天然牧草青貯營養(yǎng)品質(zhì)評價

1天然牧草青貯營養(yǎng)品質(zhì)評價本文件規(guī)定了天然牧草青貯飼料的術(shù)語和定義、質(zhì)量要求、衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、檢驗方法及分級判定規(guī)則。本文件適用于以天然牧草為原料加工成的青貯飼料營養(yǎng)品質(zhì)綜合評價和質(zhì)量分級。2規(guī)范性引用文件下列文件中內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款，其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6432GB/T6435GB/T6438飼料中粗蛋白的測定凱氏定氮法飼料中水分的測定飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T10468水果和蔬菜產(chǎn)品pH值的測定方法GB13078飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB/T20806飼料中中性洗滌纖維（NDF）的測定NY/T1459飼料中酸性洗滌纖維的測定NY/T2129飼草產(chǎn)品抽樣技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義3.1天然牧草nativegrass在天然草原生長的、可用于畜牧生產(chǎn)的飼草。3.2青貯ensiling在密封條件下，使青綠飼料在相當(dāng)長的時間內(nèi)保持其質(zhì)量相對不變的一種保鮮技術(shù)。3.3青貯品質(zhì)silagequality指青貯飼料的物理品質(zhì)和化學(xué)品質(zhì)。4質(zhì)量要求24.1感官要求4.1.1氣味酸香味、酒香味或醋酸味。4.1.2色澤接近原料的顏色，一般呈綠色、暗綠色、青綠色或黃綠色。4.1.3形態(tài)莖葉結(jié)構(gòu)清晰或基本保持原狀，松散、柔軟濕潤。4.2營養(yǎng)指標(biāo)天然牧草青貯飼料的發(fā)酵指標(biāo)及營養(yǎng)指標(biāo)應(yīng)符合表1的要求。pH>4.2，≤4.5>4.5，≤5.2>10.0，≤15.0>15.0，≤20.0≥65.075.0≥60.065.0>20.0，≤30.0>30.0，≤40.0->5.0，≤10.0≥8.010.0≥6.08.0>50.0，≤55.0>55.0，≤60.0>30.0，≤35.0>35.0，≤45.05衛(wèi)生指標(biāo)應(yīng)符合GB13078的要求。6檢測方法6.1抽樣按NY/T2129的規(guī)定執(zhí)行。6.2感官指標(biāo)檢驗6.2.1氣味在青貯常態(tài)下，貼近鼻尖嗅聞氣味。其結(jié)果應(yīng)符合4.1.1的要求。6.2.2色澤、形態(tài)在自然光下目測青貯樣品的色澤、形態(tài)，用手指捻。其結(jié)果應(yīng)符合4.1.2和4.1.3的要求。6.3營養(yǎng)指標(biāo)檢測6.3.1粗蛋白含量按GB/T6432的規(guī)定執(zhí)行。6.3.2中性洗滌纖維含量按GB/T20806的規(guī)定執(zhí)行。6.3.3酸性洗滌纖維含量按NY/T1459的規(guī)定執(zhí)行。6.3.4粗灰分含量按GB/T6438的規(guī)定執(zhí)行。6.3.5水分含量按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。6.3.6pH值按GB/T10468的規(guī)定執(zhí)行。6.3.7氨態(tài)氮按照附錄A的方法執(zhí)行。6.3.8有機酸按照附錄B的方法執(zhí)行。7分級判別規(guī)則按如下規(guī)則進(jìn)行分級判定：a）感官指標(biāo)符合4.1要求后，根據(jù)分級指標(biāo)定級；b）分級指標(biāo)均同時符合某一等級時，則判定所代表的該批次產(chǎn)品為該等級；c）分級指標(biāo)處于不同等級時，則按單項指標(biāo)所處最低等級定級。4附錄A氨態(tài)氮含量的測定方法A.1方法A.2原理試樣直接用水提取后，浸提液中NH4+在強堿性介質(zhì)與次氯酸鹽和苯酚發(fā)生反應(yīng)，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，其顏色深淺與溶液中NH4+含量呈正比。A.3試劑和材料A.3.1苯酚試劑將0.05g亞硝基鐵氰化鈉溶解在500mL蒸餾水中，再加入11mL苯酚溶液或9.0g結(jié)晶苯酚，混合均勻后定容到1000mL，貯藏于棕色試劑瓶中，低溫避光保存。A.3.2次氯酸鹽溶液將5.0g氫氧化鈉溶解在700mL的蒸餾水中，再加入20.1g磷酸氫二鈉，中火加熱并不斷攪拌至完全溶解。冷卻加入14.7mL含8.5%活性氯的次氯酸鈉溶液并混勻，定容到1000mL，貯藏于棕色試劑瓶中，低溫避光保存。A.3.3標(biāo)準(zhǔn)銨溶液稱取0.6607g經(jīng)100℃條件下烘干24h的（NH4）2SO4溶于水中，定容至100mL，配置成0.1mol/L的銨儲備液。將上述儲備液稀釋配置成1.0mmol/L、2.0mmol/L、3.0mmol/L、4.0mmol/L、5.0mmol/L五種不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)液。A.4儀器A.4.1分光光度計：配1cm石英比色皿。A.4.2天平：感量為0.0001g和0.01g。A.5分析步驟A.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取6個50mL容量瓶，分別吸取銨儲備液0.5m、1.0m、1.5m、2.0m、2.5mL并定容。配制成1.0mmol/L、2.0mmol/L、3.0mmol/L、4.0mmol/L、5.0mmol/L五種不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。取6支試管，分別向每支試管中加入50μL標(biāo)準(zhǔn)工作液，空白為50μL蒸餾水；向每支試管中加入2.5mL的5苯酚試劑，搖勻；再向每支試管中加入2mL次氯酸鈉試劑，混勻；將混合液在95℃水浴中加熱顯色反應(yīng)5min；冷卻后,在630nm波長下比色。