新教材高中生物微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

1.基于實例分析，說明選擇培養(yǎng)基的概念和如何設計培養(yǎng)基來

3.1.3舉例說明通過調整培養(yǎng)基的配方可分離分解尿素的細菌。（科學思維，科學探究）

有目的地培養(yǎng)某種微生物2.通過學習稀釋涂布平板法，運用分析與綜合的科學方法,總結

3.1.4概述平板劃線法和稀釋涂布平板法分離微生物的過程。（科學思維）

是實驗室中進行微生物分離和純化的常用3.基于稀釋涂布平板法和顯微鏡計數(shù)法，運用歸納與概括的科

方法學方法,概述測定微生物數(shù)量的常用方法。（科學思維）

3.1.5概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計數(shù)4.基于微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定原理，通過稀釋涂布平板

法是測定微生物數(shù)量的常用方法法接種并分離得到分解尿素的細菌菌落，對實驗結果進行分

析與評價。（科學探究，科學思維）

必備知識?素養(yǎng)奠基

一、選擇培養(yǎng)基

1.實驗室中微生物篩選的原理:人為提供有利于目的菌生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻

止其他微生物的生長。

2.選擇培養(yǎng)基概念:在微生物學中，允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培

養(yǎng)基。

3.選擇培養(yǎng)基配方的設計：

（1）原理:分解尿素的細菌合成的酥酶將尿素分解產生Nfto

（2）培養(yǎng)基配方設計：以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。

激疑

如果要從土壤中分離出固氮微生物,那么對培養(yǎng)基有什么要求呢？

提示:固氮微生物能利用空氣中的甌因此培養(yǎng)基中不應添加氮源,這樣就只有固氮微生物才能生存。

二、微生物的選擇培養(yǎng)

1.方法:對樣品進行充分稀釋,然后將菌液涂布到制備好的選擇培養(yǎng)基上。

2.稀釋涂布平板法的操作過程：

⑴系列梯度稀釋操作:

1mL1mL1mL1mL1mL1mL

10g土樣+90mL無菌水9mL無菌水

（2）涂布平板操作。

①取菌液:取0.1mL菌液,添加到培養(yǎng)基表面。？

②涂布器滅菌:取出浸在酒精中的涂布器,放在火焰上燃燒,酒精燃盡后,冷卻涂布器。

③涂布過程:用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面,涂布時可轉動培養(yǎng)皿,使菌液分布均勻。

3.培養(yǎng):待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后,將平板倒置,放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察。

下汲藏

在進行稀釋操作時，需要在酒精燈火焰附近操作嗎?解釋原因。

提示:需要。在進行稀釋操作時,如果不在酒精燈火焰附近進行,就有可能造成雜菌污染。

三、微生物的數(shù)量測定

1.稀釋涂布平板法：

(1)統(tǒng)計依據(jù)。

當樣品的稀釋度足夠高時,培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上

的菌落數(shù),就能推測出樣品中大約含有多少活菌。

⑵操作。

①一般選擇菌落數(shù)為30?300的平板進行計數(shù)。

②選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng),在同一稀釋度下,應至少對&個平板進行重復計數(shù),然后求平均值。

2.顯微鏡直接計數(shù):利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞讓數(shù)板,在顯微鏡下觀察、計數(shù),然后再計算一定體積

的樣品中微生物的數(shù)量。

四、探究?實踐一一土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

1.提出問題:如何分離土壤中分解尿素的細菌?每克土壤樣品中含有多少分解尿素的細菌？

2.基礎知識：

組分含量提供的主要營養(yǎng)

KH2PO41.4g

無機鹽

Na2HP042.1g

MgS04?7H200.2g

葡萄糖10.0g碳源

尿素1.0g氮源

瓊脂15.0g凝固劑

定容至

H20水

1000mL

3.實驗設計：

⑴土壤取樣:先鏟去表層土,取距地表之ecm的土壤層，將樣品裝入紙袋中o

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(2)樣品稀釋:一般選用IX10\IXIO'、I*1()6倍的稀釋液進行平板培養(yǎng)。?

