《職業(yè)衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范 第5部分 生物樣本類（征求意見稿）》

ICS13.100CCSC5232Guidelinesforthedevelopmentoflaboratoryqualitycontrolsamples（QCM）ofoccupationalhealthiPart5biologicalspeIDB32/TXXXX.1—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語、定義 4生物樣本類質(zhì)量控制樣品的技術(shù)要求 5生物樣本類質(zhì)量控制樣品的研制步驟 26生物樣本類質(zhì)量控制樣品的制備 27生物樣本類質(zhì)量控制樣品的貯存/使用 3附錄A（資料性） 4附錄B（資料性） 7附錄C（資料性） 7DB32/TXXXX.1—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件為DB/TXXXX《職業(yè)衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范》的第5部分。DB/TXXXX分為以下5個(gè)部分：——第1部分：固體吸附劑管類；——第2部分：濾料類；——第3部分：吸收液類；——第4部分：粉塵類（游離二氧化硅測(cè)定）；——第5部分：生物樣本類。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無錫市疾病預(yù)防控制中心、蘇州市疾病預(yù)防控制中心、蘇州工業(yè)園區(qū)疾病防治中心有限公司、東南大學(xué)、無錫市第八人民醫(yī)院本文件主要起草人：周長美、朱寶立、龔燕、孟元華、劉文衛(wèi)、張利明、李大偉、王樂華、史俊文、羅凱、宋振威1DB32/TXXXX.1—2024職業(yè)衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制樣品研制規(guī)范第5部分：生物樣本類本文件適用于職業(yè)衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室研制生物樣本類質(zhì)量控制樣品（QCM）。本文件規(guī)定了該類QCM的技術(shù)要求、制備步驟、規(guī)范使用等原則。本文件的基本用戶是需要研制特定的QCM的實(shí)驗(yàn)室人員。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T15000.1標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(1)在技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中陳述標(biāo)準(zhǔn)樣品的一般規(guī)定GB/T15000.2標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則第2部分：常用術(shù)語及定義GB/T15000.3標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則(3)標(biāo)準(zhǔn)樣品定值的一般原則和統(tǒng)計(jì)方法GB/T15000.7標(biāo)準(zhǔn)樣品工作導(dǎo)則第7部分：標(biāo)準(zhǔn)樣品生產(chǎn)者能力的通用要求CNAS-GL003能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南CNAS-GL005實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部研制質(zhì)量控制樣品的指南GBZ/T224職業(yè)衛(wèi)生名詞術(shù)語ISO/IEC指南99國際計(jì)量學(xué)詞匯-基本及一般概念和相關(guān)術(shù)語ISO3534-1統(tǒng)計(jì)學(xué)-術(shù)語及符號(hào)：第一部分通用統(tǒng)計(jì)學(xué)及概率論術(shù)語3術(shù)語、定義GB/T15000.2-2019、ISO/IEC指南99、ISO3534-1、GBZ/T224-2010中界定的術(shù)語和定義適用于本文件。4生物樣本類質(zhì)量控制樣品的技術(shù)要求4.1基體要求生物樣本原料成分一般比較復(fù)雜，選擇的生物樣本類QCM的基體應(yīng)與日常檢測(cè)樣品的基體相同或者盡可能接近，均勻性穩(wěn)定性能達(dá)到使用要求，且目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)本底值較低。生物樣本原料總量可在考慮實(shí)驗(yàn)室一定周期（如每年）的QCM需求量及研制過程用量后確定。2DB32/TXXXX.1—2024制備過程中使用5/10mL西林瓶或者聚乙烯塑料小瓶分裝，小瓶需使用同一生產(chǎn)商的同一批次產(chǎn)品，驗(yàn)收合格后使用。目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液采用國家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。