以吸光度與標(biāo)準(zhǔn)液濃度為坐標(biāo)軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。A.5.2試樣溶液的測定向每支試管中加入50μL經(jīng)適當(dāng)倍數(shù)稀釋的試樣溶液，重復(fù)2次，空白為50μL蒸餾水。按標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測步驟測定試樣溶液的吸光度。以樣品的吸光度與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較求出含量。A.6結(jié)果計算試樣中氨態(tài)氮含量按式（A.1）計算：式中：X—試樣中氨態(tài)氮的含量，單位為克每千克（g/kg）；C—由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得試樣溶液中氨態(tài)氮的濃度，單位為毫摩爾每升（mmol/LV—制備青貯飼料浸提液時水的體積，單位為毫升（mL）；m—制備青貯飼料浸提液所用青貯飼料質(zhì)量，單位為克（gw—青貯飼料中水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)；n—樣品稀釋倍數(shù)；1000—換算系數(shù)。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算數(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。6附錄B有機酸含量的測定方法B.1方法高效液相色譜法。B.2原理根據(jù)浸提液中離子交換體和離子溶質(zhì)的靜電相互作用（排斥）進(jìn)行分離，以保留時間定性，外標(biāo)法定量。B.3材料和試劑所用試劑均為優(yōu)級純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。B.3.1試劑B.3.1.1高氯酸溶液稱取高氯酸0.8493g，加水定容至2000mL，混勻。B.3.2標(biāo)準(zhǔn)品B.3.2.1乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH5CHCOOH），純度≥99%。B.3.2.2乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH5COOH），純度≥99%。B.3.2.3丙酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH5CH2COOH），純度≥99%。B.3.2.4丁酸標(biāo)準(zhǔn)品（CH5CH2CH2COOH），純度≥99%。B.3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液B.3.3.1乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10mg/mL稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的乳酸0.1g（精確到0.0001g置于10mL容量瓶中，加超純水至刻度，混勻，于4℃保存。B.3.3.2乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（10mg/mL稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的乙酸0.1g（精確到0.0001g置于10mL容量瓶中，加超純水至刻度，混勻，于4℃保存。B.3.3.3丙酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5mg/mL稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的丙酸0.05g（精確到0.0001g置于10mL容量瓶中，加超純水至刻度，混勻，于4℃保存。7B.3.3.4丁酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5mg/mL稱取按其純度折算為100%質(zhì)量的丁酸0.05g（精確到0.0001g置于10mL容量瓶中，加超純水至刻度，混勻，于4℃保存。B.3.3.5乳酸、乙酸、丙酸、丁酸混合標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液：分別吸取各單標(biāo)儲備溶液0.25mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL和2.5mL于6個10mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，混勻，于4℃保存。B.3.4材料離子排阻色譜柱B.4儀器和設(shè)備B.4.1高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器或紫外檢測器。B.4.2天平：感量為0.0001g和0.01g。B.4.3玻璃砂芯真空過濾裝置。B.4.4水相型微孔濾膜：孔徑≤0.45μm。B.4.5注射器。B.4.6水系針筒過濾器：孔徑≤0.45μm。B.4.7超聲波清洗器。B.4.8高速離心機。B.5分析步驟B.5.1試樣處理青貯飼料浸提液12000r/min離心3min，取上清液經(jīng)水相濾膜過濾，注入高效液相色譜儀分析。B.5.2儀器參考條件B.5.2.1色譜柱：ShodexRsparkKC-811柱，8mm×300mm或同等性能的色譜柱。B.5.2.2流動相：用3mmol的高氯酸溶液，經(jīng)水相濾膜過濾，脫氣。B.5.2.3柱溫：50℃。B.5.2.4進(jìn)樣量：5μL。8B.5.2.5檢測波長：210nm。B.5.2.6流速：1mL/min。B.5.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中，測定相應(yīng)的峰高或峰面積。以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以色譜峰或峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。B.5.4試樣溶液的測定將待測液注入高效液相色譜儀中，得到峰高或峰