DBXM126-2021牛出血性敗血病防治技術(shù)規(guī)范

ICS?FORMTEXT11.220FORMTEXTCCSB41FORMTEXT?????DBFORMTEXT22DBFORMTEXT22/FORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXT?????FORMTEXT牛出血性敗血病防治技術(shù)規(guī)范FORMTEXTTechnicalspecificationsforpreventionandcureofbovinehaemorrhagicsepticaemiaFORMTEXT點擊此處添加與國際標(biāo)準(zhǔn)一致性程度的標(biāo)識FORMDROPDOWNFORMTEXT（本稿完成日期：2021-11-20）FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實施FORMTEXT吉林省市場監(jiān)督管理廳???發(fā)布DBXX/XXXXX—XXXXI前??言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。本文件由吉林省畜牧管理局提出并歸口。本文件起草單位：吉林省動物疫病預(yù)防控制中心。本文件主要起草人：吳丹、于欽磊、白翠、馬曉媛、胡澤宇、曹東陽、楊金鑫、朱奕霏、劉冬冬、李偉。牛出血性敗血病防治技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了牛出血性敗血病的診斷、防治措施、疫情報告、疫情處置、檔案管理的技術(shù)要求。本文件適用于牛出血性敗血病的診斷和防治。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過中文的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件的必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅注日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T27530牛出血性敗血病診斷技術(shù)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范NY/T3075畜禽養(yǎng)殖場消毒技術(shù)NY/T3445畜禽養(yǎng)殖場檔案規(guī)范NY/T3467牛羊飼養(yǎng)場獸醫(yī)衛(wèi)生規(guī)范NY/T5030無公害食品畜禽飼養(yǎng)獸藥使用準(zhǔn)則DB22/T3137動物疫情報告管理規(guī)范農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范定義和術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本文件。牛出血性敗血病bovinehaemorrhagicsepticaemia又名牛巴氏桿菌病，由多殺性巴氏桿菌某些血清型引起的一種牛的高度致死性、急性敗血性傳染病，發(fā)病率與死亡率都極高，主要發(fā)生在亞洲、非洲、中東及南歐的一些地區(qū)。診斷流行病學(xué)特點傳染源該病的傳染源為多殺性巴氏桿菌（pasteurellamultocida），為革蘭氏陰性球桿狀或短桿狀菌，兩端鈍圓，無鞭毛，不形成芽孢。根據(jù)其莢膜抗原和菌體抗原區(qū)分血清型，前者可分為A、B、D、E、F5個血清型，后者可分為16個血清型。引起牛出血性敗血病的多殺性巴氏桿菌以血清型6：B和6：E為主。傳播途徑主要通過病?；驇Ь＃òń】祹Ь：筒∮髱Ь＃┑呐判刮?、分泌物經(jīng)消化道和呼吸道傳播。多殺性巴氏桿菌進入動物體內(nèi)后大量寄生在牛的上呼吸道和消化道黏膜上，各種誘因使牛機體抵抗力降低時，發(fā)生內(nèi)源性感染。外源性傳染多經(jīng)消化道，偶爾可經(jīng)皮膚黏膜的損傷或吸血昆蟲的叮咬而傳播。不良因素（如飼養(yǎng)管理不良、氣候突變、長途運輸、饑餓、寒冷等）可誘發(fā)該病。易感動物各年齡的牛均易感，無明顯的品種、日齡和性別差異。潛伏期潛伏期一般為2d~5d。