(3)微生物的培養(yǎng)與觀察:一般在30?37°C的溫度下培養(yǎng)1?2天,每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌

落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結果。?

4.操作提示：

選出下列關于實驗操作的正確說法酗⑤。

①本實驗耗時長,應提前制訂好計劃,提高效率。

②本實驗用到的器材比較多,應該對試管和平板做好標記。

③取土樣的鐵鏟和取樣紙袋使用前都要經過消毒。

④為了防止雜菌污染,從酒精中取出的涂布器應該直接在酒精燈火焰上充分燃燒滅菌。

⑤過熱的涂布器不能直接放在盛有酒精的燒杯中。

5.結果分析與評價：

結合實驗過程,判斷下列實驗分析的正誤：

⑴由于使用了選擇培養(yǎng)基,因此本實驗不需要設置對照

組。(*)

提示:應該設置未接種的平板和接種在牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基的平板作為對照。

(2)在同一稀釋度下，至少要涂布3個平板。(J)

(3)當菌落數(shù)目穩(wěn)定時,選取菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)。(J)

⑷應該仔細觀察培養(yǎng)基上菌落的形狀、大小、顏色等特征，并要做好記錄。(J)

(5)統(tǒng)計的分解尿素的細菌菌落數(shù)目就是樣品中分解尿素的活菌數(shù)目。(X)

提示：統(tǒng)計的菌落數(shù)目還要經過計算才能代表樣品中的活菌數(shù)目，而且數(shù)目偏低,因為當兩個或多個細菌連

在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落。

?激疑

選擇培養(yǎng)基上生長分解尿素的細菌之后,pH會發(fā)生變化嗎?解釋原因。

提示:會升高。分解尿素的細菌可以將尿素分解成NH3,導致培養(yǎng)基的pH升高。

關鍵能力?素養(yǎng)形成

知識點一微生物的選擇培養(yǎng)與計數(shù)方法

1.選擇培養(yǎng)的目的：從眾多微生物中分離出需要的特定微生物。

2.篩選微生物常用培養(yǎng)基一一選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基：

選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

特殊控制某一條件(如唯一氮源)或加入某種

加入某種指示劑或化學藥品

成分物質(如青霉素)

抑制其他微生物生長,促進目的微生物的與微生物的代謝產物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定

目的

生長反應

用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物

培養(yǎng)酵母菌和霉菌,可在培養(yǎng)基中加入青可用伊紅一美藍培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是

舉例霉素，抑制細菌生長;用以尿素為唯一氮否有大腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬

源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)尿素分解菌光澤)

3.稀釋涂布平板法：

⑴主要操作環(huán)節(jié):系列梯度稀釋和涂布平板。

(2)系列梯度稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結果如圖所示:

1mL1mL1mL1mL1mL

七

IO5

9mL無菌水

每個平板加

10g或10mLI

0.1mL樣品

樣品+90mJ

無菌水

???159162

菌落太多;以計數(shù)菌落數(shù)菌落數(shù)菌落數(shù)

(3)計算公式:

某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)

每克樣品中的菌株數(shù)=涂布平板時所用的稀釋液的體積(mL)x稀釋倍數(shù)

(4)計數(shù)結果：由于當兩個或多個細胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落,計算結果比實際值偏小。

4.稀釋涂布平板法操作注意問題：

⑴稀釋操作時:每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌;操作時，試管口和移液管應在離火焰1?2cm

處。

⑵涂布平板時。

①涂布器浸在體積分數(shù)為70%的酒精中,取出時,讓多余酒精在燒杯中滴盡,然后將沾有少量酒精的涂布器

在火焰上引燃。

②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。

③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適,移液管管頭不接觸任何物體。

04/15

⑶同一稀釋度的樣液加到三個或三個以上的平板上,經涂布、培養(yǎng),計算出菌落平均數(shù)。

5.兩種純化方法的比較：

主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法

主要

接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線系列梯度稀釋操作和涂布平板操作

步驟

接種工具接種環(huán)涂布器

在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取

菌體獲取從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體

菌體

能否用

不能計數(shù)可以計數(shù)，但是操作復雜,需涂布多個平板

于計數(shù)

