常規(guī)組織病理技術(shù)

常規(guī)組織病理技術(shù)

寧波明州醫(yī)院病理科主講人：周曉龍2016年2月3號病理標(biāo)本的接收病理標(biāo)本的接收是在取材、固定組織前首先要做的第一步工作，它是臨床與病理科交接的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，它為開展病理學(xué)檢查、病理檔案的保存奠定了基礎(chǔ)。

1．首先核對病理申請單與標(biāo)本上的紅色號碼是否一致。

2．核查病理申請單上寫明的送檢標(biāo)本及數(shù)目是否與實(shí)際送檢標(biāo)本一致。

3．觀察送檢標(biāo)本的大小及固定液比例是否合適。

(1)穿刺活檢及纖支鏡所取的小標(biāo)本，4％中性甲醛(10％中性福爾馬林)固定組織的量應(yīng)在6～10倍。

(2)對于較大的手術(shù)切除標(biāo)本，應(yīng)及時(shí)切開固定；核對后將病理申請單和標(biāo)本編上病理標(biāo)本號。

4．將病人姓名、性別、年齡、病歷號、科別、臨床診斷、部位、標(biāo)本來源、標(biāo)本例數(shù)等逐項(xiàng)錄入電腦存儲。

5．作為病理資料不僅要做好計(jì)算機(jī)錄入工作，還須進(jìn)行文字登記，以便病理檔案長期保存。常規(guī)石蠟切片制作程序組織固定取材固定脫水

透明浸臘包埋切片染色封片

顯微鏡觀察

一固定1.組織固定的意義①防止組織細(xì)胞自溶和腐?、诒３纸M織細(xì)胞正常生活時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)③沉淀和凝固各種物質(zhì),硬化組織便于制片和染色后的觀察2.固定的注意事項(xiàng)①一般應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)固定,越及時(shí)越好,并將組織上的血液,分泌物沖洗干凈②固定劑的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上③固定的時(shí)間應(yīng)視組織的不同和大小決定,一般小組織4-6小時(shí),大組織18-24小時(shí)或更長④有特殊要求的須用特殊的固定劑⑤不同組織在固定時(shí)應(yīng)注意特殊的處理方法3.常用的固定劑①甲醛(10%福爾馬林)甲醛100ml水900ml②中性甲醛甲醛100mlNa2HPO46.5gNaH2PO4H2O4g蒸餾水至900ml

③乙醇-甲醛(AF液)甲醛100ml95%乙醇850ml冰醋酸50ml④其他

4%多聚甲醛:多聚甲醛4g,加蒸餾水50ml,加熱至60度,攪拌加入1mol/LNaoH數(shù)滴,直至溶液變清,冷卻后用0.1mol/LPBS(PH7.4)加至100ml.Carnoy氏液(糖原,DNA,RNA,尼氏小體固定用,小組織20-40分鐘,不超過3-4小時(shí))冰醋酸10ml氯仿30ml無水乙醇60ml

二取材1.外科的活體組織取材①臨床手術(shù)取材(大標(biāo)本)注意腫瘤的部位形狀大小顏色及周邊組織的關(guān)系,有無完整包膜,測量體積,包括長度寬度高度.手術(shù)大標(biāo)本必須進(jìn)行預(yù)取材預(yù)固定.②活體小組織(小標(biāo)本)組織標(biāo)本體積小,在取材時(shí)應(yīng)特別小心,用伊紅讓標(biāo)本著色,并用插鏡紙包裹,以防丟失,應(yīng)標(biāo)明粒數(shù).多瓶組織應(yīng)將附號標(biāo)清楚.組織塊的面積通常為2.0

cmX

1.5cm，厚度不超過3.0mm。太大太厚的組織塊常會固定不充分，而影響脫水和制片。組織塊的數(shù)量依具體情況而定，一般以滿足診斷和相關(guān)研究需要為準(zhǔn)。

