DB34T 3653-2020 番鴨胚垂直傳播病毒(RT-)PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范

DB34DB34/T3653—2020番鴨胚垂直傳播病毒(RT-)PCR檢測(cè)技術(shù)規(guī)范Technicalregulationfordetectionofverticaltransmissionvirusesby(RT-)PCRfromMuscovyDuckembryos2020-06-22發(fā)布2020-07-22實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I1可以通過(guò)番鴨胚垂直傳播的病毒統(tǒng)稱，包括鴨甲肝病毒1型（DuckHepatitisVirustype1,DHAV-1）、鴨甲肝病毒3型（Du4.2臺(tái)式低溫高速離心機(jī)，溫控范圍：-4℃~25℃。4.7水浴鍋，溫控范圍：37℃~100℃。4.8微量移液器，可調(diào)控量程：0.5～10μL，10～100μL25.5磷酸鹽緩沖液（PBS見(jiàn)附錄A.1。F:5’-AGGCCCAGAAGCATTCAAACA-3’R:5’-TGGGTGTTTTACGTGTACTC-3’F:5’-CAATGGGCTTTTACCAATATGC-3’R:5’-ATTTTTCCCTCCTCCCACCA-3’F:5’-GAATCGTGGTCTAGCGAC-3’R:5’-CTCGCATCTGCTGATCATAATTACC-3’F:5’-ACCTCAGGATATCGCTGAAACT-3’R:5’-CTCCATCCCTGCAGCACATGTAAAG-3’F:5’-TCAACAAACTCCACCGAAACTGT-3’R:5’-TCCCGTAAGAACATGTCCATACCA-3’3采集的尿囊液經(jīng)8000g離心10min，取上清分裝后，于-20℃凍存?zhèn)溆茫徊杉慕M織），6.3.2.2將上述反應(yīng)混合液按照以下步驟進(jìn)行PCR擴(kuò)增，9446.4.2.2將上述反應(yīng)混合液按照以下步驟進(jìn)行一步法R），57.5.2當(dāng)待檢樣品出現(xiàn)約732bp條帶6A.1.1成分Na2HPO4·12H2OA.1.2制法將上述試劑溶于800mL滅菌雙蒸水中，定容至A.375％乙醇制法A.4.10.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉（EDTA）溶液（pH8.0）制法羥基甲基氨基甲烷（Tris）242g0.5mol/L乙二銨四乙酸二鈉溶液（pH8.7至8(規(guī)范性附錄)番鴨胚垂直傳播病毒(RT-)PCR檢測(cè)結(jié)果判定B.1DHAVRT-PCR檢測(cè)結(jié)果電泳圖1,DHAV-1陽(yáng)性對(duì)照樣品；2,DHAV-3陽(yáng)性對(duì)照樣品；5,陰性對(duì)照樣品；6,空白對(duì)照樣品。966,空白對(duì)照樣品。B.3MDRVRT-PCR檢測(cè)結(jié)果電泳圖13,陰性對(duì)照樣品；4,空白對(duì)照樣品。