發(fā)病季節(jié)發(fā)病無明顯季節(jié)性，但冷熱交替、氣候劇變的時候多發(fā)，也可呈地方流行性。發(fā)病率與病死率不同毒株致病性有所差異，如在感染初期不采取治療措施，強毒力毒株導(dǎo)致的病死率可接近100%。在地方性流行地區(qū)，死亡病例主要為較大犢牛和青年牛。臨床表現(xiàn)敗血型病牛體溫升高，高達41℃～42℃，隨后出現(xiàn)全身癥狀，輕癥病牛表現(xiàn)為腹痛、開始下痢，糞便初為粥樣，后呈流狀，其中混有粘液，粘膜片及血液，惡臭，有時鼻孔內(nèi)和尿中有血。下痢開始后體溫下降，迅速死亡。病程多為12h～24h，最急性病例中，可發(fā)生突然死亡，無明顯臨床癥狀。浮腫型病牛體溫升高，頸部、咽喉部及胸前部皮下出現(xiàn)迅速擴展的炎性水腫，同時伴有舌及周圍組織的高度腫脹，舌伸出齒外，呈暗紅色。呼吸高度困難，皮膚和粘膜普遍發(fā)紺，也有下痢和某一肢體發(fā)生腫脹者，常因窒息而死。病程多為12h～36h。肺炎型病牛體溫升高,呼吸困難,干咳,流泡沫樣鼻液,后鼻液呈膿性。胸部叩診有痛感。病初便秘，后腹瀉，糞便惡臭并混有血液。病程一般3d～7d左右。病理變化多數(shù)牛呈現(xiàn)由嚴(yán)重充血水腫引起的頸部明顯腫脹。敗血型呈一般敗血癥變化，內(nèi)臟器官出血，淋巴結(jié)顯著水腫，胸腹腔有大量滲出液；浮腫型在咽喉或頸下有漿液浸潤，切開浮腫部流出深黃色透明液體，間或雜有出血，咽周組織和會咽軟骨韌帶呈黃色膠樣浸潤，咽淋巴結(jié)和頸前淋巴結(jié)高度急性腫脹；肺炎型主要表現(xiàn)為胸膜炎和格魯布氏性肺炎，胸腔中有大量漿液性纖維素性滲出，肺切面呈大理石狀，心包與胸膜粘連，內(nèi)有干酪樣壞死物。實驗室診斷樣品采集病牛或病死牛應(yīng)按NY/T541要求采集鼻腔拭子、抗凝全血或病變組織。病原分離鑒定按照GB/T27530執(zhí)行。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)參見附錄A。

結(jié)果判定臨床疑似病例符合牛出血性敗血病的流行病學(xué)特點、臨床表現(xiàn)和病理變化，判定為臨床疑似疫情。確診病例對臨床疑似病例，經(jīng)上述任一實驗室診斷方法檢測，結(jié)果為陽性的，判定為確診疫情。防治措施免疫免疫接種應(yīng)選擇符合《獸藥管理條例》，且具有生產(chǎn)許可證和批準(zhǔn)文號的牛多殺性巴氏桿菌病滅活疫苗。免疫時間及程序散發(fā)地區(qū)一年免疫1次，多發(fā)地區(qū)每年免疫2次，具體免疫時間根據(jù)各地區(qū)牛出血性敗血病流行情況而定。發(fā)生疫情時，應(yīng)對同群的假定健康牛進行緊急接種。接種方法免疫方法依據(jù)疫苗使用說明。注意事項免疫操作后應(yīng)及時收集和消毒免疫器械（針頭、注射器、包裝盒等）和殘余疫苗，防止被牛只誤食，防止具有毒力的疫苗菌毒株擴散。治療抗菌消炎療法使用青霉素、鏈霉素、四環(huán)素族抗生素、磺胺類藥物以及新上市的有關(guān)療抗菌藥物進行治療。獸藥的使用應(yīng)符合NY5030的規(guī)定。選用藥敏試驗敏感的藥物進行治療，不應(yīng)使用國家違禁藥物，并有完整的獸藥使用記錄，包括藥品來源、使用時間和用量，有休藥期規(guī)定的，應(yīng)按規(guī)定執(zhí)行。對癥輔助療法在應(yīng)用抗菌消炎療法的同時，再結(jié)合解熱、鎮(zhèn)痛、補液、解毒、強心的對癥輔助療法。中藥療法大黃60g、薄荷60g、玄參60g、柴胡60g、板藍根60g、桔梗60g、連翹60g、荊芥60g、酒黃芩30g、甘草30g、馬勃30g、牛蒡子30g、青黛30g、陳皮30g、滑石120g、酒黃連25g、升麻20g。水煎候溫灌服（成牛用量）或使用國家批準(zhǔn)的其他中草藥制劑。加強營養(yǎng)治療期間應(yīng)適當(dāng)補充維生素，并給予易消化飼料，飼料應(yīng)符合NY/T5032的要求。飼養(yǎng)管理養(yǎng)殖場應(yīng)按照NY/T815要求保證牛的營養(yǎng)需要，并符合NY/T3467要求。飼養(yǎng)人員應(yīng)定期觀察牛只的采食情況和精神狀態(tài)。