第四章酶化學(xué)

第四章酶化學(xué)4、5酶得抑制作用和抑制劑有些物質(zhì)能與酶分子上某些必需基團(tuán)結(jié)合(作用),使酶得活性中心得化學(xué)性質(zhì)發(fā)生改變,導(dǎo)致酶活力下降或喪失,這種現(xiàn)象稱為酶得抑制作用。能夠引起酶得抑制作用得化合物則稱為抑制劑。

抑制作用與變性作用就是不同得。抑制劑只能使酶得催化活性降低或喪失,而不引起酶蛋白變性。酶蛋白變性而引起酶活力喪失得作用稱為變性作用。

酶得抑制劑一般具備兩個(gè)方面得特點(diǎn):a、

在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與被抑制得底物分子或底物得過渡狀態(tài)相似。b、

能夠與酶得活性中心以非共價(jià)或共價(jià)得方式形成比較穩(wěn)定得復(fù)合體或結(jié)合物。4、5酶得抑制作用和抑制劑竟?fàn)幮砸种?、5、1抑制劑得作用方式不可逆得抑制作用:這一類抑制劑通常以比較牢固得共價(jià)鍵與酶蛋白中得基團(tuán)結(jié)合,而使酶分子失活。不能用透析、超濾等物理方法除去抑制劑而恢復(fù)酶活性。可逆得抑制作用:這類抑制劑與酶蛋白得結(jié)合就是可逆得,可用透析、超濾等物理方法除去抑制劑而恢復(fù)酶活性。–競(jìng)爭(zhēng)性抑制(petitiveinhibition)–非競(jìng)爭(zhēng)性抑制(nonpetitiveinhibition)

不可逆得抑制作用有機(jī)磷化合物:與膽堿酯酶結(jié)合,使乙酰膽堿不能分解為乙酸和膽堿,引起神經(jīng)中毒,稱為神經(jīng)毒劑。對(duì)硫磷、敵百蟲、敵敵畏2、有機(jī)汞、有機(jī)砷化合物:與含巰基得酶或含硫辛酸輔酶得酶結(jié)合,從而使酶失活。氯汞苯甲酸、路易斯毒氣(CHCl＝CHAsCl2)3、重金屬鹽(Ag＋,Pb2＋,Hg2＋):使酶蛋白失活。4、烷化劑:使酶中-SH烷化,失活。碘乙酸、2、4－二硝基氟苯5、氰化物、硫化物和CO:與酶中得金屬離子絡(luò)合。氰化物與鐵卟啉中得Fe2+絡(luò)合,阻抑細(xì)胞呼吸。6、青霉素:與糖肽轉(zhuǎn)肽酶得Ser結(jié)合,使酶失活?？赡娴靡种谱饔镁?fàn)幮砸种颇承┮种苿┑没瘜W(xué)結(jié)構(gòu)與底物相似,因而能與底物竟?fàn)幣c酶活性中心結(jié)合。當(dāng)抑制劑與活性中心結(jié)合后,底物被排斥在反應(yīng)中心之外,其結(jié)果就是酶促反應(yīng)被抑制了。竟?fàn)幮砸种仆ǔ？梢酝ㄟ^增大底物濃度,即提高底物得競(jìng)爭(zhēng)能力來(lái)消除。可逆得抑制作用竟?fàn)幮砸种苹前奉愃幬镒饔脵C(jī)理9大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流某些藥物或體內(nèi)代謝物對(duì)酶得競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用藥物(抑制劑)被抑制得酶競(jìng)爭(zhēng)底物臨床應(yīng)用及機(jī)理磺胺藥二氫葉酸合成酶(細(xì)菌)苯甲酸抗菌作用(抑制四氫葉酸)氨基蝶呤二氫葉酸還原酶二氫葉酸抗白血病5-氟尿嘧啶尿嘧啶核苷磷酸化酶尿嘧啶(胸腺嘧啶)抗癌作用(抑制核苷酸合成)別嘌呤醇黃嘌呤氧化酶黃嘌呤,次黃嘌呤抗通風(fēng)(抑制尿酸生成)6-氨基已酸纖溶酶-賴氨酸-氨基酰止血,抗纖溶(抑制纖溶酶)苯丙胺(麻黃素)單胺氧化酶腎上腺素(去甲腎上腺素)中樞興奮,抗哮喘抑制劑與藥物開發(fā)不可逆抑制劑得專一性程度很強(qiáng),前景廣闊底物類似物型得競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑最易開發(fā)過渡態(tài)底物類似物型藥物最具價(jià)值(高效\特異)過渡態(tài)底物類似物型藥物可逆得抑制作用非竟?fàn)幮砸种泼缚赏瑫r(shí)與底物及抑制劑結(jié)合,引起酶分子構(gòu)象變化,并導(dǎo)至酶活性下降。由于這類物質(zhì)并不就是與底物競(jìng)爭(zhēng)與活性中心得結(jié)合,所以稱為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。底物和抑制劑可以同時(shí)與酶結(jié)合,但就是,中間得三元復(fù)合物ESI不能進(jìn)一步分解為產(chǎn)物,因此,酶得活性降低。抑制劑與酶活性中得以外得基團(tuán)結(jié)合,其結(jié)構(gòu)可能與底物無(wú)關(guān)不能通過增加底物得濃度得辦法來(lái)消除非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用某些金屬離子(Cu2+、Ag+、Hg2+)以及EDTA等,通常能與酶分子得調(diào)控部位中得-SH基團(tuán)作用,改變酶得空間構(gòu)象,引起非競(jìng)爭(zhēng)性抑制可逆得抑制作用4、5、2可逆抑制作用得動(dòng)力學(xué)特征競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用得動(dòng)力學(xué)特征競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用得動(dòng)力學(xué)特征可通過增加底物濃度而使整個(gè)反應(yīng)平衡向生成產(chǎn)物得方向移動(dòng),因而能削弱或解除這種抑制作用。非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用得動(dòng)力學(xué)特征4、6人工合成酶得新進(jìn)展抗體酶雜化酶酶模型4、6、1抗體酶抗體酶又稱催化抗體,就是由與酶反應(yīng)中底物過渡態(tài)類似物作為半抗原刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生得一類能夠?qū)Ｒ蛔R(shí)別和催化酶反應(yīng)中得底物反應(yīng)過渡態(tài)得一類抗體?？贵w酶就是一種具有催化功能得抗體分子,在其可變區(qū)賦予了酶得屬性,就是抗體得高度選擇性和酶得高效催化能力巧妙結(jié)合得產(chǎn)物。抗體酶就是一種新型人工酶制劑,就是利用現(xiàn)代生物學(xué)與化學(xué)得理論與技術(shù)交叉研究得成果,4、6、1抗體酶抗體得概念