都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細胞菌落,達到分離純化微生物的目的，

共同點

也可用于觀察菌落特征

6.顯微鏡直接計數(shù):

⑴原理:此法利用特定的細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。

(2)方法:顯微鏡下觀察,細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板計數(shù)。

(3)計算公式：

每毫升原液所含細菌數(shù)=每小格平均細菌數(shù)X400X10000X稀釋倍數(shù)

(4)缺點:統(tǒng)計的結果一般是活細菌和死細菌的總和，計算結果比實際值偏大。

二^素養(yǎng)案例

(2020?全國I卷)某種物質S(一種含有C、H、N的有機物)難以降解,會對環(huán)境造成污染,只有某些細菌能

降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細菌菌株。實驗過程中需要甲、乙

兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機鹽、水和S,乙的組分為無機鹽、水、S和Y。

接種稀釋涂布平板挑單菌落接種多次篩選

⑤高效降

---A解S的

菌株

無菌水甲

回答下列問題:

⑴實驗時,盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用的方法進行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質

是o甲、乙培養(yǎng)基均屬于培養(yǎng)基。？

(2)實驗中初步估測搖瓶M中細菌細胞數(shù)為2X10,個/mL,若要在每個平板上涂布100uL稀釋后的菌液，

且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個,則至少應將搖瓶M中的菌液稀釋倍。？

(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時,某菌株對S的降解量反而下降,其原因可

能是(答出］點即可)。?

⑷若要測定淤泥中能降解S的細菌細胞數(shù),請寫出主要實驗步驟

___________________________________________________________________________o?

⑸上述實驗中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細菌的生長提供4類營養(yǎng)物質，即

__________________??

【解析】本題主要考查培養(yǎng)基的類型及其應用、無菌技術和微生物的分離與計數(shù)。

⑴常用高壓蒸汽滅菌法處理盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶。由圖中③④過程可知，甲為液體培養(yǎng)基，乙為固體培

養(yǎng)基,所以乙培養(yǎng)基中需要加入的Y為瓊脂。甲和乙培養(yǎng)基可以用于篩選能降解S的菌株,因此均屬于選擇

培養(yǎng)基。

(2)若要在每個平板上涂布100uL稀釋后的菌液,且每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，根據(jù)計算公

式:細菌細胞數(shù)=/義〃可知，稀釋倍數(shù)滬2X107X—0=2X1074-1000X100+200=1()4(倍)。

(3)當培養(yǎng)基中的S超過某一濃度后,可能會抑制菌株的生長,從而造成其對S的降解量下降。

(4)要測定淤泥中能降解S的細菌的細胞數(shù),可以取淤泥加無菌水制成菌懸液,稀釋涂布到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)

后進行計數(shù)。

(5)甲和乙培養(yǎng)基均含有水、無機鹽、碳源、氮源等成分。

答案：(1)高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇

(2)104(3)S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長

(4)取淤泥加入無菌水,涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后計數(shù)

(5)水、碳源、氮源和無機鹽

【誤區(qū)警示】稀釋涂布平板法分離微生物常見誤區(qū)

⑴誤認為不用涂布均勻:用涂布器涂布平板時一定要涂布均勻，否則難以得到單菌落。

(2)誤認為不用冷卻:涂布器使用前應進行酒精浸泡,然后灼燒滅菌,冷卻之后再涂布,否則會由于溫度過高

殺死菌種。

【素養(yǎng)?遷移】

(2020?棗莊高二檢測)篩選是分離和培養(yǎng)微生物新類型常用的手段,下列有關技術中不能篩選成功的是

()

A.在全營養(yǎng)的LB培養(yǎng)基(普通培養(yǎng)基)中,篩選大腸桿菌

B.在尿素固體培養(yǎng)基中，篩選能夠分解尿素的微生物

C.用纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基,篩選能分解纖維素的微生物

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D.在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鈉,篩選抗鹽突變體的微生物

