細(xì)菌室操作規(guī)程

細(xì)菌室操作規(guī)程

鶴壁市中醫(yī)院檢驗(yàn)科

（完整版）微生物室sop文件

目錄

第一篇細(xì)菌室操作程序文件

1.細(xì)菌室人員崗位職責(zé)....................................................。1

2.標(biāo)本采集及保存要求.......................................................3

3.顯微鏡檢查法操作規(guī)程....................................................5

4.細(xì)菌室標(biāo)本操作流程.......................................................6

5.細(xì)菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程..................................................8

6.細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定及其它實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程...............................11

7.細(xì)菌的接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程.......................................17

8.支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程..............................19

9.血液感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程..........................................20

10.中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程...............................22

11.下呼吸道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程....................................24

12.尿路感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程..........................................26

13.消化道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程.......................................29

14.膿汁及病灶分泌物細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)操作規(guī)程...............................31

15.生殖系統(tǒng)標(biāo)本的處理.....................................................33

16.抗菌藥物敏感試驗(yàn)........................................................34

第二篇醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)

17.消毒滅菌效果監(jiān)測(cè).......................................................37

18.環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測(cè)........................................................。38

19.采樣及檢查原則..................。..........。.........................。39

20.各部位的消毒..............................................................43

細(xì)菌室人員崗位職責(zé)

1、上班后先搞好室內(nèi)衛(wèi)生、核查各個(gè)培養(yǎng)箱、冰箱的工作溫度是否在設(shè)定的范圍內(nèi)，并做

好記錄。檢查各種儀器工作是否正常，做好記錄。

2、接收樣本：核對(duì)各樣本號(hào)與申請(qǐng)單聯(lián)號(hào)是否一致，如不一致馬上與病房聯(lián)系以便作出相

應(yīng)的處理，如退單或重送樣本等，并做好聯(lián)系情況的記錄。核查各送檢樣本是否符合要求。

①痰液樣本：先看外觀、再直接涂片鏡檢，以白細(xì)胞225個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞W10

個(gè)/低倍鏡視野，為合格痰液。

②無菌體液樣本:檢查各種無菌體液樣本的盛放器皿是否符合要求。

③容易干燥的樣本：對(duì)一些容易干燥的樣本如大便、咽拭子、膿液拭子、泌尿生殖道拭子

等是否已經(jīng)干燥.

對(duì)不符合要求的樣本必需與臨床聯(lián)系，以便作出相應(yīng)處理，方法如聯(lián)號(hào)不符的樣本，做好記錄.

對(duì)符合的樣本進(jìn)行原始單的登記.

3、樣本編號(hào)：對(duì)符合的樣本作出編號(hào)，普通細(xì)菌培養(yǎng)：痰液、咽拭子、血液增菌培養(yǎng)、尿液、

胸、腹水、腦脊液、膽汁、膿液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培養(yǎng)。在各種培養(yǎng)基上及申請(qǐng)

單上編號(hào)的同時(shí)均需明確標(biāo)明接種日期。

4、樣本接種：

①血液、骨髓、腹水、關(guān)節(jié)液等：增菌培養(yǎng)瓶；

②痰液、咽拭子：血平板、麥康凱平板；

③尿液:血平板、麥康凱平板；

④大便致病菌：SS平板;

⑤腦脊液：血平板、巧克力平板；

⑥分泌物的淋球菌培養(yǎng)接種：淋球菌專用平板；

⑦支原體培養(yǎng)+藥敏：按說明書接種支原體專用培養(yǎng)基。

對(duì)以上接種樣本的當(dāng)前編號(hào)應(yīng)記錄于登記本上。此外對(duì)痰、膿液、腦脊液等在接種的同時(shí)應(yīng)

對(duì)其沉渣進(jìn)行革蘭染色，如有細(xì)菌和或何種細(xì)菌為主立刻通知臨床，并做好記錄。

5、查對(duì)昨天移種平板申請(qǐng)單及原始登記本，確定標(biāo)本移種是否正確。觀察血液增菌培養(yǎng)瓶,

如發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長，馬上涂片革蘭染色，將細(xì)菌的染色特性及形態(tài)報(bào)告給臨床，并做好記錄，同

時(shí)進(jìn)行移種。

6、觀察平板，挑取可疑菌落涂片革蘭染色，并做好細(xì)菌的鑒定與藥敏實(shí)驗(yàn)工作.

7、檢查各種培養(yǎng)基及試劑的庫存量，做好需配制培養(yǎng)基或購買試劑的交班工作.

8、定期做好本室所用鑒定和藥敏試條的質(zhì)控，做好記錄。

9、每天必須消毒平板、基礎(chǔ)培養(yǎng)基等用于常規(guī)醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)，另外根據(jù)具體情況即時(shí)準(zhǔn)備好

各種中和劑、無菌瓶等，對(duì)48小時(shí)的空氣培養(yǎng)出報(bào)告，同時(shí)注意是否有致病菌、菌落數(shù)是否超

標(biāo).

10、工作完成后注意對(duì)工作臺(tái)面進(jìn)行消毒、室內(nèi)進(jìn)行消毒。

標(biāo)本采集及保存要求

1、總則：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格無菌操作和及時(shí)送檢，檢測(cè)后標(biāo)本應(yīng)妥

善保存。

2、臨床標(biāo)本的采集

2.1、下呼吸道分泌物（痰液）

令患者早上起床后用清水瀚口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑

料痰盒中，及時(shí)送檢。

2.2、尿液（中段尿）

護(hù)理人員協(xié)助采取中段尿約3ml入無菌塑料盒中，及時(shí)送檢。

203、糞便

取有粘液、膿血部分的糞便置無菌塑料盒中及時(shí)送檢。

204、眼、耳、鼻、喉拭子

將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水（如沾取的太多，可在無菌生理鹽水瓶壁上擠去多余的水

份），然后采取可疑部位的分泌物，倒懸于無菌塑料盒中，及時(shí)送檢。

2.5、膿液

用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭置于無菌塑料盒中，及時(shí)

送檢。

2.6、血液

2。6。1、凡懷疑菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量在未使用抗菌素前采血，如

已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低時(shí)采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集