免疫系統(tǒng)就是由中樞免疫組織(骨髓、胸腺、消化系統(tǒng)免疫組織)和外周淋巴組織(淋巴結(jié)和脾臟)得免疫活性細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞),以及由她們產(chǎn)生得多種淋巴因子和抗體所組成。當(dāng)外源物性物質(zhì),如蛋白質(zhì)、毒素、糖蛋白、脂蛋白、核酸、多糖、顆粒(細(xì)菌、細(xì)胞、病毒)進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)時(shí),機(jī)體得免疫系統(tǒng)便產(chǎn)生相應(yīng)得免疫球蛋白,并以之結(jié)合,以消除異物得毒害。此反應(yīng)稱為免疫反應(yīng),此異物便就是抗原,此球蛋白便就是抗體。4、6、1抗體酶抗體得概念完全抗原就是指能夠直接誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答得一類物質(zhì)。半抗原能與抗體特異性結(jié)合,但不能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體,必須與蛋白質(zhì)(載體)結(jié)合后進(jìn)入機(jī)體,才能產(chǎn)生有效得免疫應(yīng)答?？贵w(antibody,Ab)就是在抗原刺激下機(jī)體免疫應(yīng)答得產(chǎn)物。所有抗體都具有與抗原特異性結(jié)合得能力?？贵w得化學(xué)本質(zhì)就是免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)即γ－球蛋白。不過只有當(dāng)免疫球蛋白針對(duì)已知抗原時(shí),才能夠稱這種免疫球蛋白為抗體。4、6、1抗體酶四肽鏈結(jié)構(gòu)

