小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避開(kāi)任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞快速小心地分別。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保管：假如樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于20℃，避開(kāi)反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)1.試劑盒保管在28℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。2.試驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立刻放回自封袋中，密封（低溫干燥）保管。3.濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；依照說(shuō)明書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最結(jié)束果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。4.嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及次序進(jìn)行溫育操作。5.全部液體組分使用前充分搖勻。試劑盒構(gòu)成名稱(chēng)96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)樣本稀釋液6mL3mL無(wú)檢測(cè)抗體HRP10mL5mL無(wú)20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無(wú)底物B6mL3mL無(wú)停止液6mL3mL無(wú)封板膜2張2張無(wú)說(shuō)明書(shū)1份1份無(wú)自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0S5）濃度依次為：0、3、6、12、24、48nmol/L試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果推斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸曲線(xiàn)，按曲線(xiàn)方程計(jì)算各樣本濃度值。試劑盒性能1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900、2.靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0nmol/L。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)仿佛物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏：28℃，避光防潮保管。6.有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床試驗(yàn)或人體試驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由試驗(yàn)者承當(dāng)，本公司概不負(fù)責(zé)。2.嚴(yán)格依照說(shuō)明書(shū)操作，試驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)