TSDAA 0083-2024 泰地羅新含量的測定高效液相色譜法

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任。本文件由山東省畜牧協(xié)會標準化技術(shù)委員會提出并歸口。本文件起草單位：山東省飼料獸藥質(zhì)量檢驗中心、山東久隆恒信藥業(yè)有限公司、山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司、艾美科?。ㄖ袊┥镝t(yī)藥有限公司、齊魯晟華制藥有限公司、山東魯抗舍里樂藥業(yè)有限公司高新區(qū)分公司、齊魯動物保健品有限公司、山東華辰生物化學有限公司、山東華辰制藥有限公司、山東德州神牛藥業(yè)有限公司、安池（山東）動物營養(yǎng)研究院有限公司、山東省蛋雞技術(shù)創(chuàng)新中心。本文件主要起草人：郭玉秋、湯文利、魏秀麗、趙曉雨、趙延東、李有志、章安源、馮雪蓮、武茂成、常雪、楊程程、王艷芬、梁萌、路雅蘭、夏光亮。本文件是首次發(fā)布。泰地羅新含量的測定高效液相色譜法本文件規(guī)定了泰地羅新含量的測定方法-高效液相色譜法（HPLC）和超高效液相色譜法本文件適用于泰地羅新原料含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理方法一：高效液相色譜法（HPLC）。流動相溶解樣品，高效液相色譜儀分離測定，依據(jù)保留時間定性，外標法定量。方法二：超高效液相色譜法（UPLC）。乙腈溶解樣品，超高效液相色譜儀分離測定，依據(jù)保留時間定性，外標法定量。5試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T6682一級水的規(guī)定。5.1乙腈（CH3CN色譜純。5.20.1%三氟乙酸溶液：精密量取三氟乙酸1mL，加水稀釋至1000mL，搖勻。5.30.05mol/L磷酸氫二鉀溶液：稱取磷酸氫二鉀8.2g，加水溶解，并稀釋至1000mL，加磷酸調(diào)pH至8.2。5.4流動相A：分別量取0.1%三氟乙酸溶液（5.2）900mL、乙腈（5.1）100mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。5.5流動相B：分別量取0.1%三氟乙酸溶液（5.2）100mL、乙腈（5.1）900mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。5.6流動相C：分別量取流動相A（5.4）900mL、流動相B（5.5）100mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。25.7流動相D：量取0.05mol/L磷酸氫二鉀溶液（5.3）450mL、乙腈（5.1）550mL，混勻，濾膜過濾，超聲5min。5.8泰地羅新對照品：純度≥98.0％。5.9泰地羅新對照品溶液A：精密稱取泰地羅新對照品（5.8）約50mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）2mL，用流動相C（5.6）溶解并稀釋至刻度，精密移取1mL置10mL棕色量瓶中，用流動相C（5.6）稀釋至刻度，搖勻，濾膜過濾。5.10泰地羅新對照品溶液B：精密稱取泰地羅新對照品（5.8）約75mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾膜過濾。6儀器設(shè)備6.1高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器或紫外檢測器。6.2超高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測器或紫外檢測器。6.3分析天平：精度0.0001g、0.00001g。6.4濾膜：有機，0.22μm。7樣品取樣品100g，混勻，裝入密閉容器中，備用。8試驗步驟8.1方法一：高效液相色譜法8.1.1供試品溶液制備精密稱取供試品約50mg，置50mL量瓶中，加乙腈（5.1）2mL，用流動相C（5.6）溶解并稀釋至刻度，精密量取1mL置10mL棕色量瓶中，用流動相C（5.6）稀釋至刻度，搖勻，濾膜過濾。8.1.2參考色譜條件a)色譜柱：C18，250mm×4.6mm，5μm或等效的色譜柱；b)流速：1.0mL/min；c)檢測波長：285nm；d)柱溫：室溫；e)進樣量：10μL；f)流動相：流動相C（5.6）。8.1.3測定8.1.3.1定性以保留時間定性，供試品溶液（8.1.1）泰地羅新色譜峰的保留時間與相應對照品溶液3（5.9）泰地羅新色譜峰的保留時間一致，相對偏差應在±2.5%。8.1.3.2定量取泰地羅新對照品溶液A（5.9）、供試品溶液（8.1.1）注入高效液相色譜儀，在8.1.2參考色譜條件下測定，記錄色譜圖（見附錄A圖A.1），以泰地羅新及泰地羅新異構(gòu)體峰面積之和計算，外標法定量。8.2方法二：超高效液相色譜法8.2.1供試品溶液制備精密稱取供試品約75mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾膜過濾。8.2.2參考色譜條件a)色譜柱：C18，2.1mm×100mm，1.7μm或等效的色譜柱；b)流速：0.5mL/min；c)檢測波長：289nm；d)柱溫：室溫；e)進樣量：1μL；f)流動相：流動相D（5.7）。8.2.3測定8.2.3.1定性以保留時間定性，供試品溶液（8.2.1）泰地羅新色譜峰的保留時間與相應對照品溶液（5.10）泰地羅新色譜峰的保留時間一致，相對偏差應在±2.5%。8.2.3.2定量取泰地羅新對照品溶液B（5.10）、供試品溶液（8.2.1）注入超高效液相色譜儀，在8.2.2參考色譜條件下測定，記錄色譜圖（見附錄A圖A.2），以泰地羅新及泰地羅新異構(gòu)體峰面積之和計算，外標法定量。9試驗數(shù)據(jù)處理供試品中泰地羅新含量以質(zhì)量分數(shù)ω計，數(shù)值以百分數(shù)（%）表示，按式（1）計算：（%）=×100%式中：A樣——供試品溶液中泰地羅新及泰地羅新異構(gòu)體峰面積的和；m對——泰地羅新對照品質(zhì)量，單位為克（gP——泰地羅新對照品含量，單位為百分數(shù)（%）；A對——對照品溶液中泰地羅新及泰地羅新異構(gòu)體峰面積的和；…(1)4m樣——供試品質(zhì)量，單位為克（g）。測定結(jié)果用平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點后1位。10精密度在重復性條件下，兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過其算術(shù)平均值的2.0%。5