【課件】動物細(xì)胞融合和單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選修3

動物細(xì)胞融合與單克隆抗體一、動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或兩個以上的細(xì)胞融合為一個細(xì)胞的過程，融合后形成的具有兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。1.概念：2.種類：⑴自然發(fā)生：⑵人工誘導(dǎo)：常用誘導(dǎo)因素：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。受精卵用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞膜融合→細(xì)胞質(zhì)融合→_______融合細(xì)胞核融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個完整的雜交細(xì)胞。仙臺病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）①什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。②滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理進(jìn)一步思考：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞一、動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或兩個以上的細(xì)胞融合為一個細(xì)胞的過程，融合后形成的具有兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。1.概念：2.種類：⑴自然發(fā)生：⑵人工誘導(dǎo)：常用誘導(dǎo)因素：聚乙二醇（PEG）、滅活的病毒、電激等。受精卵3.動物細(xì)胞融合的原理：細(xì)胞膜的流動性4.動物細(xì)胞融合技術(shù)的意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能項目動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理融合前提誘導(dǎo)方法結(jié)果意義細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性和植物細(xì)胞的全能性使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙分散成單個細(xì)胞去除細(xì)胞壁聚乙二醇、離心、振動、電激、聚乙二醇、離心、振動、電激、滅活病毒獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株1、抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。并且每一個B淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。回顧2、獲得抗體的傳統(tǒng)方法是什么？有何缺陷？從血清中分離抗體多種漿細(xì)胞動物體內(nèi)多種抗體抗原血清抗體（多克隆抗體）由血清中提取的抗體是由不同漿細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬種以上，稱為多克隆抗體。產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差。該法制備抗體的特點(diǎn)：單克隆抗體克隆

一個B淋巴細(xì)胞細(xì)胞群抗體問題：如何才能讓B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量的單一抗體？1.在體外培養(yǎng)的條件下，一個B淋巴細(xì)胞能不能無限增殖？不能2.什么細(xì)胞能無限增殖？癌細(xì)胞3.有什么方法將這兩種細(xì)胞的特點(diǎn)結(jié)合起來？細(xì)胞融合一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細(xì)胞1975年英國科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的實(shí)驗融合細(xì)胞：B-B;B-瘤；瘤-瘤一選：選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞B淋巴細(xì)胞Ｄ途徑、Ｓ途徑骨髓瘤細(xì)胞Ｄ途徑Ｂ－ＢＤ途徑、Ｓ途徑能合成DNA，但不能大量增殖瘤－瘤Ｄ途徑不能合成DNA，不能大量增殖Ｂ－瘤Ｄ途徑、Ｓ途徑能合成DNA，能大量增殖細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。①人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。②鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。

你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？小資料：在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖細(xì)胞！融合細(xì)胞：B-B;B-瘤；瘤-瘤一選：選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活二選：選出能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞雜種細(xì)胞特點(diǎn)：既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生專一抗體?？寺』囵B(yǎng)抗體檢測篩選出能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行3～4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，再由這些單細(xì)胞克隆生長，然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。單克隆抗體的制備——專一抗體檢驗陽性和克隆化培養(yǎng)多孔培養(yǎng)板用有限稀釋法進(jìn)行單克隆陽性孔融合細(xì)胞：B-B;B-瘤；瘤-瘤一選：選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活二選：選出能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)

(培養(yǎng)液）小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)（腹水）獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞單克隆抗體克隆化培養(yǎng)抗體檢測雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖特點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備注射特定抗原免疫技術(shù)技術(shù)單抗隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑

用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強(qiáng)，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。

單抗隆抗體的應(yīng)用②定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像單抗放射性同位素③用于治療疾病和運(yùn)載藥物

制成生物導(dǎo)彈，主要用于癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準(zhǔn)確殺傷癌變細(xì)胞?！吧飳?dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭1．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的 B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ2.用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，科學(xué)家得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）

A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞B.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.不經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞A3.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞

③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞

④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞

⑤雜交瘤細(xì)胞

A.②④B．①③⑤

C．①②③④

D．②③C4.研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（）A.利用單克隆抗體特異性地對抗癌細(xì)胞B.以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C.抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D.單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合D下列各圖表示單克隆抗體制備過程的各階段圖解，按要求回答問題：(1)請用箭頭把代表各圖解的字母按單克隆抗體制備過程的順序連接起來，順序是：___________________。制備操作至少要進(jìn)行_________次細(xì)胞篩選。(2)由圖中可看出，單克隆抗體制備過程運(yùn)用了___________和___________的動物細(xì)胞工程技術(shù)手段，前者常用的誘導(dǎo)劑與植物原生質(zhì)體融合不同的是可用______________。(3)生產(chǎn)上一般不能通過直接培養(yǎng)圖A中的細(xì)胞的方法生產(chǎn)單克隆抗體的主要原因是：_________。(4)圖F中的抗體與普通血清抗體相比較，具有_____________________的特點(diǎn)。單克隆抗體可以作為診斷試劑的原理是：_______________。

二動物細(xì)胞融合

動物細(xì)胞培養(yǎng)

滅活的病毒該細(xì)胞高度分化，不能增殖特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高一種抗體只能與特定的抗原發(fā)生特異性結(jié)合動物細(xì)胞融合和動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備