PCR質(zhì)量手冊(cè)前言

文件編號(hào)

前言

某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建于2003年12月。實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、

設(shè)備及人員配置均嚴(yán)格按照部、省臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合

自身?xiàng)l件而建立。各項(xiàng)管理制度、質(zhì)量保證體系以及基本操作要求和標(biāo)準(zhǔn)操作程

序均已制定。

某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將面向全省衛(wèi)生系統(tǒng)，開展臨床基

因診斷實(shí)驗(yàn)和相關(guān)知識(shí)的培訓(xùn)工作，使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診斷基礎(chǔ)理論知

識(shí)、實(shí)驗(yàn)室管理和質(zhì)量保證措施、規(guī)范化操作方法以及了解基因診斷領(lǐng)域的進(jìn)展。

同時(shí)還將開展基因（主要是遺傳基因方面）的臨床檢測(cè)及科學(xué)研究工作，為我省

臨床基因診斷事業(yè)的發(fā)展做出一份貢獻(xiàn)。

質(zhì)量方針

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室是嚴(yán)格按照部、省臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)

進(jìn)行管理與操作，始終遵循：

以病人為中心

以質(zhì)量為核心

以科學(xué)為依據(jù)

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崗位職責(zé)

1.實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人崗位職責(zé)

（1）確定質(zhì)量方針，編制質(zhì)量手冊(cè)，并組織人員學(xué)習(xí)，統(tǒng)一思想。

（2）負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室全面質(zhì)量，包括試劑盒的質(zhì)量檢驗(yàn)；操作的質(zhì)量檢查；

質(zhì)量控制（室內(nèi)室間質(zhì)評(píng)）的結(jié)果檢查；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的核對(duì)、質(zhì)檢和簽發(fā)報(bào)告；確

定人員培訓(xùn)計(jì)劃；安排日常工作，確保及時(shí)發(fā)出質(zhì)量合格的報(bào)告。

（3）定期審核和評(píng)審質(zhì)量手冊(cè)的運(yùn)行情況。

（4）對(duì)實(shí)驗(yàn)室對(duì)內(nèi)外發(fā)出的報(bào)告負(fù)責(zé)，并以簽名簽字形式表示。

2.技術(shù)人員崗位職責(zé)

（1）按時(shí)消毒、清潔實(shí)驗(yàn)室，并記錄簽字。

（2）檢查儀器設(shè)備的維護(hù)狀況，記錄使用情況并簽字。

（3）按質(zhì)量手冊(cè)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）操作試驗(yàn)，并填寫報(bào)告簽字。

（4）按規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的自主質(zhì)控工作（每次試驗(yàn)必須有室內(nèi)質(zhì)控措施），

并做好記錄簽字。

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人員培訓(xùn)及成果

1.人員組成及技術(shù)檔案

本室有工作人員2人，其中1名中級(jí)，1名初級(jí)。

2.培訓(xùn)記錄及專業(yè)文章發(fā)表情況

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實(shí)驗(yàn)室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度

1、實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理平面圖：見圖示1。

2、實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)施：

分隔利面積：實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)，分隔為三個(gè)獨(dú)立的工作室：試劑準(zhǔn)備室、

樣品處理室、基因擴(kuò)增室。

工作流程：從試劑準(zhǔn)備一樣品處理一基因擴(kuò)增，工作人員只能單向流動(dòng)。進(jìn)

入下一區(qū)域，必須更換工作服、手套。

通風(fēng)：各室空氣流通性良好。

照明：室內(nèi)有良好的照明度。

環(huán)境：潔凈、無(wú)菌；各室均配有紫外消毒設(shè)備。

各室的儀器、實(shí)驗(yàn)和文具用具以及清潔物品均屬于各室專用。

3、實(shí)驗(yàn)室消毒隔離及污物處理：

見實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

4、實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度：

4.1總則

4.1.1進(jìn)入基因診斷實(shí)驗(yàn)室的任何工作人員都必須遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則；非工作

人員未經(jīng)允許不得入內(nèi)，尤其不得為找人而逆向誤入PCR實(shí)驗(yàn)室，以免造成不

應(yīng)有的污染。

4.1.2臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室分試劑準(zhǔn)備、樣品處理、基因擴(kuò)增室三個(gè)室，

各室擁有專用的儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)物品（含加樣器、試管架、吸頭、記錄紙、筆、