選擇符合要求的分液瓶，移液器，真空冷凍干燥器。4.2特性和特性值生物樣本類QCM的特性與所需進(jìn)行質(zhì)量控制的測(cè)量特性一致，其特性值的范圍可在考慮該目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的職業(yè)衛(wèi)生限值、日常樣品濃度、標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍等因素后確定。4.3均勻性和穩(wěn)定性4.3.1均勻性：運(yùn)用單因素方差分析統(tǒng)計(jì)分析抽取樣品的檢測(cè)結(jié)果有無顯著性差異，判定該批次QCM均勻性是否符合要求。4.3.2穩(wěn)定性：各存放條件下，各考察時(shí)間點(diǎn)抽取樣品的檢測(cè)結(jié)果與均勻性檢驗(yàn)的總體均值運(yùn)用t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，無顯著性差異時(shí)間點(diǎn)前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。5生物樣本類質(zhì)量控制樣品的研制步驟使用一種實(shí)用且簡(jiǎn)便的方法來確保QCM的均勻性和穩(wěn)定性，以達(dá)到開發(fā)成本和預(yù)期用途之間的平衡，可為實(shí)驗(yàn)室提供較有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM）更為經(jīng)濟(jì)的識(shí)別測(cè)量波動(dòng)的方法。研制過程除需具備一定技術(shù)水平和能力的組織外，研制人員還應(yīng)有豐富的樣品知識(shí)并熟悉相關(guān)過程。生物樣本類QCM研制步驟為：原材料準(zhǔn)備→原材料制備→加料制備→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→均勻性評(píng)估→賦值→穩(wěn)定性評(píng)估→研制文件整理→貯存/使用。材料及其處理、分裝、包裝和輻照等均可由具有一定經(jīng)驗(yàn)和特定設(shè)備的第三方完成。6生物樣本類質(zhì)量控制樣品的制備6.1材料準(zhǔn)備按照4.1要求，準(zhǔn)備一定數(shù)量的同基質(zhì)生物樣本原材料，經(jīng)過均質(zhì)化處理（例如尿樣：振蕩混勻、離心、過濾等步驟制備更加均勻的原材料；準(zhǔn)備足夠量的低本底西林瓶或聚乙烯塑料瓶；準(zhǔn)備分液器，移液槍，真空冷凍干燥機(jī)。按照4.2要求準(zhǔn)備符合要求的目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)儲(chǔ)備液。6.2加料封裝目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)的添加可根據(jù)生物樣本原材料的性質(zhì)采取一次直接添加或分步添加。（例如血液樣本相對(duì)比較粘稠，為了增加均勻性我們可以采取分步添加。以1L血液為例，我們可以將其按3：3：4的比例分成3份，用移液槍準(zhǔn)確定量吸取目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)儲(chǔ)備液添加入第一份樣本中，充分混合均勻后再依次于第二、第三份樣本混合，并充分混合均勻。）制備好的加料生物樣本用分液器準(zhǔn)確定量分裝到各個(gè)西林瓶（或聚乙烯瓶）中，經(jīng)真空冷凍干燥箱制備成凍干粉，加蓋密封。該批次QCM全部完成加料封裝后還應(yīng)給每個(gè)樣品貼上清晰的標(biāo)簽，標(biāo)簽內(nèi)容應(yīng)包括樣品名稱和材料描述、編號(hào)、批號(hào)等內(nèi)容。輻照滅菌后-18℃冷凍保存6.3均勻性評(píng)估3DB32/TXXXX.1—2024從該批次QCM中隨機(jī)抽取不少于10個(gè)樣品用于均勻性檢驗(yàn)。使用目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)規(guī)定/推薦測(cè)定方法程序測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次。樣品的重復(fù)測(cè)定可按隨機(jī)次序進(jìn)行，以降低測(cè)量飄移對(duì)均勻性評(píng)估的影響。采用單因素方差分析法對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，若F＜自由度為（f1，f2）及給定顯著性水平α（通常α=0.05）的臨界值Fα（f1，f2），P>0.05，則表明樣品內(nèi)和樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。6.4定值將6.3中均勻性評(píng)估研究獲得的樣本總平均值作為指示值，3倍總評(píng)均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差建立指示值的控制限。