【解析】選A。在全營養(yǎng)的LB培養(yǎng)基中，幾乎所有細菌都能生長，不能篩選出大腸桿菌,A錯誤;在尿素固體

培養(yǎng)基中，只有能分解尿素的微生物才能生長,不能分解尿素的微生物因缺乏氮源不能生長,能夠篩選分解

尿素的微生物,B正確;在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基上,只有能分解纖維素的微生物才能生長,不能分解纖

維素的微生物因缺乏碳源不能生長,能篩選分解纖維素的微生物,C正確;在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化

鈉,能篩選抗鹽突變體微生物,D正確。

【補償訓練】

下列關于測定土壤中微生物數(shù)量的敘述，不正確的是（）

A.顯微鏡直接計數(shù)計算的結果比實際值偏大

B.當樣品的稀釋度足夠高時,一個活菌會形成一個菌落

C.采用平板計數(shù)法獲得的菌落數(shù)往往少于實際的活菌數(shù)

D.統(tǒng)計菌落數(shù)目時,只要菌落數(shù)目在30?300的平板都可以計數(shù),并以它們的平均值作為統(tǒng)計結果

【解析】選D。顯微鏡直接計數(shù)統(tǒng)計的結果一般是活細菌和死細菌的總和，計算結果比實際值偏大,A正確;

當樣品的稀釋度足夠高時,一個活菌會形成一個菌落,B正確;采用平板計數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個

細菌形成的,所以往往少于實際的活菌數(shù),C正確;統(tǒng)計菌落數(shù)目時,應選擇同一稀釋倍數(shù)下涂布的菌落數(shù)量

為30~300之間的平板進行計數(shù),D錯誤。

知識點二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

1.分離菌種的原理：

在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上,只有能產生服酶的微生物才能分解尿素,而缺乏JR酶的微生物由于

不能分解尿素,會因缺乏氮源而無法生長繁殖。

2.實驗流程示意圖:

TLL螞

aelm(@

.a五.0?

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?

1③一④O

2④O

3尊—④?

4簸一砂

3.實驗操作過程:

流程具體操作操作提示

先鏟去表層土,取距地表3?8cm的土壤①適宜在富含有機質，酸堿度接近中性的潮

土壤取樣

層,將樣品裝入紙袋中濕土壤中取樣

②取樣用的鐵鏟和取樣的紙袋使用前都需

要滅菌

制備分別配制牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基和以尿素牛肉膏蛋白族培養(yǎng)基作為對照組,用來判斷

培養(yǎng)基為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基是否具有選擇的作用

①火焰旁稱取土壤樣本①注意無菌操作

樣品的稀釋②將稀釋倍數(shù)為?107的稀釋液涂布②對所用的平板、試管做好標記

和涂布平板。每個稀釋度至少涂布三個平板作為③初次實驗對于稀釋的范圍沒有把握,可選

重復組擇一個較為寬泛范圍10：'?IO,倍的稀釋液

①將涂布好的平板和空白平板放在適宜①空白平板作為對照,檢測培養(yǎng)基制備是否

溫度下的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)合格

②每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，比較牛肉②觀察時還要記錄不同菌落的形狀、大小、

培養(yǎng)、觀察

膏蛋白陳培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的顏色等

和計數(shù)

數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄③在同一稀釋度下,至少對3個平板進行計

③當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30?數(shù),然后求出平均值,并根據(jù)平板所對應的

300的平板進行計數(shù)稀釋度計算出樣品中活菌的數(shù)目

4.實驗結果分析:

內容現(xiàn)象結論

有無雜對照的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染

菌污染培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染

的判斷菌落形態(tài)多樣,菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其他雜菌

選擇培養(yǎng)

牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇

基的篩選選擇培養(yǎng)基具有篩選作用

培養(yǎng)基上的數(shù)目

作用

樣品的得到3個或3個以上菌落數(shù)目在30~300的平

操作成功

稀釋操作板

重復組的

若選取同一種土樣,統(tǒng)計結果應接近

結果

5.鑒定原理:分解尿素的細菌合成的服酶將尿素分解為NH”使培養(yǎng)基的堿性增強,pH升高。在選擇培養(yǎng)基中

加入酚紅指示劑,培養(yǎng)某種細菌,若指示劑變紅,可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。