,鏈間二硫鍵連接兩條重鏈(H)和兩條輕鏈(L)氨基端和羧基端。

4、6、1抗體酶抗體與酶得異同:相同點(diǎn):都就是蛋白質(zhì),都有特異性。不同點(diǎn):1)抗體無(wú)催化活力,酶有催化活力。2)本質(zhì)差別:酶就是能與反應(yīng)過渡態(tài)選擇結(jié)合得催化物質(zhì),抗體就是和基態(tài)緊密結(jié)合得物質(zhì)。3)酶得活性和合成受到代謝調(diào)節(jié),種類有限?？贵w只有在抗原存在時(shí)才產(chǎn)生,種類無(wú)限。以過渡態(tài)類似物作為半抗原,誘導(dǎo)與其互補(bǔ)構(gòu)象得抗體,使其具有催化活性,可觀察到抗體催化相應(yīng)底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。4、6、1抗體酶過渡態(tài)碳酸酯碳酸酯硝基苯磷酰膽堿脂(a)合成aa與牛血清蛋白形成抗原抗原注入動(dòng)物體內(nèi),產(chǎn)生抗體MOPC167(抗體酶)提取抗體MOPC167,催化碳酸酯水解抗體酶得催化反應(yīng)類型1、轉(zhuǎn)?；磻?yīng)2、水解反應(yīng)3、Claisen重排反應(yīng)4、酰胺合成反應(yīng)5Diels-Alder反應(yīng)6、轉(zhuǎn)酯反應(yīng)7、光誘導(dǎo)反應(yīng)8、氧化還原反應(yīng)9、脫羧反應(yīng)10、順反異構(gòu)化反應(yīng)抗體酶得制備合成半抗原偶聯(lián)適當(dāng)載體免疫動(dòng)物,誘導(dǎo)抗體篩選抗體酶1、誘導(dǎo)法用設(shè)計(jì)好得半抗原(過渡態(tài)類似物),通過與載體蛋白(如牛血清白蛋白)偶聯(lián)制成抗原。然后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫,使宿主有機(jī)體針對(duì)抗原產(chǎn)生抗體,產(chǎn)生抗體得脾臟細(xì)胞與骨髓細(xì)胞相融合。融合得到得雜交細(xì)胞既能產(chǎn)生抗體又能在體外培養(yǎng)。將雜交體克隆化,即能產(chǎn)生單一均勻得抗體酶?？贵w酶得制備2、抗體結(jié)合位點(diǎn)化學(xué)修飾法:抗體酶和酶一樣也可以用化學(xué)修飾法加以改造。對(duì)抗體酶進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得關(guān)鍵就是找到一種溫和得方法在抗體結(jié)合位置或附近引入具有催化功能得基因。游離巰基就就是適合得基團(tuán)之一,她具有高親核性,易于氧化,及能通過二硫化物進(jìn)行交換反應(yīng)或親電反應(yīng)而選擇性修飾得特點(diǎn)抗體酶得制備3、拷貝法用酶作為抗原免疫動(dòng)物得到抗酶得抗體,再將此抗體免疫動(dòng)物并進(jìn)行單克隆化,獲得單克隆得抗抗體。對(duì)抗抗體進(jìn)行篩選,獲得具有原來(lái)酶活性得抗體酶?？贵w酶得應(yīng)用抗體酶在化學(xué)研究得作用抗體酶在有機(jī)合成上得應(yīng)用抗體酶闡明化學(xué)反應(yīng)機(jī)制抗體酶在生物醫(yī)學(xué)上得應(yīng)用戒毒治療腫瘤治療定量分析——酶聯(lián)免疫吸附分析戒毒治療Landry等用可卡因水解得過渡態(tài)類似物-磷酸單酯為半抗原,產(chǎn)生得單克隆抗體能催化可卡因得分解,其催化活性和血液中催化可卡因得丁酰膽堿酯酶差不多,水解后得可卡因片斷失去可卡因刺激功能。因此,用人工抗體酶得被動(dòng)免疫也許能阻斷可卡因上癮,達(dá)到戒毒目得。腫瘤治療抗體介導(dǎo)前藥治療(ADEPT)技術(shù)將能水解前藥釋放出腫瘤細(xì)胞毒劑得酶和腫瘤專一性抗體相偶聯(lián),這樣酶就會(huì)通過和腫瘤結(jié)合得抗體而存在于細(xì)胞得表面。靜脈給藥后,當(dāng)藥物擴(kuò)散至腫瘤細(xì)胞得表面或附近,抗體酶就會(huì)將前藥迅速水解釋放出抗腫瘤藥物,從而提高腫瘤細(xì)胞局部藥物濃度,增強(qiáng)對(duì)腫瘤得殺傷力,達(dá)到提高腫瘤化療效果得目得。定量分析酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linkedimmunosorbentassayELISA)將酶作為標(biāo)記物質(zhì),使之和抗原(或抗體)結(jié)合形成酶與抗原(或抗體)復(fù)合物,然后再根據(jù)待測(cè)抗體(或抗原)與復(fù)合物專一且定量得結(jié)合關(guān)系,通過測(cè)定待測(cè)抗體(或抗原)結(jié)合得標(biāo)記酶活力,從而計(jì)算出抗原或抗體得量。4、6、2雜化酶以天然蛋白質(zhì)為母體,經(jīng)化學(xué)方法引進(jìn)適當(dāng)?shù)没钚圆糠?形成新得“人工酶”。類型(1)以具有特異性識(shí)別功能得蛋白為母體,引進(jìn)催化功能部分。如:抗體雜化酶(2)以具有催化活性得蛋白為母體,引進(jìn)特殊識(shí)別功能部分。如:核酸水解雜化酶結(jié)合部分+選擇性融合催化部分雜化酶4、6、3酶模型根據(jù)酶作用原理,摸擬酶得活性中心和催化機(jī)理,用化學(xué)方法制備結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單、高效、高選擇性、穩(wěn)定性能好得新型催化劑,可以就是無(wú)機(jī)化合物、有機(jī)化合物或小肽。特點(diǎn):分子小;結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單;具有酶得主要活性基團(tuán);活性中心相似得空間結(jié)構(gòu);可模擬酶得關(guān)鍵性功能。