6.5穩(wěn)定性評(píng)估-18℃存放條件下，按照每個(gè)考察時(shí)間點(diǎn)（時(shí)間點(diǎn)的確定可參考附錄B）隨機(jī)抽取6個(gè)樣本，使用目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)規(guī)定/推薦測(cè)定方法程序測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次。各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與均勻性檢驗(yàn)的總體均值運(yùn)用t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，無顯著性差異時(shí)間點(diǎn)前該批次QCM的穩(wěn)定性符合要求。各時(shí)間點(diǎn)樣本測(cè)定前，應(yīng)使用CRM等對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量程序進(jìn)行校準(zhǔn)，以降低實(shí)驗(yàn)室長期再現(xiàn)性對(duì)穩(wěn)定性評(píng)估的影響。QCM復(fù)溶后于4℃保存，按照考察時(shí)間點(diǎn)，將樣本取出恢復(fù)至室溫，使用目標(biāo)化學(xué)物質(zhì)規(guī)定/推薦測(cè)定方法程序測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次。各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與均勻性檢驗(yàn)的總體均值運(yùn)用t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，無顯著性差異時(shí)間點(diǎn)前該QCM的復(fù)溶穩(wěn)定性符合要求。各時(shí)間點(diǎn)樣本測(cè)定前，應(yīng)使用CRM等對(duì)實(shí)驗(yàn)室測(cè)量程序進(jìn)行校準(zhǔn)，以降低實(shí)驗(yàn)室長期再現(xiàn)性對(duì)穩(wěn)定性評(píng)估的影響。6.6樣品信息文件QCM的單個(gè)樣品除應(yīng)有清晰、合適的標(biāo)簽外，還應(yīng)附有使用說明文件。文件信息應(yīng)包括制備日期、貯存條件、有效期、預(yù)期的用途、指示值、制備單位、使用的安全注意事項(xiàng)等內(nèi)容。7樣品的貯存/運(yùn)輸/使用7.1貯存QCM制備完成后，應(yīng)嚴(yán)格按照樣品信息文件中的貯存條件來貯存，確保包裝容器密封、遠(yuǎn)離熱源、避光和防潮。此外，還應(yīng)定期監(jiān)測(cè)貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。7.2運(yùn)輸本文件所述QCM通常無需廣泛分發(fā)，如需要運(yùn)輸還有必要進(jìn)行運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)估，可參考ISO指南35。7.3使用生物樣本類QCM的使用應(yīng)嚴(yán)格按照有效期、預(yù)期用途、使用安全注意事項(xiàng)等內(nèi)容進(jìn)行。生物樣本類QCM啟封復(fù)溶后在一定存儲(chǔ)條件下重復(fù)使用，4℃冰箱冷藏條件下可以穩(wěn)定一個(gè)月，應(yīng)定期監(jiān)測(cè)貯存條件（如：冰箱溫度）并記錄，以確保貯存條件合適。4DB32/TXXXX.1—2024尿中鎘QCM研制（示例）A.1材料準(zhǔn)備：健康人尿：經(jīng)0.22μm濾膜過濾后混合備用（1L水中鎘成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW086121000μg/mL西林瓶及瓶蓋（或聚乙烯瓶分液器，真空冷凍干燥機(jī)。A.2加工制備：尿中鎘質(zhì)量控制樣品（QCM）內(nèi)部研制的步驟：取健康人尿→過濾→混合均勻→加標(biāo)充分混勻→分裝→冷凍干燥→輻照滅菌→冷凍保存→均勻性檢驗(yàn)→定值→穩(wěn)定性檢驗(yàn)→樣本信息成文。將1000μg/mL鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液用1%硝酸釋成10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液備用。取1mL10μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液備，直接加入到1L尿中，充分?jǐn)嚢杈鶆?。用分液器?zhǔn)確取5mL加標(biāo)尿液于各個(gè)西林瓶（或聚乙烯瓶）中，分裝約200瓶左右。經(jīng)真空冷凍干燥機(jī)凍干處理，待成凍干粉后密封。該批次尿鎘全部完成加料封裝后，再逐一貼上包括“尿鎘、批號(hào)、編號(hào)”等信息的標(biāo)簽。輻照滅菌后-18℃冷凍保存。A.3均勻性評(píng)估：從該批次尿中鎘QCM中隨機(jī)抽取10瓶用于均勻性檢驗(yàn)。取尿鎘QCM恢復(fù)至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測(cè)定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測(cè)定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，測(cè)定結(jié)果見表1。