08/15

分解尿素的細菌

脈酶

CO(NH2)2+H,O------------------->CO2+2NH3

I

酚紅指示劑一變紅色

【特別提醒】實驗中的兩種“對照組”與“重復組”

⑴兩種對照組作用比較。

①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”，需將未接種的培養(yǎng)基(空白對照組)同時進行培養(yǎng)。

②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”，需設置完全培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基)進行接種培養(yǎng),觀察兩

種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進行對比得出結論。

(2)重復組的設置及作用：為排除偶然因素對實驗結果的干擾,在每一稀釋度下宜設置3個平板作為重復組,

選擇菌落數(shù)均在30?300且數(shù)目相差不大的三個平板，用“平均值”代入計數(shù)公式計算活菌數(shù)。

-素養(yǎng)案例

巴氏芽抱桿菌是一類具有較高)R酶活性，能夠分解尿素的細菌，廣泛分布在土壤、堆肥及污水中。這種細菌

能夠將氮肥中的尿素分解成氨態(tài)氮被植物吸收,對土壤的肥力有著重要作用。研究人員擬從土壤樣品中分

離該類細菌,如圖所示為操作流程,①?⑤表示操作步驟。請回答下列問題：

無菌水無菌水無菌水

①②③④⑤

⑴制備培養(yǎng)基時,按照培養(yǎng)基配方準確稱量各組分,將其溶解、定容后,調節(jié)培養(yǎng)基的,及

時對培養(yǎng)基進行分裝，并進行滅菌。？

(2)步驟②富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基按用途來分應為培養(yǎng)基,步驟②的主要目的是

?。?

⑶在步驟④的培養(yǎng)基中加入指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。若用

該方法培養(yǎng)設置了3個培養(yǎng)皿,菌落數(shù)分別為163個、158個、159個,則可以推測富集培養(yǎng)后的菌液中每

毫升含活菌數(shù)為個,運用這種方法統(tǒng)計的結果往往較實際值______________。?

（4）要進一步分離純化巴氏芽抱桿菌采用步驟⑤法進行操作,在該操作過程中接種工具至

少要灼燒次。?

【解題導引】解答本題的兩個關鍵知識點：

⑴培養(yǎng)基滅菌的方法:常用高壓蒸汽滅菌。

⑵培養(yǎng)基種類的判斷:富集培養(yǎng)目的是增加巴氏芽抱桿菌的濃度,所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

【解析】（1）制備培養(yǎng)基時，操作過程為計算、稱量、溶化、配制培養(yǎng)液、調節(jié)pH、分裝、包扎、滅菌、倒

平板，培養(yǎng)基需要進行高壓蒸汽滅菌。（2）圖中步驟②富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，目的是增

加巴氏芽抱桿菌的濃度（數(shù)量）。（3）鑒別尿素分解菌時需要使用酚紅指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來鑒定是

否為尿素分解菌。富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含活菌數(shù)為（163+158+159）+3+0.IX103=1.6X106個，用稀

釋涂布平板法進行計數(shù)時，由于一個菌落可能是兩個或多個微生物細胞的后代形成的,所以統(tǒng)計的結果往

往較實際值偏低。（4）圖中⑤分離純化巴氏芽抱桿菌采用的方法是平板劃線法，圖中劃線區(qū)域共4個,所以

該操作過程中接種工具至少要灼燒4+1=5次。

答案：（DpH高壓蒸汽（濕熱）（2）選擇增加巴氏芽抱桿菌的濃度（數(shù)量）（3）酚紅1.6X106偏低

⑷平板劃線5

【誤區(qū)警示】從土壤中分離微生物的注意事項

⑴一般步驟:土壤取樣、選擇（富集）培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株。

（2）選擇分離過程中需要使用選擇培養(yǎng)基,要做到全過程無菌操作。

（3）常用的固體培養(yǎng)基上的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。

【素養(yǎng)?探究一一母題追問】

（1）科學思維一一分析與綜合

上題步驟②中用到的培養(yǎng)基的氮源是什么物質？

提示:步驟②中用到的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，目的是增加巴氏芽抱桿菌的濃度（數(shù)量），應該以尿素為氮