甚至清潔用品等），不得混用，須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別；試劑準(zhǔn)備室為白

色標(biāo)識(shí)、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)識(shí)、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)識(shí)。

4.1.3臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)具備醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、微生物學(xué)檢驗(yàn)基本

知識(shí)、大中專以上學(xué)歷、并受過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)和技能培訓(xùn)。

4.2.1進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的唯一流向的規(guī)定，嚴(yán)禁反向

流動(dòng)。

4.2.2進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，必須更換本室有顏色標(biāo)識(shí)的工作服（含帽和鞋）。勤換

洗工作服。

4.2.3接收樣品時(shí)應(yīng)檢查樣品是否符合要求、貼上標(biāo)簽并做好登記。

4.2.4實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，包括實(shí)

驗(yàn)室擦洗、臺(tái)面消毒，離心管、吸頭的無(wú)菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物處理等。

4.2.5進(jìn)入PCR實(shí)驗(yàn)室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室前區(qū)。

4.2.6任何實(shí)驗(yàn)操作包括儀器使用等情況均須做好記錄。

4.2.7檢測(cè)結(jié)果報(bào)告應(yīng)完整（包括：檢驗(yàn)項(xiàng)目、靶核酸類型及結(jié)果等），并

經(jīng)專業(yè)負(fù)責(zé)人審核簽字后方可發(fā)出。

4.2.8每天實(shí)驗(yàn)開始前，結(jié)束后均應(yīng)按要求清潔、消毒地面和實(shí)驗(yàn)臺(tái)面。

4.2.9保持臨床基因診斷實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。

4.2.10定期校準(zhǔn)和維修PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。

4.2.11實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得從事與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等；室內(nèi)禁用

電風(fēng)扇。

4.2.12每天下班前處理好廢棄物品，關(guān)好水、電和門窗。

4.3試劑準(zhǔn)備室

4.3.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴手套。

4.3.2每天實(shí)驗(yàn)開始前，清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。

4.3.3取出當(dāng)天實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑，其余試劑要立即收好，放回冰箱

內(nèi)。

4.3.4試驗(yàn)中使用的離心管、吸頭等應(yīng)經(jīng)過(guò)滅活無(wú)菌處理，（應(yīng)在消毒的有效

期內(nèi)）。

4.3.5其它室的用品不得帶入本室。

4.3.6每次試驗(yàn)均有記錄；且使用本室專用的、帶有本室標(biāo)識(shí)的記錄本、紙

筆。

4.3.7實(shí)驗(yàn)完畢后要整理、清潔工作臺(tái)面。

4.4樣品準(zhǔn)備室

4.4.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服。實(shí)驗(yàn)中須戴手套，手套

需常更換。

4.4.2每天實(shí)驗(yàn)開始前,清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。

4.4.3樣品的接受，登記，保存和提取按標(biāo)準(zhǔn)操作程序及試劑盒要求進(jìn)行。

4.4.4使用本室專用的，經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。

4.4.5做好實(shí)驗(yàn)記錄，并使用本室專用的記錄本和筆。

4.4.6PCR擴(kuò)增后區(qū)的物品不得帶入本室。

4.4.7實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并打開紫外燈消毒。

4.5基因擴(kuò)增室

4.5.1實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服.實(shí)驗(yàn)中須戴手套，手套

需常更換。

4.5.2每天實(shí)驗(yàn)開始前，清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并應(yīng)打開紫外燈消毒30分

453使用本室專用的，經(jīng)滅菌處理的加樣器和帶濾心的吸頭。

4.5.4需在此進(jìn)行操作的，如巢式擴(kuò)增，第一次擴(kuò)增的模板必須在本室內(nèi)從

反應(yīng)管中取出，并加入另一只反應(yīng)管中，此操作不可返回?cái)U(kuò)增前區(qū)進(jìn)行。

4.5.5非全封閉操作（即須開啟反應(yīng)管），應(yīng)打開排風(fēng)扇24小時(shí)排氣，保持

室內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)。

4.5.6做好實(shí)驗(yàn)記錄，且使用本室專用的記錄本和筆。

4.5.7PCR擴(kuò)增室的物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū)。

4.5.8實(shí)驗(yàn)完畢清潔實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)臺(tái)，并打開紫外燈消毒。

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儀器設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

