中間球海膽增養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)范 第2部分良種生態(tài)適應(yīng)性評價（征求意見稿）

DB22TechnicalspecificationforaevaluationonecologicaladaptabilityofimprovedvarietiesofStrongylocentrotusint：）本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。本文件起草單位：……。本文件主要起草人：……。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（沈陽市和平區(qū)太原北街2號），聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：遼寧省大連市大連海洋大學(xué)（大連市沙河口區(qū)黑石礁街52號），聯(lián)系電話義、評價指標、試驗設(shè)置、評價方法和評價結(jié)果的本文件適用于遼寧省海域中間球海膽良種工廠化養(yǎng)殖、吊籠養(yǎng)殖推廣的生態(tài)適應(yīng)性評價工作。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有中間球海膽良種在某一種不良環(huán)境因子脅迫培養(yǎng)條件下，能正常生長發(fā)育的環(huán)境因子的限值。中間球海膽良種機體對環(huán)攪中異?；虿涣嫉拿{迫因子所引起的非特異性、生理性緊張狀態(tài)評價指標包括環(huán)境耐受指數(shù)、生長指數(shù)、抗病害指數(shù)3個其中：環(huán)境耐受指數(shù)包括低鹽耐受能力、高溫耐受能力和低氧耐受能力3個二級指標，通過環(huán)境耐受試驗獲得。生長指數(shù)包括自然成活率和體重增加率2個二級指標評抗病害指數(shù)包括病害發(fā)生率和病害死亡率2個二級指標，通過養(yǎng)殖中試試驗獲得。特異性分子標記指數(shù)包括耐低鹽分子相關(guān)標記、耐低氧分子相關(guān)標記、耐高溫分子相關(guān)標記、抗病害分子相關(guān)標記4個二級指標評價。環(huán)境耐受試驗包括：低鹽耐受試驗、高溫耐受試驗和低氧耐受試驗。環(huán)境因子耐受試驗梯通過把中間球海膽浸泡在含有不同濃度的燦爛弧菌海水中進行攻毒，設(shè)置3個試驗梯度，表2抗病害試驗梯度設(shè)置病菌梯度1梯度2梯度3燦爛弧菌1×103CFU/mL1×105CFU/mL1×107CFU/mL選擇具有穩(wěn)定遺傳的優(yōu)良性狀的中間球海膽良種，規(guī)格13g-21g。選取活力良好、低鹽耐受試驗共設(shè)置5個鹽度梯度（表1），每組放置15只中間球海膽。其他環(huán)境參數(shù)與暫養(yǎng)條件相同。試驗所用不同鹽度海水為砂濾后的自然海水添加淡水調(diào)配至相應(yīng)鹽度備用。按高溫耐受試驗共設(shè)置6個水溫梯度（表1），其他設(shè)置同5.1.3。試驗所用不同溫度海水砂濾后的自然海水經(jīng)加熱棒加熱至相應(yīng)溫度備用。按照每天升溫0.5°C對中間球海膽良種進行馴化，以水溫升至相應(yīng)水溫梯度作為試驗起始低氧耐受試驗共設(shè)置5個溶解氧梯度（表1），其他設(shè)置同5.1.3。試驗所用氧氣濃度的海水為砂濾后的自然海水沖入氮氣達到對應(yīng)的實驗溶解氧濃度備用。按照每天DO降低或升高0.5抗病害試驗共設(shè)置3個病菌濃度梯度（表2），其他設(shè)置同5.1.3.驗所用氧氣濃度的海水為砂濾后的自然海水沖入氮氣達到對應(yīng)的實驗溶解氧濃度備用。經(jīng)暫養(yǎng)后將海水每天升溫1℃至中間球海膽良種置于60L塑料水槽中培養(yǎng)，在試驗期間24h充氣，投喂海帶，每日投喂1試驗周期60d。每日觀察中間球海膽良種的生理狀態(tài)、掉刺等應(yīng)激反應(yīng)或死亡的中間球海膽良種個數(shù)。以中間球海膽良種出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)或死亡作為環(huán)境因子耐受能力標志，中間球海膽良種發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)或死亡時的環(huán)境因子梯度值代表中間球海膽良種對該環(huán)境因子的耐受能力限海膽投放前進行數(shù)量統(tǒng)計。對每只個體進行稱重，稱完后立即放入水槽中。海膽實驗過程中如果有病害發(fā)生，要對病害發(fā)生期間發(fā)病個體數(shù)量和死亡個體數(shù)量進行統(tǒng)計，對死亡個體及時清除。試驗結(jié)束時，再次進行個體稱重和數(shù)量統(tǒng)計。統(tǒng)計結(jié)果按公式(1)-(4)計算:Wt=W2?W1…………………(2)式中S表示成活率(%)，表示個體增重(g)，F(xiàn)表示病害發(fā)生率(%)，Dr表示病害死亡率(%)，N1為試驗開始時個體總數(shù)量(只)，N2為試驗結(jié)束時個體總數(shù)量(只)，W1為試驗開始時個體平均重量,(g)，W2為試驗結(jié)束時個體平均重量(g)，S為發(fā)生病害個體數(shù)量(只)，S1為病害死亡個體數(shù)量(只)Aiai123耐低鹽能力(‰)C1耐低氧能力（mg/L）C346中間球海膽生態(tài)適應(yīng)性評價方法中間球海膽生態(tài)適應(yīng)性計算公式按（5）計算：式中，A表示中間球海膽生態(tài)適應(yīng)性指數(shù)，數(shù)值越高表明適應(yīng)能力越強；Ai表示第i個評價指標的權(quán)重值，Bi為第i個評價指數(shù)的評價值，見表1。各指數(shù)計算公式按（6）計算：式中，Bn表示B1（環(huán)境耐受指數(shù)）、B2（生長指數(shù)）、B3（特異分子標記穩(wěn)定性指數(shù)），數(shù)值越高表明適應(yīng)能力越強；ai表示第i個評價內(nèi)容的權(quán)重值，其值利用層次分析法確定，F(xiàn)i為第i個評價內(nèi)容的賦值，見表3。7評價結(jié)果當2.5<A≤3時，生態(tài)適應(yīng)性