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文檔簡介

第3章基因工程科技探索之路1.基因工程是指。從技術(shù)操作層面看,由于基因工程是在上進(jìn)行設(shè)計和施工的,因此又叫作技術(shù)。(P67)2.1944年,艾弗里等人通過肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA,還證明了。(P68)3.1958年,梅塞爾森和斯塔爾用實(shí)驗(yàn)證明了DNA的復(fù)制。隨后不久,提出中心法則。(P68)4.1967年,科學(xué)家發(fā)現(xiàn),在細(xì)菌擬核DNA之外的質(zhì)粒有自我復(fù)制能力,并可以在細(xì)菌。(P68)5.1973年,科學(xué)家證明質(zhì)??梢宰鳛榛蚬こ痰妮d體,構(gòu)建,導(dǎo)入,使在原核細(xì)胞中成功,并實(shí)現(xiàn)的基因交流。至此,基因工程正式問世。(P69)6.1983年,科學(xué)家采用法培育出世界上第一例轉(zhuǎn)基因煙草。此后,基因工程進(jìn)入了迅速發(fā)展的階段。(P69)7.1985年,穆里斯等人發(fā)明,為獲取目的基因提供了有效手段。(P69)第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具1.切割DNA分子的工具是,簡稱,這類酶主要是從中分離純化出來的。它們能夠的特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的斷開,產(chǎn)生兩種形式的末端。(P71)2.DNA連接酶分為兩類,一類是,另一類是。后者既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的,又可以“縫合”雙鏈DNA片段的,但連接平末端的效率相對較低。(P72)3.質(zhì)粒是一種的、、獨(dú)立于真核細(xì)胞或原核細(xì)胞之外,并具有能力的。(P72)4.在基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒,都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過的。這些質(zhì)粒上常有特殊的基因,如、等,便于重組DNA分子的篩選(如下圖)。(P72)大腸桿菌及質(zhì)粒結(jié)構(gòu)模式圖5.在基因工程中使用的載體除外,還有、等。它們的來源不同,在大小、結(jié)構(gòu)、復(fù)制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差別。(P73)6.載體必須具備的條件:①;②,以便與外源基因連接。③具有。(P72)7.DNA不溶于酒精,但某些蛋白質(zhì)溶于酒精,利用這一原理,可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。DNA在的NaCl溶液中,它能溶于2mol/L的NaCl溶液。在一定溫度下,DNA遇試劑會呈現(xiàn),因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。(P74“探究·實(shí)踐”)抽默6:1.1944年,艾弗里等人通過肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA,還證明了________________________________________________________________________________________________________________________________________________。2.DNA連接酶分為兩類,一類是,另一類是。后者既可以縫合雙鏈DNA片段互補(bǔ)的,又可以縫合雙鏈DNA片段的,但連接后者的效率相對較低。3.在基因工程中使用的載體除質(zhì)粒外,還有等。它們的來源不同,在大小、結(jié)構(gòu)、復(fù)制方式以及可以插入外源DNA片段的大小上也有很大差別。4.載體必須具備的條件:①能在受體細(xì)胞中保存下來并能;②具有1個或多個,以便與外源基因連接。③具有。5.載體上有特殊的標(biāo)記基因,其作用是__________________________________________________________________________________________________________________。6.DNA不溶于酒精,但某些蛋白質(zhì)溶于酒精,利用這一原理,可以初步分離DNA與蛋白質(zhì)。DNA在的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2mol/L的NaCl溶液。在一定溫度下,DNA遇試劑會呈現(xiàn),因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。7.原核生物中的限制酶不切割自身DNA的原因是________________________________________________________________________________________________________。第2節(jié)基因工程的基本操作程序1.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉主要需要四個步驟:、、、。(P76)2.PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)的原理,在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件,對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行的技術(shù)。(P77)3.PCR技術(shù)可以分為、和三步。(如下圖)(P78)4.PCR反應(yīng)過程可以在(PCR儀)中自動完成,完成以后,常采用來鑒定PCR的產(chǎn)物。(P79)5.基因表達(dá)載體要包括以下四個基本的結(jié)構(gòu):、、、。(P80)6.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的:。(P80)7.啟動子位于目的基因的,它是識別和結(jié)合的部位。(P80)8.標(biāo)記基因的作用:。9.熟悉基因表達(dá)載體構(gòu)建的過程。11.花粉管通道法有多種操作方式。例如,可以用將含目的基因的DNA溶液直接注入子房中;可以在植物受粉后的一定時間內(nèi),剪去,將DNA溶液滴加在上,使目的基因借助進(jìn)入胚囊。