血培養(yǎng)標(biāo)本。當(dāng)然在病人發(fā)熱或寒顫時(shí)采集也可。

2。6.2、成人每次采血5~10m1,小兒采血3~5ml。

2.6o3、嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)，

輕輕搖勻。

2O6.4、從抽血到接種入瓶，動(dòng)作要快，防止血液凝固，同時(shí)要及時(shí)送檢。

2.7、穿刺液

胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液，嚴(yán)格無菌抽取后，注入含肝素抗凝的無菌試管中，

輕輕顛倒試管10余次，使肝素與穿刺液混勻達(dá)到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養(yǎng)瓶內(nèi)及時(shí)

送檢。

2.8、膽汁

由?？漆t(yī)生以無菌方法取引流液10m1注入無菌塑料盒內(nèi)。

2。9、腦脊液

以無菌方法取腦脊液3?5ml,置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無菌注入

血培養(yǎng)瓶內(nèi)，及時(shí)送檢.

2o10、生殖器官標(biāo)本

陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌塑料盒內(nèi)送檢。

如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時(shí)，采集的標(biāo)本應(yīng)床旁接種并及時(shí)放入孵箱培養(yǎng)。

2。11、燒傷標(biāo)本

以無菌棉拭子直接采取多個(gè)部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌塑料盒中。

2。12、支原體（解腺、人型）培養(yǎng)+藥敏的標(biāo)本采集

2。12。1、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)盡快接種支原體運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。

2.12.2、男性：用細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi)2~2。5cmo

3、臨床標(biāo)本的保存

細(xì)菌室標(biāo)本原則上要求及時(shí)送檢、及時(shí)處理，不得保存。

顯微鏡檢查法操作規(guī)程

顯微鏡檢查是細(xì)菌鑒定工作中的一重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒別，同時(shí)對(duì)下一步鑒定工

作起著重要的指導(dǎo)作用。有時(shí)通過形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖

道分泌物中的淋病奈瑟菌等。顯微鏡檢查有不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法兩種.

1、不染色標(biāo)本的檢查：不染色標(biāo)本主要用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。

1。1、壓滴法：用接種環(huán)取細(xì)菌懸液2環(huán)，置于清潔載玻片中央，覆上蓋玻片，于高倍鏡下

觀察.制片時(shí)菌液要適量，不可有氣泡，不可外溢.

1.2、懸滴法：取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各1塊，將凹孔四周的平面上涂上一層凡士林,

取一環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹面向下，對(duì)準(zhǔn)于蓋玻片的液滴上，然后迅速翻轉(zhuǎn)

玻片，用小鑲子輕壓蓋玻片使之與凹孔邊緣粘緊。鏡下觀察時(shí)先低倍后高倍，不可壓碎蓋玻片。

有動(dòng)力的細(xì)菌可見細(xì)菌從一處移到另一處，無動(dòng)力的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng)而無位置的改變.螺旋體由

于菌體纖細(xì)、透明，需用暗視野顯微鏡觀察其形態(tài)、活動(dòng)。

2、染色標(biāo)本檢查法：通過對(duì)標(biāo)本的制片及染色，能觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小、排列、染色特

性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等結(jié)構(gòu)，有助于細(xì)菌的初步鑒定.

2O1、快速革蘭染色法

2.1.1、操作見試劑說明書

2.1o2、結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

2o1O3、注意事項(xiàng)：染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜

過度，菌齡為18?24小時(shí)為佳。

2。2、抗酸染色法

2。2.1、操作見試劑說明書

2.2.2、結(jié)果：抗酸桿菌呈紅色。

2O2。3、注意事項(xiàng)：每一張玻片只能涂一份標(biāo)本且不能在染色缸中染色，以免造成不同標(biāo)本

間的交互污染從而導(dǎo)致陰陽性結(jié)果混淆，至無紅色液體流下.

3、墨汁負(fù)染鏡檢：背景著色而菌體不著色的染色法，用以觀察新型隱球菌的寬厚莢膜等.

菌室標(biāo)本操作流程

1、標(biāo)本的接受

1.1、標(biāo)本接受的時(shí)間：原則上全天任何時(shí)間均可。

1o2、標(biāo)本的接受：接受標(biāo)本者要認(rèn)真核對(duì)標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢驗(yàn)單要求是否相符以及

標(biāo)本的質(zhì)量等。

1.3、把接受的標(biāo)本編號(hào)。

2、臨床標(biāo)本的接種

2.1、檢驗(yàn)?zāi)康氖羌?xì)菌培養(yǎng)+藥敏試驗(yàn).各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇如下：

2.1o1培養(yǎng)基的選擇

標(biāo)本類型培養(yǎng)基

血血培養(yǎng)瓶

中段尿血平板、麥康凱平板

腦脊液血平板、巧克力平板

穿刺液血平板、麥康凱平板

膽汁血平板、麥康凱平板

呼吸道標(biāo)本血平板、麥康凱平板

糞便標(biāo)本SS平板

病灶分泌物血平板、麥康凱平板

2.1.2、生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗(yàn)項(xiàng)目接種相應(yīng)的平板，操作如下：淋球菌培養(yǎng)

接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基；支原體培養(yǎng)則按《支原體培養(yǎng)的操作規(guī)程》

操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng)，則接種血平板和巧克力平板；衣原體抗原檢測(cè)的按《衣原體抗原檢測(cè)的

操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn).

2O2、接種的方法：標(biāo)本做分區(qū)劃線。

2。3、檢驗(yàn)?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按《找抗酸桿菌的操作規(guī)程》進(jìn)行檢驗(yàn)。

3、所接種的平板必須寫上標(biāo)本的編號(hào)和接種的日期，然后根據(jù)要求進(jìn)行培養(yǎng)。

4、標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間

平板培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間

血平板孵箱、35—37℃、18-24小時(shí)

巧克力平板孵箱、35—37℃、18-24小時(shí)

淋球菌平板孵箱、35-37℃、18—24小時(shí)

沙保羅平板孵箱、28-31°C、24—36小時(shí)

其他的平板孵箱、35—37℃、18-24小時(shí)

5、根據(jù)生長在平板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色、鏡檢等來綜合判斷細(xì)菌形態(tài)和染

色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的常規(guī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。

6、結(jié)果的報(bào)告

確認(rèn)細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果后，進(jìn)行檢驗(yàn)驗(yàn)單結(jié)果報(bào)告的存盤、打印.

