小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）ELISA檢測試劑盒使用說明書

第第頁小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）ELISA檢測試劑盒使用說明書小鼠（Mouse）環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法樣品收集、處理及保管方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避開任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞快速小心地分別。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保管：假如樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于20℃，避開反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品1.酶標(biāo)儀（450nm）2.高精度加樣器及槍頭：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒溫箱操作注意事項1.試劑盒保管在28℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。2.試驗中不用的板條應(yīng)立刻放回自封袋中，密封（低溫干燥）保管。3.濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；依照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，最結(jié)束果乘以5才是樣本實際濃度。4.嚴(yán)格依照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及次序進(jìn)行溫育操作。5.全部液體組分使用前充分搖勻。試劑盒構(gòu)成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無停止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0S5）濃度依次為：0、3、6、12、24、48nmol/L試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入停止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波優(yōu)點測定各孔的OD值。結(jié)果推斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。試劑盒性能1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900、2.靈敏度：檢測濃度小于1.0nmol/L。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)仿佛物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏：28℃，避光防潮保管。6.有效期：6個月免責(zé)聲明1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床試驗或人體試驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由試驗者承當(dāng)，本公司概不負(fù)責(zé)。2.嚴(yán)格依照說明書操作，試驗者違反說明書