(90%)優(yōu)勢：更接近生理狀態(tài)（2-8%O2）單氣培養(yǎng)和三氣培養(yǎng)2020/11/3331、精子的形態(tài)結(jié)構(gòu)精子和卵子精子形態(tài)精子變態(tài)示意圖2020/11/3342、卵子的形態(tài)結(jié)構(gòu)卵母細(xì)胞顆粒細(xì)胞復(fù)合體GV期MI期MII期2020/11/335異常卵母細(xì)胞2020/11/3361、常規(guī)體外授精體外授精精卵混合精卵結(jié)合2020/11/3372、卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）2020/11/338人胚胎體外發(fā)育2020/11/339異常受精單原核多原核三原核無原核2020/11/340胚胎發(fā)育階段：卵裂球的數(shù)目胚胎形態(tài)學(xué)評分：胚胎的碎片評分：卵裂期評分標(biāo)準(zhǔn)8-1-18-2-18-2-32020/11/3411期：囊胚腔小于胚胎體積的一半2期：囊胚腔大于胚胎體積的一半3期：完全囊胚，囊胚腔與胚胎體積相等囊胚的發(fā)育階段1期2期3期2020/11/3424期5期6期4期：擴(kuò)張囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明帶變薄5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出6期：完全孵化囊胚2020/11/343胚胎移植數(shù)目：35歲以下第一周期：2個35歲以上或者第二周期以上：3個單胚胎移植：胚胎移植2020/11/344胚胎移植管裝載胚胎移植管空氣空氣胚胎培養(yǎng)基2020/11/3451、精子冷凍：2、卵子冷凍：3、胚胎冷凍：4、生殖組織冷凍：配子和胚胎的冷凍及復(fù)蘇2020/11/346程序化冷凍（慢速冷凍）玻璃化冷凍（快速冷凍）冷凍方法2020/11/347Slowcooling-0.3°C/min慢速冷凍法將胚胎放入含有一定濃度的冷凍保護(hù)劑處理后，慢速降溫（0.2~3℃/min）,在這個過程中，隨著細(xì)胞外溫度的逐漸降低和細(xì)胞外冰晶的形成，細(xì)胞以一種平衡的方式逐步脫水。直到溫度降至-150℃，至于液氮保存。2020/11/348Vitrification

-50.000°C/min1sec.玻璃化冷凍法采用更高濃度的冷凍保護(hù)劑處理細(xì)胞，快速降溫，使細(xì)胞內(nèi)外的液體均達(dá)到玻璃化狀態(tài)2020/11/349玻璃化冷凍過程（兩步平衡法）在不同濃度的冷凍液中進(jìn)行平衡ESVS2020/11/3502.裝管3.投入液氮，在液氮罐中保存。2020/11/351冷凍前置入冷凍液后0min置入冷凍液后4min置入冷凍液后8min2020/11/352囊胚冷凍前人工皺縮皺縮前皺縮后2020/11/353控制性超排卵B超監(jiān)測下取卵體外受精和胚胎培養(yǎng)胚胎活檢對活檢的細(xì)胞進(jìn)行檢測選擇胚胎移植入宮腔植入前遺傳學(xué)診斷(PGD)2020/11/354常染色體隱性遺傳病β-thalassaemiaCysticfibrosisSpinalmuscularatrophySicklecelldisease常染色體顯性遺傳病Huntington’sdiseaseMyotonicdystrophyCharcot-Marie-Toothdisease性染色體遺傳病FragileXsyndromeDM