7、對(duì)各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求進(jìn)行無害化處理。

細(xì)菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程

1、不染色標(biāo)本的檢查

壓滴法和懸滴法。主要用于檢查生活狀態(tài)下的細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。將特制好的標(biāo)本置

于顯微鏡載物臺(tái)中央，先以低倍鏡觀察，再用高倍鏡觀察。

結(jié)果：有鞭毛的細(xì)菌呈穿梭似流星狀運(yùn)動(dòng)（有明顯的方向性）；無鞭毛的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng)（只

在原地顫動(dòng)而無位置的改變）0

2、細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查

染色的第一步是制作涂片。菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水I滴，置玻片上，用接種針挑取菌落,

在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì)改變菌細(xì)胞原有的排列形式，或造

成細(xì)菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜

過高，以玻片背面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否則可能使細(xì)胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色.

2.1、革蘭染色

本染色是最基本的染色法，可用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果將細(xì)菌分為革蘭陽性(紫

色)和革蘭陰性(紅色)兩類.

2.1.1、試劑

(1)結(jié)晶紫溶液

A液：結(jié)晶紫2g

95%乙醇20ml

B液：草酸錠0o8g

蒸館水80ml

需在用前24h將A液、B液混合，過濾后裝入試劑瓶內(nèi)備用。

(2)碘液

碘lg

碘化鉀2g

蒸館水300ml

碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續(xù)加入少量蒸餌水

至完全溶解。最后補(bǔ)足水量。

也可用少量蒸儲(chǔ)水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。

(3)脫色液：95%乙醇。

(4)復(fù)染液

A.貯存液：沙黃2.5g

95%乙醇100ml

B.應(yīng)用液：A液10ml

蒸譙水90ml

染色方法：

(1).涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染1min,清水沖去染液。

(2).加碘液染1min,水洗.

(3).加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約10?30s,至無紫色脫落為止，水洗.

(4).加復(fù)染液，染30s,水洗。

(5).干后鏡檢。

2O2、抗酸染色

抗酸染色直接用于痰標(biāo)本時(shí)，可以適當(dāng)增加標(biāo)本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時(shí)，

須掌握復(fù)染色時(shí)間.如果背景過深，影響鏡檢。

奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時(shí)，呈現(xiàn)兩種現(xiàn)象，視野中有些菌陽

性，另外一些則陰性；有時(shí)同一個(gè)菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時(shí)應(yīng)予注意.

試劑

(1)、石炭酸復(fù)紅溶液

堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液10ml

5%石炭酸溶液90ml

(2)、脫色劑

濃鹽酸3ml

95%乙醇97ml

(3)、復(fù)染液(呂弗勒美藍(lán)液)

美藍(lán)乙醇飽和溶液30ml

10%氫氧化鉀0o1m1

蒸館水100ml

染色方法

(1)、涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰，持續(xù)

約5min(若染色奴卡菌需要加長時(shí)間)，水洗。

(2)、加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紅色脫落為止，水洗。

(3)、加復(fù)染液，染0.5?Imin,水洗。

(4)、干后鏡檢.分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。

注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用2%硫酸水溶液。

2.3、墨汁莢膜染色

用于觀察菌體有無莢膜結(jié)構(gòu)，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。

傳統(tǒng)的方法是用印度墨汁，但目前國內(nèi)無售.常規(guī)工作可以用墨汁或墨水代替，但應(yīng)注意顆

粒不能太粗，否則影響觀察結(jié)果。有人用5%黑色素水溶液做染料，效果較好。

試劑

印度墨汁或5%黑色素水溶液。

染色方法

將標(biāo)本與1滴染色液在載玻片上混合，加上蓋玻片，輕輕壓一下，使標(biāo)本混合液變薄。在

低倍鏡下尋找有莢膜的菌細(xì)胞。找到后，轉(zhuǎn)換高倍鏡確認(rèn)。

細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定及其它試驗(yàn)操作規(guī)程

1、氧化-發(fā)酵試驗(yàn)（0-F試驗(yàn)）

原理：細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型.可以進(jìn)行無氧降解

的，稱為發(fā)酵型（發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無氧的條件下均能分解葡萄糖）。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為

產(chǎn)堿型。

方法：將待檢細(xì)菌同時(shí)穿刺接種兩支Hugh-Leifson培養(yǎng)基，其中一支培養(yǎng)基滴加無菌石蠟

（或其它礦物油），高度不少于Icm。35℃,24小時(shí)或更長。

結(jié)果：培養(yǎng)基變黃表示細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，兩支培養(yǎng)基均無變化為產(chǎn)堿型或不分解糖型；

兩支培養(yǎng)基均均產(chǎn)酸為發(fā)酵型。若僅不加石蠟的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵細(xì)菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型，而后者均為氧化型或

產(chǎn)堿型。也可用于葡萄球菌與微球菌問的鑒別。

2、B-半乳糖普酶（0NPG）試驗(yàn)

原理：細(xì)菌產(chǎn)生半乳糖甘酶，分解鄰一硝基酚B-D-半乳糖昔（無色）生成鄰一硝基酚（黃

色）。

結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反應(yīng)，一般在20—30分鐘內(nèi)顯色.