三脫水脫水的目的:組織最終將包埋在石蠟中,才能進(jìn)行切片,為達(dá)到這一目的,首先須將組織內(nèi)的水分置換出來,以利于透明劑滲入,這一過程為脫水.(一般情況下,應(yīng)將大小標(biāo)本分別脫水.標(biāo)本脫水從低濃度開始,一般人標(biāo)本從70%或75%乙醇,動物標(biāo)本從50%乙醇開始)脫水方法及注意事項(xiàng):常用試劑為乙醇,某些情況下用丙酮.快速石蠟切片常用丙酮為脫水劑,尸體解剖標(biāo)本一般在無水乙醇后加丙酮因?yàn)槊撍畡┑男屡f影響脫水時(shí)間,必須靈活掌握,根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室情況,定時(shí)更換脫水劑.四透明

透明的目的:因?yàn)榇蠖鄶?shù)脫水劑不能和石蠟相混合,組織內(nèi)的水份脫干凈后,必須通過透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋.常用透明劑種類及注意事項(xiàng):二甲苯、甲苯、松節(jié)油、苯透明要注意的關(guān)鍵是時(shí)間,透明時(shí)間不夠,石蠟不能完全進(jìn)入組織,影響到包埋切片.但是如果透明過度,組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)量.特別是肝脾等組織.

五浸蠟

目的和注意事項(xiàng)組織經(jīng)過透明后要浸入石蠟(火棉膠碳蠟明膠)內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當(dāng)?shù)挠捕?以利切片.一般浸蠟須經(jīng)過2到3次,石蠟的溶點(diǎn)為56-58度左右,目前常用的脫水機(jī)上是兩個(gè)蠟缸.浸蠟時(shí)要注意掌握好石蠟的溫度和浸蠟的時(shí)間

六包埋

注意事項(xiàng):控制好包埋用石蠟的溫度和組織塊的溫度,注意組織塊包埋的方向,切面朝下,組織應(yīng)盡量平整.蠟塊冷卻后將組織外圍的石蠟進(jìn)行修整,以便利于連續(xù)切片.

七切片

1.準(zhǔn)備工作:清洗干凈的玻片恒溫烤片箱毛筆眼科彎鑷染片架鋒利的切片刀、石蠟塊預(yù)先冷卻2.注意事項(xiàng):

①熟練掌握切片機(jī)的性能②展片箱的水溫控制在45度左右③固定好蠟塊和切片刀④切片附貼好后,放入65-70度烤箱中烤片20-30分鐘

八染色

目的:將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細(xì)胞等成分染上不同的顏色產(chǎn)生不同的折射,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察..

HE染色：蘇木素-伊紅染色HE染色是石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。其原理為蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。步驟:1.將切好的組織切片經(jīng)烤片后入二甲苯ⅠⅡ脫蠟各約10分鐘左右,然后入無水乙醇洗去二甲苯,約1-2分鐘,依次入95%乙醇,80%乙醇70%乙醇至自來水,蒸餾水.2.將切片浸入配置好的蘇木素液內(nèi)5-10分鐘左右,自來水洗1分鐘,75%鹽酸乙醇分化約30秒,返藍(lán)1-2分鐘自來水洗5-10分鐘3.95%乙醇1分鐘后入酸化的伊紅10秒至1分鐘,入95%乙醇ⅠⅡ各1分鐘無水乙醇ⅠⅡ各1分鐘,電吹風(fēng)吹干.

染色結(jié)果:胞核呈藍(lán)色,胞漿淡紅色,結(jié)締組織鮮紅色,紅細(xì)胞橙紅色.染色液配置:蘇木素是世界上唯一較好的常規(guī)細(xì)胞核染色劑,配置方法很多,各有特點(diǎn),常用的有:Harris蘇木素Ehrlich蘇木素Mayer蘇木素等.在日常工作中,用Gill改良蘇木素:蘇木素2g溶于無水乙醇250ml中,再將硫酸鋁17.6g溶于蒸餾水750ml中,兩液溶解后將其混勻,加入碘酸鈉0.2g,最后加入冰醋酸20ml

特點(diǎn):配置簡單,色澤鮮艷,染液耐用..染色注意事項(xiàng):1