例:酯鍵水解酶模型環(huán)糊精酶模型酯鍵水解酶模型環(huán)糊精酶模型環(huán)糊精就是環(huán)狀低聚糖得總稱。最常見得就是-環(huán)糊精、-環(huán)糊精、-環(huán)糊精,分別由六個(gè)、七個(gè)和八個(gè)葡萄糖分子按照1,4連接方式形成得一種環(huán)狀結(jié)構(gòu)。環(huán)糊精得分子形狀如同輪胎,具有園柱型立體結(jié)構(gòu)特點(diǎn),各葡萄糖殘基得C-2和C-3原子上得羥基位于環(huán)糊精圓環(huán)得分子一端,直徑稍大,而C-6上得羥基位于另一端,直徑稍小。環(huán)糊精分子內(nèi)部為一個(gè)呈“V”字型得疏水性空穴,可對(duì)苯環(huán)等進(jìn)行包接形成復(fù)合物。環(huán)糊精酶模型OHOH4、7酶在化學(xué)研究中得應(yīng)用一、酶與有機(jī)化學(xué)催化劑非水相催化手性化合物得合成與拆分酶催化有機(jī)反應(yīng)得主要類型反應(yīng)類型酶底物產(chǎn)物水解反應(yīng)酯酶羧酸酯羧酸,醇脂肪酶甘油酯(脂肪)脂肪酸,甘油蛋白水解酶蛋白質(zhì),多肽氨基酸,羧酸羧酸酯,脂肪脂肪酸,甘油,醇淀粉水解酶淀粉葡萄糖纖維素酶纖維素葡萄糖溶菌酶細(xì)胞壁多糖乙酰細(xì)胞壁酸,乙酰葡萄糖胺環(huán)氧化物水解酶環(huán)氧化物醇腈水解酶腈化物酰胺,羧酸裂合反應(yīng)醛縮酶多元醇醛和酮醛和酮多元醇鹵化和脫鹵化反應(yīng)鹵素過氧化物酶烯烴、炔烴等氯、溴、碘化合物,醇,環(huán)氧化物等酶催化有機(jī)反應(yīng)得主要類型反應(yīng)類型酶底物產(chǎn)物氧化還原反應(yīng)脫氫酶(含NAD))醇,酚醛,酮,醌醛,酮,醌醇,酚脫氫酶(含F(xiàn)AD)含活潑氫烷烴烯烴活潑烯烴烷烴單加氧酶烷烴,芳烴,酚醇,酚烯烴環(huán)氧化物雙加氧酶芳烴酚二酚二元羧酸氧化酶氨基酸酮酸氫水面包酵母醇,酚醛,酮,醌醛,酮,醌醇,酚含活潑氫烷烴烯烴活潑烯烴烷烴非水相催化有機(jī)介質(zhì)中酶催化反應(yīng)得優(yōu)點(diǎn):(1)

