動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體·課件

歡迎走進(jìn)現(xiàn)代生物科技專題課堂

細(xì)@胞@工@程新化上梅中學(xué)康力杰植物組織培養(yǎng)VS比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞的增殖培養(yǎng)基（半）固體、營養(yǎng)、植物激素液體、營養(yǎng)、動(dòng)物血清結(jié)果培養(yǎng)成植株培育成細(xì)胞系（株）培養(yǎng)目的快速繁殖，培育無病毒植株。獲得細(xì)胞的產(chǎn)物等思考：植物細(xì)胞工程中，除了植物組織培養(yǎng)技術(shù)外，還有什么技術(shù)？過程如何？動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)溫故而知新——植物細(xì)胞雜交（馬鈴薯番茄）融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁植物體細(xì)胞的雜交雜種細(xì)胞AB雜種植株脫分化愈傷組織再分化植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A去壁去壁人工誘導(dǎo)植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B動(dòng)物細(xì)胞可以融合嗎？如果可以，兩者相同嗎？1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH

36.5+0.5度；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液10代細(xì)胞50代細(xì)胞無限傳代單個(gè)細(xì)胞加培養(yǎng)液（分解彈性纖維）胰蛋白酶剪碎過程：細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合帶著問題走進(jìn)課堂？2.2動(dòng)物細(xì)胞工程自主閱讀，p52第2自然段，思考下列問題：1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合

cellfusion？（概念要點(diǎn)）兩個(gè)細(xì)胞正在融合受精作用①

兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞②

一個(gè)細(xì)胞（雜交單核細(xì)胞）動(dòng)物細(xì)胞融合2、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？兩者的融合過程是否也一樣？提醒：有什么異同點(diǎn)呢？

誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇PEG

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的仙臺(tái)病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因?yàn)闇缁畹牟《灸苁辜?xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合，不滅活的話會(huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。比較植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法用途獲得雜種植株細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒

3、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義呢？打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：制備單克隆抗體。1、抗體1.1概念：

抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白

Ig。1.2來源：

B淋巴細(xì)胞。單克隆抗體McAb

B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。

２．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。

３．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。自主閱讀P52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問題？2、單克隆抗體McAb（概念）

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。

特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高、產(chǎn)量大。

如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？生產(chǎn)單克隆抗體需要那些物質(zhì)和技術(shù)呢？

3、單克隆抗體McAb制備過程專一抗體檢驗(yàn)陽性單克隆抗體

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔篩選創(chuàng)始人：米爾斯坦思考問題：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體?4、單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：1、臨床診斷、治療疾病。2、作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤。課堂小結(jié)動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程兩個(gè)過程三個(gè)“一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法－－滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞－－雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢你記住了嗎？1、動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（）

A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和

B.制備單克隆抗體

C.培育新物種

D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞2、動(dòng)物細(xì)胞融合過程中所用的誘導(dǎo)劑——滅活的病毒，抗原性和感染力的有無是（

）

A.失去抗原性，具有感染力

B.具有抗原性，也具有感染力

C.失去抗原性，也失去感染力

D.具有抗原性，失去感染力B課堂練習(xí)D3、單克隆抗體是指（

）A.單個(gè)骨髓瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體

B.單個(gè)B淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生的抗體C.單個(gè)雜交瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生的高度單一的抗體D.單個(gè)抗體通過克隆化，產(chǎn)生大量抗體4、生產(chǎn)單克隆抗體時(shí)，在培養(yǎng)液中加入某種試劑能篩選出雜交瘤細(xì)胞，因?yàn)樵撛噭?/p>

）A.能抑制淋巴細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制B.能阻止淋巴細(xì)胞的原癌基因被激活C.選擇性抑制骨髓瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制D.能阻止雜交瘤細(xì)胞核糖體上所有蛋白質(zhì)的合成CC5、“生物導(dǎo)彈”是指（

）A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞

D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物D6、科學(xué)家們用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與