樣品的重復(fù)測(cè)定應(yīng)按隨機(jī)次序進(jìn)行（可參考如下示例以降低測(cè)量漂移對(duì)均勻性評(píng)估的影響。采用單因素方差分析法對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，樣品間均值無顯著性差異則表明樣品是均勻的，單因素方差分析結(jié)果見表2。示例：10個(gè)樣品，重復(fù)測(cè)量3次，適合的測(cè)量方案如下：第一次測(cè)量順序：1、3、5、7、9、2、4、6、8、10第二次測(cè)量順序：10、9、8、7、6、5、4、3、2、1第三次測(cè)量順序：2、4、6、8、10、1、3、5、7、9表1尿中鎘均勻性測(cè)定結(jié)果(μg/L)石墨爐樣號(hào)測(cè)定次數(shù)123110.099.919.84210.289.9510.30310.2510.1010.3049.689.869.96510.369.549.96610.2210.0310.2879.769.8410.30810.3810.199.8699.849.6710.329.869.9910.41總平均值10.04標(biāo)準(zhǔn)偏差0.245DB32/TXXXX.1—2024表2單因素方差分析結(jié)果方差來源平方和均方F單元間90.4650.0520.825重復(fù)測(cè)定1.2510.063F臨界值F0.05(9,20)=2.39。計(jì)算的F值為0.825，該值＜F臨界值，表明在0.05顯著性水平時(shí)，該批次尿中鎘QCM是均勻的。A.4定值：將均勻性評(píng)估研究中獲得的10瓶尿中鎘QCM的總平均值作為指示值，3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差建立指示值的控制限，本批次尿中鎘QCM的指示值及控制限為：10.04±0.72(μg/L）。A.5穩(wěn)定性評(píng)估：-18℃冷凍條件下按照0、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月存放時(shí)間（存放條件及時(shí)間點(diǎn)的選擇可參考附錄B各時(shí)間點(diǎn)取出6個(gè)樣本恢復(fù)至室溫，加入5mL純水，待溶解后充分混勻，靜置20min。按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測(cè)定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測(cè)定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表3。各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與均勻性檢驗(yàn)的總體均值運(yùn)用t檢驗(yàn)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，如無顯著性差異，此時(shí)間點(diǎn)前該批次尿中鎘QCM的穩(wěn)定性符合要求。表3尿中鎘穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果(μg/L)0136110.0410.17210.20310.19410.1359.50610.31平均值10.08標(biāo)準(zhǔn)偏差0.29t0.31按下式計(jì)算t值：式中：x-─n次測(cè)量的平均值；μ─參考值(指示值)；n─測(cè)量次數(shù)；S─n次測(cè)量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差。注：為了保證平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差的準(zhǔn)確度，n≥6。表3結(jié)果顯示，室溫條件下存放1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月后，各時(shí)間點(diǎn)測(cè)定6個(gè)樣本計(jì)算所得t值均小于臨界值t(0.05,5)=2.57，各時(shí)間點(diǎn)平均值與參考值之間無顯著性差異，表明室溫條件下該批次尿中鎘QCM至少可穩(wěn)定存放12個(gè)月。6DB32/TXXXX.1—2024復(fù)溶樣本穩(wěn)定性評(píng)估：取6份尿中鎘QCM恢復(fù)至室溫，加入5mL純水復(fù)溶，待溶解后充分混勻，靜置20min，于4℃冰箱保存，分別于第1天、第7天、第15天、第30天取出，恢復(fù)至室溫后，混勻，按照GBZ/T307.1-2018尿中鎘的測(cè)定第1部分：石墨爐原子吸收光譜法或GBZ/T307.2-2018尿中鎘的測(cè)定第2部分：電感耦合等離子體質(zhì)譜法進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定3次，測(cè)定結(jié)果見表4。各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與均