除此之外,將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用的方法還有法。(P81)11.轉(zhuǎn)化是指的過程。(P81“資料卡”)12.農(nóng)桿菌是一種在土壤中生活的微生物,能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物,而對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。農(nóng)桿菌細(xì)胞內(nèi)含有質(zhì)粒,當(dāng)它侵染植物細(xì)胞后,能將質(zhì)粒上的T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA)轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞,并且將其整合到該細(xì)胞的。根據(jù)農(nóng)桿菌的這種特點(diǎn),如果將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA中,通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用,就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞。(如下圖)(P81“資料卡”)13.檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功,首先是分子水平的檢測,包括通過等技術(shù)檢測或檢測;從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行雜交,檢測等。其次,還需要進(jìn)行水平的鑒定。例如,通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲來確定Bt基因是否賦予了棉花抗蟲特性以及抗性的程度。(P82)14.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的四個步驟,其實(shí)就反映了基因工程的基本操作程序。(P82)基因工程的基本操作流程圖15.在獲得轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的過程中,還可以通過構(gòu)建來獲取目的基因。(P82)16.將目的基因?qū)雱游锸芫炎畛S玫囊环N方法是利用將目的基因注入動物的受精卵中,這個受精卵將發(fā)育成為具有新性狀的動物。在基因工程操作中,常用原核生物作為受體細(xì)胞,其中以應(yīng)用最為廣泛。研究人員一般先用處理大腸桿菌細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能的生理狀態(tài),然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。(P82)第3節(jié)基因工程的應(yīng)用1.科學(xué)家將藥用蛋白基因與乳腺中特異表達(dá)的基因的等調(diào)控元件重組在一起,通過的方法導(dǎo)入哺乳動物的受精卵中,由這個受精卵發(fā)育成的轉(zhuǎn)基因動物在進(jìn)入泌乳期后,可以通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥物,這稱為乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器。(P90)2.用基因工程的方法,使外源基因得到高效表達(dá)的菌類一般稱為。(P91“相關(guān)信息”)3.目前,科學(xué)家正嘗試?yán)没蚬こ碳夹g(shù)對豬的器官進(jìn)行改造,采用的方法是在器官供體的基因組中導(dǎo)入某種調(diào)節(jié)因子,以抑制抗原決定基因的表達(dá),或設(shè)法除去抗原決定基因,然后再結(jié)合克隆技術(shù),培育出不會引起反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官。(P91)第4節(jié)蛋白質(zhì)工程的原理和應(yīng)用1.蛋白質(zhì)工程是指。(P93)2.基因工程原則上只能生產(chǎn)自然界中的蛋白質(zhì),這些天然蛋白質(zhì)是生物在長期進(jìn)化過程中形成的,它們的結(jié)構(gòu)和功能符合特定物種生存的需要,卻不一定完全符合人類生產(chǎn)和生活的需要。(P93)3.蛋白質(zhì)工程的基本思路是:從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→→推測→找到并改變相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→獲得所需要的蛋白質(zhì)(如下圖)。(P94)蛋白質(zhì)工程的基本思路抽默7:1.培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉主要需要四個步驟:目的基因的篩選與獲取、、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。2.PCR反應(yīng)需要在一定的中才能進(jìn)行,需提供DNA模板,2種,4種脫氧核糖核苷酸和酶。3.PCR技術(shù)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步。(如下圖)4.PCR反應(yīng)過程可以在PCR擴(kuò)增儀(PCR儀)中自動完成,完成以后,常采用來鑒定PCR的產(chǎn)物。5.基因表達(dá)載體是載體的一種,除目的基因、標(biāo)記基因外,還必須含有等。6.構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的:_______________________________________________________________________________________________________________________7.啟動子位于目的基因的,它是識別和結(jié)合的部位。8.標(biāo)記基因的作用:。(P80)9.轉(zhuǎn)化是指目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持的過程。10.檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功,首先是分子水平的檢測,包括通過檢測棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因或檢測Bt基因

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