應(yīng)用：主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。

3、七葉昔水解試驗(yàn)

原理：有的細(xì)菌可將七葉苔分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng)基中的枸檬酸鐵的二價(jià)鐵

離子反應(yīng)，生成黑色的化合物。

結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變色為陰性。

應(yīng)用：主要用于D群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別。前者為陽性，后者為陰性。也可用于革蘭

陰性菌與厭氧菌的鑒別。

4.甲基紅試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步分解，產(chǎn)生甲酸、

乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH值降至4.5以下，加入甲基紅呈現(xiàn)紅色為陽性。若細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)

生的酸少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他產(chǎn)物，則培養(yǎng)基pH值仍在6.2以上，加入甲基紅呈現(xiàn)

黃色為陰性。

結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽性，橘紅色為弱陽性。黃色為陰性。

應(yīng)用：主要用于鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌，前者陽性，后者陰性。此外腸桿菌科中變形桿菌

屬、沙門菌屬、枸檬酸桿菌屬和志賀菌屬等陽性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性。

5、VP試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫叛產(chǎn)生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿

性環(huán)境中，氧化為二乙酰，與精氨酸中的麻基作用生成紅色化合物。

結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性，如無紅色出現(xiàn)且于35℃4h后仍如故者即為陰性。

應(yīng)用：本試驗(yàn)與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者通常為陰性.

6、呷喋（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

原理：細(xì)菌分解蛋白陳中的色氨酸產(chǎn)生呻喋（靛基質(zhì)），加入對(duì)位二甲基苯甲醛生成紅色玫

瑰呻喋。

結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性.

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定。

6、尿素分解試驗(yàn)

原理:具有尿素酶（尿酶）的細(xì)菌，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，培養(yǎng)基變堿。

結(jié)果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變色為陰性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定，奇異變形桿菌、普通變形桿菌為陽性，

克雷伯菌屬、枸椽酸菌屬、雷氏普羅威登菌和摩根摩根菌為陽性。

7、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)

原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氯酶使苯丙氨酸脫氨生成苯丙酮酸，加入FeCL生成綠色

化合物。

結(jié)果：出現(xiàn)綠色為陽性，應(yīng)立即觀察結(jié)果，延長會(huì)引起退色。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定，變形桿菌屬、普羅威登斯菌和摩根摩根菌均為陽性.腸桿菌

科其它菌均為陰性.

8、氨基酸脫竣酶試驗(yàn)

原理：具有氨基酸脫叛酶的細(xì)菌，分解氨基酸脫段生成胺和C02使培養(yǎng)基變堿,指示劑改變顏

色。

結(jié)果：對(duì)照管應(yīng)呈黃色，測(cè)定管呈紫色（指示劑為潼甲酚紫）為陽性。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。

9、氧化酶試驗(yàn)

原理：氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶.具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C

氧化，再由氧化型細(xì)胞色素C使對(duì)苯二氮氧化.生成有色醍類化合物。

結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈紫色為陽性.為保證結(jié)果準(zhǔn)確性，應(yīng)作陰、陽性對(duì)照。

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別，前者為陰性。后者為陽性。

10、過氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）

原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)

氣泡。

試劑：3%過氧化氫溶液

方法：取菌置于潔凈的試管或玻片上，然后滴加3%過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3%過氧化

氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)基中，立即觀察結(jié)果。

結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生為陽性。不產(chǎn)生氣泡為陰性。

應(yīng)用：革蘭陽性球菌中，葡萄球菌和微球菌均陽性。而鏈球菌均陰性。

11、硝酸鹽還原試驗(yàn)

原理：包括兩個(gè)過程：一是在合成過程中，硝酸鹽還原為亞哨酸鹽和氨。再由氨轉(zhuǎn)化為氨基

酸和細(xì)菌內(nèi)其它含氮化合物。二是在分解代謝過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系

統(tǒng)中的受氫體，能使硝酸鹽還原的細(xì)菌從哨酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其它還原性產(chǎn)物。

結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。若加入試劑后無顏色變化反應(yīng)，可能是①硝酸鹽沒有被還原，試驗(yàn)

陰性。②硝酸鹽被還原為氨和氮等其它產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性，這時(shí)應(yīng)加入少許鋅粉，如出現(xiàn)紅色

則表明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。若仍不產(chǎn)生紅色，表明為試驗(yàn)為假陰性。

應(yīng)用：本試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用廣泛。

12、氧化酶（改良法）試驗(yàn)

試劑：

四甲基對(duì)苯二胺（TMPD）6o0g

二甲基亞狙（DMSO）100.oml

溶解TMPD于DMSO中，置于避光玻塞瓶中，可在室溫中保留幾個(gè)星期。

方法：被檢菌株移種于7%羊血瓊脂上，30℃需氧條件下孵育15?18h,刮取菌落涂布于無色

濾紙片上，加I滴上述試劑，陽性者在2min內(nèi)呈深藍(lán)色。

若被測(cè)菌株移種在蛋白陳酵母浸出液瓊脂上，至少孵育3天以上，才可檢測(cè)，陽性反應(yīng)

5~10min出現(xiàn)。

13、CAMP試驗(yàn)

原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的B-溶血素溶解紅細(xì)胞活性，因此

在兩菌的交界處溶血力增加。出現(xiàn)矢形（半月形）的溶血區(qū)。

結(jié)果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽性

應(yīng)用：在鏈球菌中，只有B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽性。

14、0/129抑菌試驗(yàn)

原理：0/129（二氨基喋噫）對(duì)弧菌屬、鄰單胞菌屬細(xì)菌有抑制作用，而對(duì)氣單胞菌無抑制作

用.

方法:將待檢菌均勻涂布于堿性瓊脂平板上，鑲?cè)?/129紙片（含藥40ug）貼于平板上，35℃,

18?24h,觀察結(jié)果.

結(jié)果：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，無抑菌環(huán)為耐藥

應(yīng)用：弧菌屬、鄰單胞菌屬對(duì)0/129敏感，而氣單胞菌屬耐藥

15、桿菌肽試驗(yàn)

原理:A群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎全部敏感，而其它鏈球菌絕大多數(shù)對(duì)其耐藥.