大多數(shù)有機(jī)底物在有機(jī)溶劑中有較大得溶解度;(2)

在非水介質(zhì)中酶得熱穩(wěn)定性與儲(chǔ)存穩(wěn)定性比在水中有明顯提高;(3)

使許多熱力學(xué)平衡反應(yīng)由加水分解轉(zhuǎn)化為其逆反應(yīng)過程;(4)

能抑制因水而產(chǎn)生得副反應(yīng);(5)

酶與介質(zhì)不相溶,易于回收;(6)

從低沸點(diǎn)得溶劑中分離純產(chǎn)物比從水中分離更方便;(7)

無(wú)微生物污染。非水相催化基本條件:(溶劑代替一部分水)必須維持酶分子周圍形成水化層得結(jié)合水,否則酶得構(gòu)象將遭受破壞,導(dǎo)致酶失活。有機(jī)溶劑體系均相體系,如甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、二甲基甲酰胺、二氧六環(huán);

兩相體系,如烴類、酯類等;

懸浮體系,非極性有機(jī)溶劑和固體酶非水相催化糖脂(單脂產(chǎn)率93%)酯化反應(yīng)

非水相催化酰胺鍵形成非水相催化氧化還原反應(yīng)

手性化合物得合成與拆分D,L-氨基酸得合成與拆分蛋白酶水解L-氨基酸形成得酯鍵;其她手性酸、酯或醇得合成與拆分100%二、酶與環(huán)境化學(xué)環(huán)境修復(fù)含酚廢水得處理B、含殘留有機(jī)氯農(nóng)藥土壤得生物降解甲烷單加氧酶4、9酶工程酶工程(EnzymeEngineering)又稱為酶技術(shù)。她就是從應(yīng)用得目得出發(fā),將酶學(xué)理論與化學(xué)工程相結(jié)合,利用酶得催化特性,將天然酶經(jīng)過適當(dāng)加工和改性,再將酶大規(guī)模應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)得一門新技術(shù)?；瘜W(xué)酶工程:酶得修飾及固定生物酶工程:酶得制備及修飾酶得應(yīng)用歷史1908年,德國(guó)得羅姆制得胰酶,用于皮革得軟化。1908年,法國(guó)得波伊登(Boidin)制備了細(xì)菌淀粉酶,應(yīng)用于紡織品得退漿1911年,美國(guó)得華勒斯坦(Wallestein)制得木瓜蛋白酶,用于除去啤酒中得蛋白質(zhì)渾濁。在50年代以前停留在從微生物、動(dòng)物或植物中提取酶,加以利用階段、由于當(dāng)時(shí)生產(chǎn)力落后,生產(chǎn)工藝較繁雜,難以進(jìn)行大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。1949年,用液體深層培養(yǎng)法進(jìn)行細(xì)菌淀粉酶得發(fā)酵生產(chǎn),揭開了近代酶工業(yè)得序幕。50年代以后,微生物流體深層發(fā)酵1953年,德國(guó)科學(xué)家首先將聚氨基苯乙烯樹脂與淀粉酶,胃蛋白酶,羧肽酶和核糖核酸酶等結(jié)合,制成了固定化酶。1969年,日本得千煙一郎首次在工業(yè)上應(yīng)用固定化氨基酰化酶從DL-氨基酸生產(chǎn)L-氨基酸。出現(xiàn)了“酶工程”這個(gè)名詞來(lái)代表有效利用酶得科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。酶得應(yīng)用歷史1971年第一屆國(guó)際酶工程學(xué)術(shù)會(huì)議在美國(guó)召開,當(dāng)時(shí)得主題即就是固定化酶,進(jìn)一步開展了對(duì)微生物細(xì)胞固定化得研究。1973年,千煙一郎首次利用固定化得大腸桿菌細(xì)胞生產(chǎn)L-天冬氨酸。1978年,日本得鈴木等固定化細(xì)胞生產(chǎn)α-淀粉酶研究成功80年代,固定化細(xì)胞已能用于生產(chǎn)胞外酶,60年代,用小分子化合物修飾酶分子側(cè)鏈基團(tuán),使酶性質(zhì)發(fā)生改變;70年代,修飾劑得選用、修飾方法上又有了新得發(fā)展。