當(dāng)牛處于妊娠期、周邊場發(fā)生疫情等高風(fēng)險狀態(tài)時，應(yīng)提高觀察頻率，及時發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)異常和疑似病牛。當(dāng)有異常疾病發(fā)生或牛只死亡時，應(yīng)聘請當(dāng)?shù)鼐哂袌?zhí)業(yè)獸醫(yī)資質(zhì)的人員進行診斷和治療。消毒養(yǎng)殖場應(yīng)根據(jù)NY/T3075定期對牛舍及周邊環(huán)境進行消毒，消毒藥應(yīng)經(jīng)常更換。一旦發(fā)生牛出血性敗血病，應(yīng)對感染和發(fā)病牛及其污染物、病死牛及其污染物、被污染環(huán)境、無害化處理環(huán)節(jié)等實行有效實時消毒。疫情報告發(fā)現(xiàn)該病疑似病例的單位和個人，應(yīng)按DB22/T3137規(guī)定報告疫情，不得出售、轉(zhuǎn)移該場所動物，不得拋棄死亡動物。報告者在報告疫情的同時，應(yīng)及時將染疫、疑似染疫牛與其他牛隔離，并保存好病死牛，以便動物疫病預(yù)防控制機構(gòu)進行處置。疫情處置確診后應(yīng)立即對隔離的病牛進行藥物治療，并對同群假定健康牛進行觀察、測溫，可用磺胺類藥物或其他抗生素進行做緊急藥物預(yù)防。進行疫源分析和流行病學(xué)調(diào)查，并詳細(xì)記錄。緊急免疫接種，禁止在污染的草場上放牧。所有病死牛及可能被污染的產(chǎn)品嚴(yán)格按照病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范進行無害化處理。檔案管理所有記錄應(yīng)按照NY/T3445進行管理，并保證準(zhǔn)確、可靠、完整。

（規(guī)范性附錄）多殺性巴氏桿菌熒光PCR檢測方法儀器設(shè)備高速冷凍離心機（最高離心速度不低于12000r/min）。生物安全柜。-20熒光PCR儀。微量移液器（0.5μL?10μL、2μL?20μL、20μL?200μL、200μL?1000μL）。耗材濾芯吸頭（10μL、200μL、1000μL）。Eppendorf管（1.5mL、0.5mL、0.2mL）。PCR管（0.2mL）。質(zhì)控品陽性對照，含多殺性巴氏桿菌菌株的培養(yǎng)液。陰性對照，無核酸酶水。試劑DNA提取試劑盒。熒光PCR預(yù)混液。引物與探針，見表A.1。引物與探針序列及濃度名稱序列濃度上游引物F5’-GCCACCTGCCATAAGATGAGC-3’10pmol/μL下游引物R5’-CGTAGGAGTCTGGACCGTGTC-3’10pmol/μL探針5’-FAM-GCCTACCAAGCCTGCGATCTCTAGC-TAMRA-3’5pmol/μL操作步驟核酸提取按DNA提取試劑盒方法或其他等效方法提取DNA模板。熒光PCR擴增體系在試劑準(zhǔn)備區(qū)打開和配制試劑，配制完畢后應(yīng)及時將剩余試劑放回貯存區(qū)域。取0.2mLPCR反應(yīng)管，在冰浴條件下配制20μL反應(yīng)體系，按照表A.2依次加入以下成分，同時設(shè)陰性、陽性對照。加完后蓋緊蓋子。樣品反應(yīng)體系體系組分用量2╳PCR預(yù)混液10.0μL無酶核酸水5.9μL上游引物F0.8μL下游引物R0.8μL探針溶液0.5μLDNA模板2.0μL總量20.0μL熒光PCR的擴增條件設(shè)置在核酸擴增區(qū)將PCR管置熒光PCR儀上按如下程序擴增：95℃預(yù)變性30s；95℃變性15s，60℃退火1min，共40結(jié)果分析條件設(shè)定試驗檢測結(jié)束后，根據(jù)生成的熒光曲線和Ct值直接讀取檢測結(jié)果，Ct值為每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。原則上可設(shè)定儀器自動模式分析確定閾值基線，特殊情況下閾值設(shè)定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照品擴增曲線的最高點，不同儀器可對閾值線的位置進行調(diào)整，然后讀取檢測結(jié)果。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)陰性對照無Ct