16、奧普托欣試驗(yàn)

原理：幾乎所有的肺炎鏈球菌對(duì)Optochin敏感，而Optochin對(duì)其它鏈球菌則無抑制作用

17、.H2s試驗(yàn)

原理：有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱胺酸、半胱胺酸）產(chǎn)生硫化氫，硫化氫

遇到鉛或亞鐵離子，則生成黑色的硫化鉛或硫化鐵。

結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變?yōu)殛幮浴?/p>

應(yīng)用：主要用于腸桿菌科屬或種的鑒定。

18、觸酶試驗(yàn)（過氧化氫酶試驗(yàn)）

試劑：3%H202溶液，置棕色瓶內(nèi)于4℃陰暗處保存。

方法：先挑取固體培養(yǎng)基上的菌落，置于潔凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液1?2

滴。靜置之，Imin內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡的為陽性，不產(chǎn)生氣泡的為陰性。

19、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子試驗(yàn)

葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)被廣泛地用于常規(guī)鑒定金黃色葡萄球菌與其他葡萄球菌。試管法凝固

酶試驗(yàn)稱為葡萄球菌凝固酶，玻片法為檢測(cè)凝聚因子。

19o1凝聚因子試驗(yàn)：取1滴蒸儲(chǔ)水于潔凈的玻片上，用接種環(huán)挑取待檢菌一環(huán)置于蒸惚水

中，制成濃的菌懸液，無自凝現(xiàn)象。然后加一環(huán)家兔血漿混合，10s內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)明顯細(xì)菌

凝塊為陽性，否則為陰性。如超過10s可出現(xiàn)假陽性，有10%~15%金黃色葡萄球菌呈假陰性，

因此必須用試管法驗(yàn)證凝聚因子試驗(yàn)。

操作過程中的注意點(diǎn)：

(1)10s內(nèi)觀察結(jié)果。

(2)必須制備濃厚的均勻菌懸液。

(3)用EDTA抗凝的兔血漿為最好。

(4)加血漿后不要再混攪，以免細(xì)菌凝塊分散變小。

(5)生長在高鹽培養(yǎng)基上的菌落可出現(xiàn)自凝或假陽性。

19.2葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)：用生理鹽水將血漿4倍稀釋，取0。5mlo然后挑取3?5個(gè)菌落

于稀釋血漿中，成濃菌懸液。置37℃水浴，3?4h后讀取結(jié)果，凝固者為陽性。若陰性，繼續(xù)

觀察到24h,不凝固者為陰性。試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)作陽性、陰性對(duì)照.

試管法葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)陽性者，應(yīng)見到明顯的纖維蛋白凝膠塊，出現(xiàn)羊毛狀或纖維狀

沉淀物并非真正凝固，應(yīng)判為陰性.中間型葡萄球菌、豬葡萄球菌需要較長時(shí)間孵育，才可出現(xiàn)

陽性。凝固酶試驗(yàn)應(yīng)考慮下述情況：

①某些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生溶纖維蛋白酶，溶解纖維蛋白凝塊。

②所用血漿缺乏纖維蛋白原。

③試驗(yàn)菌株不純。

結(jié)果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無自凝現(xiàn)象判為陽性；試管法以血漿凝

固為陽性.

應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，也是葡萄球菌鑒別時(shí)常用的一個(gè)試驗(yàn)。

20、新生霉素耐藥試驗(yàn)

方法：挑取待檢菌菌落數(shù)個(gè)，制成相當(dāng)0o5號(hào)麥?zhǔn)瞎?McFarland)濃度菌液，棉拭子浸透，

擠去多余液，均勻涂在M—H平板上，貼上含5ug/片的新生霉素紙片，35℃孵育16?20h,抑

菌環(huán)直徑W16為陽性(耐藥)。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以金黃色葡萄球菌ATCC25923做陰性(敏感)對(duì)照，以

確認(rèn)紙片是否有效。

細(xì)菌的接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程

一、細(xì)菌的接種

根據(jù)待檢標(biāo)本的來源、培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的接種方法。

I、平板畫線分離法

(1)、連續(xù)畫線分離法此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本.用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板I/5處

密集涂布，然后回來作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。

(2)、分區(qū)畫線分離法此法適用于雜菌較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板邊緣一小區(qū)

(約占平板1/5)，再在二、三區(qū)依次連續(xù)畫線，每畫線一區(qū)均將接種針滅菌一次.每一區(qū)的劃線

均接觸上一區(qū)的接種線1?2次。以獲得單個(gè)菌落.

2、斜面接種法

該法主要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)。用滅菌接種針取菌少許，從培養(yǎng)基斜面底部向上劃一直

線，然后從底部向上作連續(xù)曲線畫線.一直畫到斜面頂端。

3、液體接種法

多用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種.用滅菌接種環(huán)取菌少許，在試管內(nèi)壁與液面交接處的管

壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混合于液體中。

4、穿刺接種法

主要用于半固體培養(yǎng)基、明膠及雙糖鐵的接種。用接種針取菌少許，從半固體培養(yǎng)基中央，

平行于管壁垂直刺入，接近管底但不可接觸管底，然后接種針原路退出.

5、傾注平板法

臨床上主要用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。將標(biāo)本經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取一定量加入已滅菌的平

皿內(nèi)，傾入已經(jīng)溶化并冷卻至45℃左右的定量培養(yǎng)基，混勻，待凝固后倒置、培養(yǎng)。

6、涂布接種法

常用于紙片藥物敏感性測(cè)定，也可用于被檢標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù).加定量的被檢菌液于瓊脂平板

表面，然后用滅菌的棉簽反復(fù)涂布幾次，使被檢菌均勻分布在瓊脂平板表面。然后貼上藥敏紙

片培養(yǎng)，或直接培養(yǎng)觀察結(jié)果.

二、細(xì)菌培養(yǎng)方法

根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同的環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng).常用的有需氧培養(yǎng)法、

二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。

1、需氧培養(yǎng)法

本法是臨床細(xì)菌室常用的培養(yǎng)方法，即將已經(jīng)接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等。置于

35℃溫箱中孵育18?24小時(shí).

2、二氧化碳培養(yǎng)法

本室用CO?孵箱將已接種好的培養(yǎng)基置于CO?孵箱內(nèi)培養(yǎng).