源。

（2）科學思維一一演繹與推理

某同學發(fā)現(xiàn)他涂布的培養(yǎng)基上菌落數(shù)目過多連成一片，請你幫他分析可能的原因并提出合理的處理措施。

提示:可能是稀釋倍數(shù)不夠,導致菌液濃度過高,可以通過增大稀釋倍數(shù)解決。

【素養(yǎng)?遷移】

尿素是一種重要的農業(yè)肥料，但若不經細菌的分解,就不能更好地被植物利用。下列有關土壤中尿素分解

菌的分離和培養(yǎng)的敘述，正確的是（）

A.培養(yǎng)基中加入尿素作為唯一碳源,該培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基

B.測定土壤中分解尿素的細菌數(shù)量和測定土壤中放線菌的數(shù)量可采用相同的稀釋度

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C.細菌合成的麻酶能將尿素分解成氨,氨會使培養(yǎng)基的堿性增強,pH升高

D.利用稀釋涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的細菌的分離計數(shù)和純化鑒定

【解析】選C。培養(yǎng)基中加入尿素作為唯一碳源，該培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基,A錯誤;因為土壤中各類微生物的

數(shù)量不同,故為獲得不同類型的微生物,要按不同的稀釋倍數(shù)進行分離,B錯誤;細菌合成的服酶能將尿素分

解成氨,氨會使培養(yǎng)基的堿性增強,pH升高,可加入酚紅指示劑進行檢測,C正確;鑒定分解尿素的細菌應該

用加酚紅的鑒別培養(yǎng)基,D錯誤。

【補償訓練】

在做分離分解尿素的細菌實驗時,A同學從對應培養(yǎng)基上篩選出大約150個菌落,而其他同學只篩選

出大約50個菌落。A同學的結果產生的原因可能有（）

①土樣不同②培養(yǎng)基被污染

③操作失誤④沒有設置對照

A.①②③B.②③④

C.①③④D.①②④

【解析】選A。土樣不同、培養(yǎng)基被污染和操作失誤都會影響實驗結果,對照的設置對實驗結果沒有影響。

【課堂回眸】

概念

微

生

物

的

選

擇

培

養(yǎng)，稀釋涂布平板法

和~（顯微鏡直接計數(shù)

計

數(shù)微生物的

土壤中分解尿素的

數(shù)量測定探究?實驗藥窗的分離與計數(shù)

課堂檢測?素養(yǎng)達標

【概念?診斷】

1.下列關于微生物的培養(yǎng)與計數(shù)的描述正確的是①③④⑤。

①分離分解尿素的細菌要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基

②對微生物計數(shù)可以使用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種微生物

③使用顯微鏡直接計數(shù)的統(tǒng)計結果比樣品中的實際活菌數(shù)偏高

④在實驗過程中,應遵循平行重復原則，同一稀釋倍數(shù)下至少涂布三個平板

⑤進行微生物培養(yǎng)時要每隔24h統(tǒng)計一次菌落的數(shù)目

⑥獲得菌落數(shù)目為30?300的平板就說明實驗操作成功

【解析】選①③④⑤。在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上,只有能利用尿素的微生物才能生長，①正確；

對微生物計數(shù)使用稀釋涂布平板法接種微生物,平板劃線法無法計數(shù),②錯誤;使用顯微鏡直接計數(shù)統(tǒng)計的

是活菌和死菌的數(shù)量,結果比樣品中的實際活菌數(shù)偏高,③正確;在實驗過程中,應遵循平行重復原則，同一

稀釋倍數(shù)下至少涂布三個平板,④正確;進行微生物培養(yǎng)時要每隔24h統(tǒng)計一次菌落的數(shù)目，⑤正確;應是

在同一稀釋倍數(shù)下,獲得菌落數(shù)目為30~300的平板,且差距不能過大,說明實驗操作成功,⑥錯誤。

2.能合成服酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是（）

A.CO2和N2B.葡萄糖和NH3

C.CO?和尿素D.葡萄糖和尿素

【解析】選D。合成JR酶的微生物能夠分解尿素，所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

3.用平板劃線法或稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時（）

①可以用相同的培養(yǎng)基

②都需要使用接種環(huán)進行接種

③都需要在酒精燈火焰旁進行接種

④都可以用來計數(shù)活菌

A.①②B.③④C.①③D.②④

【解析】選Co平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基,可以使用相同的培養(yǎng)基,①正確;平板劃線

