TSATA 070-2024 水中擬柱孢藻毒素的測定酶聯(lián)免疫吸附法

ICS13.060.01DeterminationofCylindrospermopsininwaterEnzymelinkedimmunosorbentassayIT/SATA070—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4方法原理 5試劑與材料 6儀器和設(shè)備 7樣品 7.1樣品的采集 7.2樣品的保存 7.3試樣的制備 7.4空白試樣的制備 28分析步驟 28.1儀器參考條件 28.2校準(zhǔn) 28.3測定 29結(jié)果計(jì)算與表示 29.1定量分析 29.2結(jié)果表示 210檢出限和測定下限 211精密度和準(zhǔn)確度 311.1精密度和準(zhǔn)確度 311.2準(zhǔn)確度 312質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 312.1空白試驗(yàn) 312.2校準(zhǔn)曲線 312.3連續(xù)校準(zhǔn) 312.4平行樣的測定 312.5基體加標(biāo) 312.6陽性對照質(zhì)控樣品的測定 313廢物處理 3T/SATA070—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意擬柱孢藻毒素屬有毒有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)操作過程應(yīng)按規(guī)定要求佩戴防護(hù)器具，避免接觸皮膚和衣物。本文件由深圳市分析測試協(xié)會提出并歸口。本文件起草單位：廣東粵海水務(wù)檢測技術(shù)有限公司、廣東粵海水務(wù)股份有限公司。本文件主要起草人：路曉鋒、楊穎、郭瞻宇、彭俊翔、游文丹、王慶生、何振乾、王樊、黃俊能、吳凡、黃子其、陸心卉、韋雪檸、陳桂暢、戴歡、吳金鑫、黃慧星、龍慶平、馮國仁、文金麗、鄭開云、楊創(chuàng)濤、彭鷺、李秀虹。1T/SATA070—2024水中擬柱孢藻毒素的測定酶聯(lián)免疫吸附法本文件提供了測定水中擬柱孢藻毒素的酶聯(lián)免疫吸附法。本文件適用于地表水中擬柱孢藻毒素的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法HJ91.2-2022地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4方法原理通過特異性抗體來識別檢測擬柱孢藻毒素，加入底物后產(chǎn)生顏色反應(yīng)，樣品中的擬柱孢藻毒素濃度與吸收光強(qiáng)度成反比，于波長450nm處測量吸光度。5試劑與材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為符合GB/T6682標(biāo)準(zhǔn)的一級水。5.1擬柱孢藻毒素檢測試劑盒。6儀器和設(shè)備6.1酶標(biāo)儀：具有450nm波長模塊。6.2水浴鍋：可調(diào)節(jié)溫度至37℃。6.3冰箱：可調(diào)節(jié)溫度至-20℃。6.4實(shí)驗(yàn)器皿：所有操作過程中涉及的器皿應(yīng)清洗干凈后晾干（注：清洗過程避免使用洗衣粉洗滌，因洗衣粉可能含有熒光增白劑，對熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果會造成影響）。7樣品7.1樣品的采集參照HJ91.2-2022的相關(guān)規(guī)定采樣，用預(yù)先洗干凈并干燥的磨口玻璃瓶采集水樣。7.2樣品的保存采集的水樣在-20℃下保存，5天內(nèi)完成分析。7.3試樣的制備2T/SATA070—2024取地表水樣品50mL，經(jīng)兩次反復(fù)凍融處理，其中冷凍溫度-20℃,水浴溫度37℃,再從中取1mL凍融后的樣品，經(jīng)5000rpm離心5min，離心后取50μL樣品直接檢測。7.4空白試樣的制備以實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照試樣制備（6.3）相同操作步驟，制備空白試樣。8分析步驟8.1儀器參考條件檢測波長450nm,振蕩時(shí)間3s。8.2校準(zhǔn)8.2.1校準(zhǔn)曲線的繪制配制6個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.05、0.10、0.25、0.50、1.00和2.00μg/L。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中擬柱孢藻毒素濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以儀器讀取的吸光度值與空白濃度下的吸光度值的比值百分比為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。8.3測定8.3.1試樣測定取待測樣品（6.3），按照與繪制校準(zhǔn)曲線相同的儀器分析條件進(jìn)行測定。8.3.2空白試驗(yàn)按照與試樣測定（7.3.1）相同的操作步驟進(jìn)行空白試樣（6.4）的測定。9結(jié)果計(jì)算與表示9.1定量分析樣品中擬柱孢藻毒素濃度ρ按照公式（1）和公式（2）進(jìn)行計(jì)算。式中：X——樣品中擬柱孢藻毒素的質(zhì)量濃度對數(shù)值；y——測定吸光度值與空白標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度值比值的百分比（Bi/B0），%；a——校準(zhǔn)曲線方法的斜率；b——校準(zhǔn)曲線方法的截距。式中：ρ——樣品中擬柱孢藻毒素的質(zhì)量濃度，μg/L；x——樣品中擬柱孢藻毒素的質(zhì)量濃度對數(shù)值。9.2結(jié)果表示當(dāng)測定結(jié)果＜1.00μg/L時(shí)，保留至小數(shù)點(diǎn)后2位；當(dāng)測定結(jié)果≥1.00μg/L時(shí)，保留3位有效數(shù)字。10檢出限和測定下限3T/SATA070—2024當(dāng)樣品體積為50.0μL時(shí)，本方法的檢出限為0.05μg/L，測定下限為0.20μg/L。11精密度和準(zhǔn)確度11.1精密度和準(zhǔn)確度4家實(shí)驗(yàn)室對6種目標(biāo)物低、中、高三個(gè)濃度水平的空白加標(biāo)樣品進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.7%～11.2%、3.5%～10.4%、3.2%～6.3%；實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.1%、3.6%、1.0%。11.2準(zhǔn)確度4家實(shí)驗(yàn)室對地表水樣品進(jìn)行低、中、高三個(gè)濃度水平的加標(biāo)回收測定。地表水加標(biāo)回收率范圍分別為98.5%～102%、102%～104%、98.0%～103%。12質(zhì)量保證和質(zhì)量控制12.1空白試驗(yàn)每批樣品需至少測定2個(gè)空白樣品，測定空白值不得超過方法檢出限。否則應(yīng)查明原因，重新分析直至合格之后才能測定樣品。12.2校準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.995，否則應(yīng)重新繪制校準(zhǔn)曲線。12.3連續(xù)校準(zhǔn)每20個(gè)樣品或每批次（少于20個(gè)樣品/批）應(yīng)分析一個(gè)曲線中間濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液，其測定結(jié)果與初始曲線在該點(diǎn)測定濃度的相對偏差應(yīng)小于20%，否則應(yīng)查找原因，重新繪制校準(zhǔn)曲線。12.4平行樣的測定每批樣品應(yīng)進(jìn)行至少10%的平行樣品（不少于1個(gè)）測定。平行樣的相對偏差應(yīng)≤20%。12.5基體加標(biāo)每批樣品應(yīng)進(jìn)行至少10%的基體加標(biāo)樣（不少于1個(gè)）測定，