三、分離及純化法

3.1、分離是指從原材料或多種細(xì)菌的混合培養(yǎng)物中將各種細(xì)菌彼此獨(dú)立地分離開，以得到

純的單一菌株，技術(shù)步驟如下：

作純培養(yǎng)分離時(shí)，一般只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只平板中

可劃3~5個(gè)區(qū).劃法有兩種：

3.1.1、從臨床標(biāo)本分離細(xì)菌所含菌數(shù)相對(duì)較少時(shí)，可用接種環(huán)取標(biāo)本涂布在平板一角邊緣,

然后從此區(qū)開始劃線至1/3平板，為第一區(qū)，再在2、3區(qū)依次劃線，每劃完一個(gè)區(qū)域均將接種

環(huán)滅菌一次，冷卻后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線廣2次，使菌量

逐漸減少以獲得單個(gè)菌落。

3o1.2、快速劃線分離法：采用快速劃線使一接種環(huán)標(biāo)本能分離出單個(gè)菌落，這與標(biāo)本的

菌量及操作者的技能有很大關(guān)系。

3.2、純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的方法，所用平板大小可根據(jù)需要的菌量而定。方法是

將一單個(gè)菌落或?qū)⑾嗤木渥鞔罅棵芗縿澯谄桨迳隙@得大量純的培養(yǎng)物。

支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程

1.原理及依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：

支原體分離鑒定培養(yǎng)基用于泌尿生殖道支原體（解臊支原體Uu和人型支原體Mh）的檢測(cè)與

診斷。當(dāng)有Uu和Mh生長，分解尿素和精氨酸引起PH上升，使以酚紅為指示劑的培養(yǎng)基由黃轉(zhuǎn)

紅。依據(jù)珠海迪爾生物工程有限公司生產(chǎn)的試劑盒說明書。

2.標(biāo)本的采集：

2。1、男性：用特別細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌生理鹽水少許深入尿道口內(nèi)2~2.5cm處取分

泌物，前列腺液亦可用沾取無菌生理鹽水的無菌棉拭子盡量多的沾取。

202、女性：用沾取少許無菌生理鹽水的棉拭子取宮頸內(nèi)口1?2cm處單層柱狀上皮細(xì)胞,

取樣拭子不可碰陰道壁.

2.3、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢。整個(gè)采樣過程應(yīng)注意無菌操作。

3、標(biāo)本接種：(本實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意無菌操作，避免污染雜菌)

3。1、取出培養(yǎng)基，放置接近室溫，并在瓶蓋上編號(hào)。

3o2、將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶中，在靠近液面上方的瓶壁擠示壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使

拭子中標(biāo)本滲入到肉湯中：若為液體標(biāo)本，取200u1加入培養(yǎng)基中；若為中段尿，經(jīng)3000轉(zhuǎn)

/分離心15分鐘取沉渣10Oul加入培養(yǎng)基中。

3.3、蓋上瓶蓋,置35~37℃孵箱，在24?48小時(shí)分別觀察結(jié)果。

4、結(jié)果判讀：

培養(yǎng)基變紅，判斷陽性，培養(yǎng)基黃色并清亮，判斷陰性。

5、已檢標(biāo)本處理：密閉容器高壓滅菌后，按醫(yī)用垃圾處理。

血液感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、標(biāo)本采集

(1)、采集時(shí)間和次數(shù)血標(biāo)本一般應(yīng)在病人發(fā)熱初期或根據(jù)不同的發(fā)熱情況在未用抗生素前

采集做細(xì)菌培養(yǎng)，提高陽性率需連續(xù)三次采血進(jìn)行培養(yǎng).

(2)、采血部位及抽血量一般抽取肘靜脈血.采血量為成人5~10ml,兒童為3?5ml。

(3)、結(jié)果觀察：培養(yǎng)72小時(shí)后若肉眼或自動(dòng)血液培養(yǎng)儀報(bào)告仍未細(xì)菌生長，則盲目移種

一次，仍未細(xì)菌生長，向臨床發(fā)出一級(jí)初級(jí)報(bào)告：“血液經(jīng)72小時(shí)培養(yǎng)無細(xì)菌生長"，為避免漏

診，應(yīng)在培養(yǎng)5天、7天時(shí)再作盲目移種培養(yǎng)。疑為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、真菌血癥等時(shí)，血

培養(yǎng)至少連續(xù)培券2?3周，仍無細(xì)菌生長方可報(bào)告為陰性。

2、檢驗(yàn)程序血液標(biāo)本（無菌采集）

I

72h盲目移種

（初級(jí)報(bào)告）

I

有細(xì)菌生長

涂片、染色、鏡檢需氧培養(yǎng)、C02培養(yǎng)直接藥敏試驗(yàn)

觀察菌落

初步報(bào)告

涂片、染色、鏡檢純培養(yǎng)

血清學(xué)鑒定、生化反應(yīng)試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)

確認(rèn)報(bào)告

3、血培養(yǎng)瓶中不同表現(xiàn)為不同細(xì)菌生長：

渾濁并有凝無塊金黃色葡萄球菌

均勻渾濁，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣多為革蘭陰性菌

微渾濁，有綠色變化肺炎鏈球菌

表面有菌膜,培養(yǎng)基清晰，底層溶血枯草桿菌

表面有菌膜，膜下有綠色渾濁銅綠假單胞菌

血細(xì)胞層上面有顆粒狀生長，自上而下的溶血溶血性鏈球菌

4、血液及骨髓標(biāo)本中常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

肺炎鏈球菌大腸埃希菌

金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌

表皮葡萄球菌變形桿菌

溶血性鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌

糞腸球菌肺炎克雷伯氏菌

銅綠假單胞菌

糞產(chǎn)殮桿菌

沙雷氏菌

流感嗜血桿菌

布魯氏菌

5、報(bào)告結(jié)果

血培養(yǎng)陽性均作為危急值報(bào)告，所以血培養(yǎng)的結(jié)果應(yīng)及時(shí)通知臨床醫(yī)生，每日開始工作可

以首先檢查血培養(yǎng)，如有細(xì)菌生長，立即處理。

501、疑有細(xì)菌生長者，經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢后，電話通知主治醫(yī)生，報(bào)告“疑有革

蘭氏XX菌生長”。并做藥敏試驗(yàn)，報(bào)告初步結(jié)果。

5。2、經(jīng)分純培養(yǎng)完成鑒定及藥敏試驗(yàn)，發(fā)出報(bào)告。

503、培養(yǎng)7天仍為陰性的標(biāo)本，報(bào)告無細(xì)菌生長。

臨床上診斷為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎者，可持續(xù)培養(yǎng)至兩周再發(fā)陰性報(bào)告。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程

I、標(biāo)本采集以無菌方法采集腦脊液2~5ml,盛于無菌瓶中送檢.

