（高清稿）DB50∕T 1607-2024 水生動物細(xì)菌性病原菌耐藥檢測技術(shù)規(guī)范

ICS65.150CCSB52DB50IDB50/T1607—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由重慶市水產(chǎn)技術(shù)推廣總站提出。本文件由重慶市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委員會歸口并組織實施。本文件起草單位：重慶市水產(chǎn)技術(shù)推廣總站、中國水產(chǎn)科學(xué)研究院長江水產(chǎn)研究所、西南大學(xué)、重慶市水產(chǎn)學(xué)會。本文件主要起草人：張利平、王波、陳波、李虹、梅會清、翟旭亮、廖雨華、周勇、朱成科、卓東渡、馮俊、薛明洋、薛洋、徐鳳、甘婷婷、吳曉清、周春龍、劉曉莉、何忠誼。1DB50/T1607—2024水生動物細(xì)菌性病原菌耐藥檢測技術(shù)規(guī)范本文件規(guī)定了水生動物細(xì)菌性病原菌耐藥檢測的試劑、儀器設(shè)備、藥敏實驗、結(jié)果判定、無害化處理和病原微實驗室生物安全等技術(shù)要求。本文件適用于水生動物細(xì)菌性病原耐藥檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法SC/T7015病死水生動物及病害水生動物產(chǎn)品無害化處理規(guī)范SC/T7028水產(chǎn)養(yǎng)殖動物細(xì)菌耐藥性調(diào)查規(guī)范通則SC/T7201.1魚類細(xì)菌性病檢疫技術(shù)規(guī)程第1部分：通用技術(shù)WS233病原微生物實驗室生物安全通用準(zhǔn)則WS/T639抗菌藥物敏感性試驗的技術(shù)要求3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。最低抑菌濃度Minimalinhibitoryconcentration；MIC在藥物敏感性檢測實驗中能抑制肉眼可見微生物生長的最低抗菌藥物濃度。敏感Susceptible；S當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC處于敏感范圍時，使用推薦劑量進行治療，該藥在感染部位通常達(dá)到的濃度可抑制被測菌的生長，臨床治療可能有效。耐藥Resistant；R當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC處于該分類范圍時，該藥物濃度不能抑制細(xì)菌的生長，和（或）被測菌株獲得特殊耐藥機制，臨床治療效果不佳。4試劑實驗實驗用水、NaCl、腦心浸液肉湯、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基。試劑配制應(yīng)符合附錄A的規(guī)定。實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級水的規(guī)定。23DB50/T1607—20248無害化處理實驗過程中所用的器皿、耗材及產(chǎn)物均需要經(jīng)過121℃,15min高壓滅菌后，方可處置。9生物安全防護實驗人員必須穿著合適的實驗服、佩戴好口罩、帽子及一次性手套。進行活體處理或接觸含有微生物的物品后，要洗手。離開實驗室前要脫掉手套，一次性手套不得清洗和再次使用。如果發(fā)生污染性物質(zhì)溢出等事故，應(yīng)及時向?qū)嶒炇邑?fù)責(zé)人報告，并記錄經(jīng)過和處理方案。禁止在實驗室飲食、吸煙、化妝和儲存食物。非工作人員禁止進入實驗室。4DB50/T1607-2024試劑配制A.1滅菌生理鹽水A.1.1配方NaCl8.5g水1000mLA.1.2配制混勻，121℃高壓滅菌15min，備用。A.2腦心浸液（BHI）肉湯A.2.1配方腦心浸液肉湯培養(yǎng)基50.0g水1000mLA.2.2配制混勻，加熱使之完全溶解，用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH,使滅菌后為7.2～7.4。分裝燒瓶，121℃,高壓滅菌15min。4℃保存?zhèn)溆?。A.3腦心浸液（BHI）瓊脂平板A.3.1配方腦浸液瓊脂培養(yǎng)基24.5g水1000mLA.3.2配制混勻，加熱使之完全溶解，用1mol/L的NaOH或HCl調(diào)節(jié)pH,使滅菌后為7.2～7.4。分裝燒瓶，121℃,高壓滅菌15min，冷卻至50℃左右，制成平板。4℃保存?zhèn)溆谩?DB50/T1607—202496孔板藥敏板的制備B.1試劑和材料B.1.1抗菌藥物標(biāo)準(zhǔn)品恩諾沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、鹽酸多西環(huán)素、氟甲喹、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺甲噁唑+甲氧芐啶B.1.2溶劑與稀釋劑各藥物的溶劑與稀釋劑見表B.1。試驗用水應(yīng)符合GB/T6682中三級水的要求表B.1抗菌藥物儲備液所用的溶劑和稀釋劑水水水水水水水水水水水注1：復(fù)方藥物，先單獨配置與儲存，做藥物敏感性試驗時，再按B.1.3抗菌藥物稀釋取滅菌的BHI肉湯，在無菌96孔板的第1孔加入160μL。在第2孔至第10孔中分別加人100μL。在第1孔中加人抗菌藥儲備液40μL，吹打混勻;取第1孔中的含藥肉湯100μL至第2孔中吹打混勻；吸取第2孔中的100μL含藥肉湯至第3孔中吹打混勻，重復(fù)上述操作,將藥物進行2倍梯度稀釋，當(dāng)?shù)?2孔稀釋完后吸出l00μL含藥肉湯棄去，使含有藥物的BHI肉湯每一孔均為l00μL。其中坐標(biāo)G11、G12、H11、H12，各加100μLBHI肉湯，作為陽性對照孔和陰性對照