06微生物的分離與純化

實(shí)驗(yàn)六、微生物的分離與純化

自然界中各種微生物混合生活在一起，即使取得很少量的樣品也是許多微生物共存的群體。人們要研究某種微生物的特征，首先須使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。微生物的平板分離技術(shù)為人類獲得豐富的微生物資源以及在工、農(nóng)、醫(yī)、環(huán)境、動植物細(xì)胞培養(yǎng)等方面做出了巨大貢獻(xiàn)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、掌握倒平板的方法2、掌握常用微生物分離純化技術(shù)3、學(xué)習(xí)平板菌落計(jì)數(shù)的基本方法

二、實(shí)驗(yàn)原理采用適宜（選擇）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑有利于目標(biāo)微生物的生長，從而分離獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法分離細(xì)菌用牛肉膏培養(yǎng)基，分離放線菌用高氏培養(yǎng)基，分離真菌用馬丁氏-孟加拉紅培養(yǎng)基。依據(jù)一個單細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落，從而推算樣品中含有多少細(xì)菌、放線菌以及真菌的活菌數(shù)目土壤是微生物生存的大本營，種類和數(shù)量及其豐富三、實(shí)驗(yàn)步驟：從土壤中稀釋分離微生物的方法如下：（一）土壤懸液的制備準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱0.5克土壤放入4.5ml無菌水中，手搖振蕩(5-10min)，使土樣分散。（二）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板：取一瓶牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基熔化后，待冷至55-60℃時，倒平板。(三-1)稀釋平板分離法1、懸液稀釋：（本實(shí)驗(yàn)取0.5g放入4.5ml無菌水中稀釋）2、懸液涂布(演示):無菌操作(從稀至濃將菌液涂布均勻)采用10－6，10－7，10－8稀釋液各0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板平板涂布(三-2)劃線分離法——平皿劃線（演示）每人用1個牛肉膏蛋白胨平板做劃線分離，從上次實(shí)驗(yàn)室環(huán)境生長的單菌種挑取劃線分離平皿劃線分離法結(jié)果分析:1.計(jì)數(shù)：（牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30～300個左右的稀釋度來計(jì)數(shù))我所計(jì)數(shù)的平板稀釋度是：

單菌落數(shù)目：

、

。2.計(jì)算：活菌數(shù)目/每克土壤＝

（計(jì)算過程）＝

菌落形成單位(CFU)/每克土壤[每克土壤中菌落形成單位數(shù)＝同一稀釋度2次重復(fù)的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×10]3.對你和同伴的細(xì)菌計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行分析思考題1.你所做的涂布平板和劃線平板是否較好的得到了單菌落，如果不是，請分析原因；2.怎樣判斷稀釋涂布平板記數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠？需要掌握哪幾個關(guān)鍵？3.平板菌落記數(shù)法中，為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至