2、直接檢查腦脊液可直接涂片、革蘭染色或抗酸染色等，然后鏡檢。無色透明的腦脊液,

應(yīng)作離心取沉淀物涂片、染色鏡檢。

3、檢驗(yàn)步驟:

3o1、一般細(xì)菌涂片檢查除結(jié)核性腦膜炎外，由其它細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎，腦脊液明

顯混濁，可直接涂片，革蘭染色鏡檢。無色透明的腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)

染色及形態(tài)特征可初步提示細(xì)菌的種類。結(jié)核分枝桿菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物（3000r

/min。30min）作抗酸染色。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物作墨汁負(fù)染色。

3.2、分離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分別接種于血平板、巧克

力平板，巧克力平板應(yīng)置于CO2環(huán)境中35℃培養(yǎng)18?24小時(shí)。腦脊液也可直接注入血培養(yǎng)瓶。

腦脊液

4、檢驗(yàn)程序

直接涂片（取離心沉淀）分離培養(yǎng)

血平板、巧克力平板

沙氏培養(yǎng)基、血平板

不染色標(biāo)本染色標(biāo)本（5%CO2環(huán)境）

V

革蘭染色抗酸染色

一般細(xì)菌

V新生隱球菌等

腦膜炎奈瑟菌

動(dòng)力試驗(yàn)

V

墨汁染色V

一般細(xì)菌

結(jié)核分枝桿菌

腦膜炎奈瑟菌生化鑒定、血清學(xué)鑒定

藥敏試驗(yàn)

▼V

初步報(bào)告報(bào)告

5、腦脊液培養(yǎng)常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌

A、B群鏈球菌卡他布蘭漢菌

肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌

結(jié)核分支桿菌腸桿菌科菌種

產(chǎn)單核李斯特菌腦膜敗血性黃桿菌

新型隱球菌假單胞菌

白色念珠菌

6、報(bào)告結(jié)果

無論是涂片還是培養(yǎng)，一但見到陽性菌應(yīng)立即通知臨床醫(yī)師.培養(yǎng)并經(jīng)鑒定的結(jié)果報(bào)告“X

X菌"，同時(shí)報(bào)告藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

下呼吸道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、標(biāo)本的采集

有自然咳痰法、咽拭子采集法、支氣管鏡下采集法及分泌物標(biāo)本.

2、標(biāo)本的直接檢查

(1)、將痰標(biāo)本涂片后待干，固定、染色，或直接濕片鏡檢，對(duì)病原學(xué)早期、初步診斷有重

要意義。并向臨床發(fā)出初級(jí)報(bào)告.

(2)、一般認(rèn)為合格的痰標(biāo)本為：以白細(xì)胞225個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞W10個(gè)/低倍

鏡視野。采集合格標(biāo)本對(duì)細(xì)菌的診斷尤為重要。

3、分離培養(yǎng)與鑒定

(1)、一般要求下呼吸道感染培養(yǎng)的細(xì)菌濃度應(yīng)＞10'CFU/ml,可視為病原菌，VO'CFU/ml可

視為污染菌。若介于兩者之間105~106CFU/ml時(shí)，要連續(xù)分離培養(yǎng)兩次以上仍為105—106CFU/

ml時(shí)，亦認(rèn)為是病原菌。

(2)、檢驗(yàn)程序

痰液及下呼吸道分泌物

涂片、染半、鏡檢血平板離麥康凱平板

*

初步報(bào)告菌落觀察

涂片、染色、鏡檢純培養(yǎng)細(xì)菌

鑒定試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)

報(bào)告

4、下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟氏菌

化膿性鏈球菌流感嗜血桿菌

肺炎鏈球菌腸桿菌科細(xì)菌

結(jié)核分支桿菌非發(fā)酵菌

白喉棒狀桿菌嗜肺軍團(tuán)菌

假絲酵母菌

5、報(bào)告結(jié)果

痰中的病原菌不少屬于機(jī)會(huì)致病菌，與正常菌群同時(shí)存在，報(bào)告時(shí)應(yīng)作說明，未檢出致病菌

時(shí)，應(yīng)報(bào)告“無致病細(xì)菌生長”。

尿路感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、尿液培養(yǎng)常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌淋病奈瑟菌

腸球菌大腸埃希菌

A群鏈球菌變形桿菌

腐生葡萄球菌肺炎克雷伯菌

表皮葡萄球菌產(chǎn)氣腸桿菌

結(jié)核分支桿菌沙門菌種

銅綠假單胞菌

沙雷菌

2、標(biāo)本收集

2.1、尿液標(biāo)本的采集可采用多種方法：有中段尿采集法、膀胱穿刺法、腎盂尿采集法，而

常規(guī)是取中段尿作細(xì)菌培養(yǎng)。

2。2、取中段尿作培養(yǎng)時(shí)先要進(jìn)行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄生菌群污染標(biāo)本。

2.3、如采用其他方法收集標(biāo)本，必須由臨床醫(yī)生根據(jù)臨床診斷需要而執(zhí)行收集術(shù)，并在檢

驗(yàn)單上寫明。

3、檢驗(yàn)步驟

3O1、涂片檢查

3.1.1、一般細(xì)菌及淋病奈瑟菌涂片：以無菌操作吸取尿液10ml,3000r/min離心15min,

去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報(bào)告.如查見革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形位于細(xì)

胞內(nèi)或細(xì)胞外，報(bào)告“找到革蘭陰性雙球菌，存在于細(xì)胞內(nèi)外，形似淋病奈瑟菌”。如未查見上述

細(xì)菌可報(bào)告“未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌”。

3.1.2、念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清潔玻片上，覆以蓋玻片，制成涂片，用高倍鏡檢

查。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生抱子和假菌絲，就可報(bào)告“霉菌袍子及菌絲”。

3O1.3、結(jié)核分枝桿菌：取尿液10ml,4000r/min離心30min,取沉淀物涂片，抗酸染色，

鏡檢。如找到紅色桿菌，可報(bào)告“查到抗酸桿菌”。

3.2、一般細(xì)菌培養(yǎng)（細(xì)菌計(jì)數(shù)）：用定量接種環(huán)取尿液10uI接種血平板，35℃培養(yǎng)18—

24小時(shí)，觀察有無細(xì)菌生長，并計(jì)數(shù)菌落數(shù)，乘以1000,求出每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特

征、涂片染色結(jié)果，進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)，如培養(yǎng)48小時(shí)無菌生長，即報(bào)告“無細(xì)菌生長"。

3.3、特殊菌培養(yǎng)：淋病奈瑟菌培養(yǎng)，選用專用巧克力瓊脂平板，接種后放入二氧化碳環(huán)境

中培養(yǎng).