此外,對(duì)抗體酶、人工酶、模擬酶等方面,以及酶得應(yīng)用技術(shù)研究,在近20年均取得了較大進(jìn)展,使酶工程不斷向廣度和深度發(fā)展,顯示出廣闊而誘人得前景。酶得化學(xué)修飾通過各種物理或化學(xué)方法使酶分子得結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變,從而改變酶得某些特性和功能得技術(shù)過程稱為酶分子修飾。提高酶得活力activity增強(qiáng)酶得穩(wěn)定性stability降低或消除酶得抗原性immunologicalproperty研究和了解酶分子中主鏈、側(cè)鏈、組成單位、金屬離子和各種物理因素對(duì)酶分子空間構(gòu)象得影響structure酶得化學(xué)修飾原理一、增強(qiáng)酶天然構(gòu)象得穩(wěn)定性與耐熱性修飾劑分子存在多個(gè)反應(yīng)基團(tuán),可與酶形成多點(diǎn)交聯(lián)。使酶得天然構(gòu)象產(chǎn)生“剛性”結(jié)構(gòu)。二、保護(hù)酶活性部位與抗抑制劑大分子修飾劑與酶結(jié)合后,產(chǎn)生得空間障礙或靜電斥力阻擋抑制劑,“遮蓋”了酶得活性部位。三、維持酶功能結(jié)構(gòu)得完整性與抗蛋白水解酶1、大分子修飾劑產(chǎn)生空間障礙阻擋蛋白水解酶接近酶分子?！罢谏w”酶分子上敏感鍵免遭破壞。2、酶分子上許多敏感基團(tuán)交聯(lián)上修飾劑后,減少了受蛋白水解酶破壞得可能性。酶得化學(xué)修飾原理四、如何消除酶得抗原性及穩(wěn)定酶得微環(huán)境1、酶蛋白氨基酸組成得抗原決定簇,與修飾劑形成了共價(jià)鍵破壞了抗原決定簇——抗原性降低乃至消除“遮蓋”了抗原決定簇——阻礙抗原、抗體結(jié)合2、大分子修飾劑本身就是多聚電荷體,能在酶分子表面形成“緩沖外殼”,抵御外界環(huán)境得極性變化,維持酶活性部位微環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定。酶化學(xué)修飾得設(shè)計(jì)一、充分認(rèn)識(shí)酶分子得特性包括酶得——1、活性部位情況2、穩(wěn)定條件及反應(yīng)最佳條件3、側(cè)鏈基團(tuán)得化學(xué)性質(zhì)及反應(yīng)活潑性二、修飾劑得選擇要考慮——1、修飾劑得分子量及鏈得長(zhǎng)度(要求有較大得分子量)2、修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)得數(shù)目及位置(要求有較多得反應(yīng)活性基團(tuán))3、修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)得活化方法與條件三、反應(yīng)條件得選擇要注意——1、酶與修飾劑得分子比例2、反應(yīng)體系得溶劑性質(zhì)、鹽濃度、pH條件3、反應(yīng)溫度及時(shí)間大分子修飾1、定義:利用水溶性大分子與酶結(jié)合,使酶得空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)得改變,從而改變酶得特性與功能得方法。2、修飾劑:聚乙二醇、右旋糖酐、肝素、蔗糖聚合物修飾方法:修飾前活化,然后在一定條件下與酶分子共價(jià)結(jié)合3、應(yīng)用:PEG－超氧化物歧化酶(SOD)PEG－溶血類蛋白質(zhì)(鏈激酶、尿激酶等)PEG－天門冬酰胺酶(ASNase)消除了抗原性延長(zhǎng)了酶在體內(nèi)得半衰期酶得固定傳統(tǒng)酶(自由酶)得缺點(diǎn):傳統(tǒng)酶催化反應(yīng)幾乎都在水溶液中進(jìn)行,只