實驗十四 血清甘油三酯（TG）的測定

實驗十二血清甘油三酯（TG）的測定血清甘油三酯測定方法較多，但主要包括提取、吸附、皂化、氧化，還原及顯色等步驟。近年發(fā)展的酶學(xué)方法測定操作步驟雖然簡單，但要許多純酶制劑，此外還有光散射測定法，亦需要特點器材，故不易推廣使用，現(xiàn)介紹兩種常用的方法：一、酶法測定甘油三脂【原理】甘油三酯經(jīng)脂肪酶水解為甘油和脂肪酸，甘油和ATP在甘油激酶（GK）的作用下生成3－磷酸甘油和ADP，3－磷酸甘油經(jīng)磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羥丙酮和過氧化氫。過氧化氫、4－氨基替吡啉和苯酚在過氧化物酶（POD）的微化生成紅色的醌類化合物，顏色的深淺與含量成正比。反應(yīng)過程如下：1、TG甘油＋脂肪酸2、甘油＋ATP3－磷酸甘油＋ADP3、3－磷酸甘油＋O2磷酸二羥丙酮＋H2O24、H2O2＋4－氨基安替吡啉＋苯酚紅色醌類化合物【試劑】TC酶試劑盒（商品）【操作】取三支試管，按下表操作：標(biāo)準管測定管空白管血清（μl）—20—TG標(biāo)準液（μl）（2mg/ml）20——TG酶工作液（ml）1.01.01.0H2O（μl）——20混勻，37℃【計算】TG（mg%）×2×0.02×正常值：50－150mg％【注意事項】1、清晨空腹血清為好。2、干粉配成酶工作液后，在2—8℃【臨床意義】血清TG隨進食脂肪后即見上升并出現(xiàn)混濁。空腹脂肪餐后2—4小時內(nèi)，血清混濁度及甘油三酯含量達高峰，8小時后，基本恢復(fù)空腹水平。血清TG有隨年齡而上升的趨勢，體重超過標(biāo)準者也往往偏高。家庭性脂質(zhì)代謝紊亂、糖尿病、腎病綜合癥、糧原累積病、動脈粥樣硬化、酒精中毒、垂體、甲狀腺功能低下者、胰腺炎等疾病TG可增高。原發(fā)性β－脂蛋白缺乏、甲狀腺機能亢進、腎上腺皮質(zhì)機能不全等疾病TG均可降低。二、乙酰丙酮法【原理】血清中甘油三酯經(jīng)正庚烷一異丙醇混合溶劑抽提后，用氫氧化鉀溶液皂化成甘油，并進一步用過碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的存入下，甲醛與乙酰丙酮反應(yīng)生成3,5—二乙?！?,4—二氫二甲基吡啶，后者為帶熒光的黃色物質(zhì)。與同樣處理的標(biāo)準液比色計算，即得血清中甘油三酯的含量，反應(yīng)式如下：【試劑】1、抽提劑：正庚烷/異丙醇＝2/3.5（v/v）2、0.04MH2SO43、異丙醇（A.R）4、皂化試劑：取6.0gKOH溶于60ml蒸餾水中，然后取異丙醇40ml混合，置棕色瓶中室溫保存。5、氧化試劑：稱取65mg過碘酸鈉溶于約50ml蒸餾水，然后加入7.7g無水醋酸銨溶解，再加6ml冰醋酸，并加水至100ml。貯棕色瓶內(nèi)室溫保存。6、乙酰丙酮試劑：0.4ml乙酰丙酮加到100ml異丙醇中，混勻，置棕色瓶內(nèi)室溫保存。7、三油酸甘油酯標(biāo)準液：貯存液（10mg/ml）：精確稱取三油酸甘油酯1.000g，溶解于抽提劑中，定容至100ml，置冰箱存。應(yīng)用液（1mg/ml）：貯存液用抽提劑10倍稀釋，置冰箱保存。【操作】帶塞試管3支，編號，按下表操作：測定管標(biāo)準管空白管血清（ml）0.2——應(yīng)用標(biāo)準液（ml）—0.2—蒸餾水（ml）—0.20.2抽提劑（ml）2.52.32.50.04MH2SO4(ml)0.50.50.5邊加邊搖，加好后，劇烈振搖15分鐘，靜置分成二相后，準確吸取各管上層清液0.3ml，分別加至另外三支試管中。按下表操作： 異丙醇（ml）1.01.01.0皂化試劑（ml）0.30.30.3充分混勻，置65℃氧化試劑（ml）1.01.01.0乙酰丙酮試劑（ml）1.01.01.0混勻，置65℃【計算】甘油三酯mg=×0.2×=