4、檢驗(yàn)程序

尿標(biāo)本

離心、沉淀涂片染色分離培養(yǎng)淋病奈瑟菌培養(yǎng)

（革蘭及抗酸染色）

血平板、麥康凱平板專用巧克力”基

（5%~10%CO2,35C,18?24h）

▼

初步報(bào)告

涂片染色鏡檢鑒定、藥敏試驗(yàn)

報(bào)告

5、結(jié)果報(bào)告:

5.1、尿液細(xì)菌培養(yǎng)檢查必須報(bào)告細(xì)菌的種屬、菌落計(jì)數(shù)（cfu/m1）及藥敏結(jié)果。

5.2、革蘭氏陰性菌落計(jì)數(shù)大于1（）5cfu/ml,革蘭氏陽性菌計(jì)數(shù)大于10%fu/ml,真菌大于

103cfu/ml有診斷意義。

5.3、一般常規(guī)結(jié)核培養(yǎng)要8周方能報(bào)告。陽性結(jié)果可提前報(bào)告。但不做菌落計(jì)數(shù)只報(bào)告“抗

酸桿菌生長”的報(bào)告，如做了進(jìn)一步的分型和鑒定，才能報(bào)告“有XX型結(jié)核桿菌生長”。

5.4、用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)淋球菌經(jīng)鑒定可直接報(bào)告“有淋球菌生長”但不做菌落計(jì)數(shù)，如涂

片發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)或外有革蘭氏陰性雙球菌可報(bào)告“發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌"。

5.5、如尿液培養(yǎng)同時(shí)有三種或以上細(xì)菌生長時(shí)，可視為污染標(biāo)本，建議重留送檢。

消化道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程

1、糞便標(biāo)本中常見病原菌

革蘭陽性菌革蘭陰性菌

金黃色葡萄球菌傷寒及其它沙門菌

結(jié)核分支桿菌志賀菌屬

難辨梭菌致病大腸埃希菌

白色念珠菌（ETEC、EPEC、EIEC、EHEC）

弧菌屬菌種

氣單胞、鄰單胞菌種

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌

彎曲菌

2、標(biāo)本采集

2.1、自然排便采集法：自然排便后，挑取膿血、粘膜部分的糞便2?3g,液體糞便取絮狀

物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。

2.2、直腸肛管法：用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人4~5cm,幼兒2?3cm,輕輕在直

腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)數(shù)次，目的是使直腸表面粘液能通過肛管孔進(jìn)入肛管內(nèi).然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送

檢.

3、檢驗(yàn)步驟

3O1、涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多而一般不作直接涂片找致病菌，只有懷疑

霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片檢查。

3.2、各項(xiàng)的涂片檢驗(yàn)均按染色方法進(jìn)行，但大便檢查霍亂弧菌的處理程序:

3.2.1、染色檢查：將米沿樣的標(biāo)本涂2張片用乙醇固定后染色，觀察弧菌有無呈魚群狀排

列。

3O202懸滴檢查：取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌古典型和EL—Tor型均呈現(xiàn)極活

潑的穿梭狀運(yùn)動(dòng)。

3。2o3制動(dòng)檢驗(yàn)：運(yùn)動(dòng)活潑的弧菌涂片加入霍亂弧菌診斷血清后，在顯微鏡下觀察，若原

運(yùn)動(dòng)活潑的現(xiàn)象停止，為制動(dòng)試驗(yàn)陽性。

3。3、大便標(biāo)本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無特殊要求作一般

致病菌培養(yǎng)的標(biāo)本接種麥康凱、SS平板各一個(gè)。

3.4、菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)：選用多種培養(yǎng)基包括SS、麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽

瓊脂平板、Campy-BA血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長，以利于檢查

腸道的細(xì)菌情況.

3o5、霍亂弧菌的培養(yǎng)：直接取患者米治樣糞便0。5ml,接種于堿性蛋白月東水增菌液和4

號(hào)平板,35℃培養(yǎng)6~8h,再轉(zhuǎn)種一只4號(hào)平板.35°C培養(yǎng)18~24h后形成較大、菌落中間為灰黑

色、有光澤、隆起、濕潤的菌落，如潑水狀。挑取可疑菌落5?10個(gè)與霍亂多價(jià)“0”血清作凝

集試驗(yàn)。

診斷血清作玻片凝集試驗(yàn)，如為陽性，則立即報(bào)告，并將可疑菌送疾病控制中心確認(rèn)。

3O6、真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌

引起.將標(biāo)本接種于沙氏平板及血平板上，置27℃和35℃培養(yǎng)18~24h,根據(jù)形態(tài)染色、菌落特

征，做真菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。

4、檢驗(yàn)程序便或肛拭子

增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)涂片檢查

沙門氏菌、志賀氏菌

革蘭氏染色觀察動(dòng)力

霍亂弧菌

SS、麥康凱平板

沙氏平板、血平板等

菌落觀察

涂片檢查鑒定、藥敏試驗(yàn)

5、結(jié)果報(bào)告

糞便培養(yǎng)的報(bào)告方式應(yīng)以分離目的菌種的結(jié)果而定，如：目前常規(guī)以SS培養(yǎng)基分離糞便中的

致病菌，陽性者應(yīng)報(bào)告“檢出沙門菌或檢出志賀菌"，陰性者報(bào)告“未檢出沙門菌或未檢出志賀

菌”。其他培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告