法采用接種環(huán)進行操作,而稀釋涂布平板法采用涂布器進行操作,②錯誤;純化時,要進行無菌操作,需要在

酒精燈火焰旁接種,避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基,③正確;平板劃線法一般用于分離而不是計數(shù),④錯

誤。

4.（2020?浙江7月選考改編）下列關于微生物培養(yǎng)及利用的敘述,錯誤的是（）

A.利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物,而保留利用尿素的微生物

B.配制培養(yǎng)基時應根據(jù)微生物的種類調整培養(yǎng)基的pH

C.酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒

D.適宜濃度的酒精可使醋酸菌活化

【解析】選A。本題主要考查微生物的培養(yǎng)條件和應用。尿素固體培養(yǎng)基上，由于不能利用尿素做氮源的微

生物不能生長繁殖,而保留利用尿素的微生物,并非迅速殺死其他微生物,A項錯誤;不同的微生物所需的pH

不同,所以配制培養(yǎng)基時,應根據(jù)微生物的種類調整培養(yǎng)基的pH,B項正確;酵母菌不能直接利用淀粉,應用

酒曲中的根霉和米曲霉等微生物把淀粉糖化,再用酵母菌發(fā)酵得到糯米酒,C項正確;醋酸菌在有氧條件下

能利用酒精產生醋酸,所以適宜濃度的酒精可以使醋酸菌活化,D項正確。

5.下列關于菌種計數(shù)方法的敘述不正確的是（）

12/15

A.當樣品的稀釋度足夠高時,能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落

B.應該選取培養(yǎng)基表面菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為有效數(shù)據(jù)

C.為了保證結果準確,一般采用密度較大的平板進行計數(shù)

D.在某一濃度下涂布三個平板，以它們的平均值作為統(tǒng)計結果

【解析】選C。當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面一個活菌會形成一個菌落,A正確;應該選取培養(yǎng)基表

面菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為有效數(shù)據(jù),B正確;為了保證結果準確,一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板

進行計數(shù),C錯誤;在某一濃度下涂布三個平板,若三個平板統(tǒng)計的菌落數(shù)差別不大,則應以它們的平均值作

為統(tǒng)計結果以減小實驗誤差,D正確。

【思維?躍遷】

6.自然界中的微生物往往是混雜生長的。人們在研究微生物時一般要將它們分離提純,然后進行數(shù)量的測

定。下面是有關土壤中分解尿素的細菌分離和計數(shù)的實驗過程,請回答有關問題。

⑴若取土樣6g,應加入mL的無菌水配制成稀釋10倍土壤溶液。因土壤中細菌密度很大,需要不

斷加以稀釋,配制成IO,?IO,不同濃度的土壤溶液。將?io,倍的稀釋液分別吸取0.2mL加入固體培養(yǎng)

基上,用涂布器將菌液鋪平,每個稀釋度下至少涂布3個平板,這種接種方法稱為。將接種的培養(yǎng)

皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?48h,觀察并統(tǒng)計菌落數(shù),結果如下表,其中倍的稀釋比較

合適，由此計算出每克土壤中的菌落數(shù)為，這種方法測定的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目

（填“低”或“高”）。?

稀釋倍數(shù)103104105106107

菌1號平板478367277265

落2號平板496354261208

數(shù)

3號平板509332254293

/個

（2）若研究尿素分解菌的群體生長規(guī)律,可采用平板劃線法分離土壤中的尿素分解菌。操作時,接種環(huán)通過

灼燒滅菌,在第二次及以后劃線時，總是從上一次的