1.儀器設(shè)備的配置

L1試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配置的設(shè)備：

紫外燈、普通高速臺(tái)式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套連續(xù)可調(diào)式移液槍和無(wú)菌

過(guò)濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無(wú)菌備用的離心管、PCR反應(yīng)管和玻

璃器皿、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張；

本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。

1.2樣品制備室內(nèi)配置的設(shè)備：

紫外燈、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套連續(xù)可調(diào)式

移液槍、無(wú)菌過(guò)濾咀型移液器槍頭、冰箱、各種規(guī)格的無(wú)菌備用的離心管和玻璃

器皿、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的樣品登記本、文具、紙張；

本室專用的藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。

1.3基因擴(kuò)增室內(nèi)配置的設(shè)備：

紫外燈、PCR擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)臺(tái)及本室專用的文具、紙張；

本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。

2.儀器設(shè)備的使用、維護(hù)及校準(zhǔn)

見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

3.儀器設(shè)備的記錄和標(biāo)識(shí)

所有有關(guān)基因診斷實(shí)驗(yàn)室儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)的操作均記錄備案。校準(zhǔn)后

的儀器貼上標(biāo)識(shí)，說(shuō)明校準(zhǔn)E期和狀態(tài)。

4.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

陽(yáng)性、陰性對(duì)照：來(lái)源于相應(yīng)的檢測(cè)試劑盒。

室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評(píng)物：來(lái)源于衛(wèi)生部和省臨檢中心C

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校準(zhǔn)

1.移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對(duì)檢測(cè)結(jié)果有效性、準(zhǔn)確性有影響的檢驗(yàn)

設(shè)備，投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn)，并每年校準(zhǔn)1次。

2.參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評(píng)。

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檢驗(yàn)方法

1.檢驗(yàn)項(xiàng)目及方法

項(xiàng)目：乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)、丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)

方法：TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)

TaqMan熒光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)

2.操作手冊(cè)

儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序

實(shí)驗(yàn)過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)操作程序（包括：試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)

SOP）

各檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)操作程序

實(shí)驗(yàn)室消毒及污物處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序

3.質(zhì)量保證措施

室內(nèi)質(zhì)控

3.1核酸提取質(zhì)控在核酸提取中，帶一份弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)

控樣本（基質(zhì)與待測(cè)樣本相同），分別判定核酸提取的有效性和核酸提取過(guò)程中

是否發(fā)生污染。

3.2核酸擴(kuò)增質(zhì)控靶核酸為DNA：帶一份弱陽(yáng)性靶DNA質(zhì)控和一份陰

性質(zhì)控，以判定DNA擴(kuò)增的有效性；

靶核酸為RNA：一份弱陽(yáng)性cDNA質(zhì)控、一份弱陽(yáng)性RNA質(zhì)控和一份陰性對(duì)照

以判定轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增的有效性

3.3產(chǎn)物檢測(cè)質(zhì)控一份靶DNA或已稀釋的擴(kuò)增靶DNA陽(yáng)性質(zhì)控、一份

陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測(cè)的擴(kuò)增樣本同步檢測(cè)，以判定產(chǎn)物檢測(cè)中

核酸雜交及顯色測(cè)定的有效性。

室間質(zhì)控

參加由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的全國(guó)臨床基因擴(kuò)增項(xiàng)目的室間質(zhì)

量評(píng)價(jià)。

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文件編號(hào)__________________________版UU本-Jr-第AA,一版lUX

樣品處置

1.樣本的標(biāo)識(shí)：標(biāo)識(shí)由三部分構(gòu)成一標(biāo)本采集日期、該檢測(cè)批次的標(biāo)本序

號(hào)和標(biāo)本類型，三部分間無(wú)間隔符號(hào)，例如：絲竺魚魚也分別表示年、月、

日、序號(hào)和血液標(biāo)本，序號(hào)(01-99),整個(gè)標(biāo)識(shí)為8Tl位；

2.樣本的采集、保存和運(yùn)輸：見樣品采集、保存及運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

3.樣本的接收、記錄：樣品接收后，立即貼上本室設(shè)計(jì)的樣品標(biāo)識(shí)，并在

接收標(biāo)本記錄表上按要求進(jìn)行登記。

無(wú)簽、遲送的樣品、樣品量不足、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品，

拒絕接收并記錄于拒收標(biāo)本登記表。

4.樣本的處理：見樣品制備標(biāo)準(zhǔn)操