檢驗科腺苷脫氨酶測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-017版本/修訂號：C/0主題內容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清腺苷脫氨酶（ADA）測定標準操作規(guī)程1檢驗申請血清腺苷脫氨酶測定,體液生化測定,各種體液腺苷脫氨酶測定，應需要可以單獨申請或作為生化組套的一個項目申請。臨床醫(yī)生根據需要提出檢驗申請。2標本采集與處理2.1標本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2體液腺苷脫氨酶：收集體液,EDTA-Na2抗凝。2.1.3檢驗申請單和血標本試管標上統(tǒng)一且唯一的標識符。2.1.4急診標本采集后，在檢驗申請單上填寫標本采集時間。2.1.5標本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負責標本的接收并記錄標本的狀態(tài)，對不合格標本予以拒收。2.1.6下列標本為不合格標本2.1.5.1標本量不足：少于0.3ml的全血標本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應吸光度有干擾的標本，包括嚴重溶血、嚴重渾濁的標本。2.1.5.3無法確認標本與申請單對應關系的。2.1.5.4其他如標識涂改、標本試管破裂等。2.2標本保存2.2.1接收標本后在30min內將標本離心分離出血清。2.2.2標本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定1天，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。為避免標本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1天的標本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內保存7天。2.3標本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹狀態(tài)。2.3.2血清或血漿標本均可，但現(xiàn)在主張一律用血清。如用血漿，多主張用EDTA-Na2(1mg／mL)抗凝。3、方法原理腺苷在腺苷脫氨酶作用下脫氨基形成黃苷。黃苷在PNP作用下生成次黃嘌呤，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶（XOD）作用下轉化為尿酸和過氧化氫（H2O2）。H2O2與EHSPT和氨基安替比林（4-AA）反應生成有色染料，產物的顏色與ADA活性成正比。4、試劑及其他用品4.1試劑：腺苷脫氨酶測定(連續(xù)監(jiān)測法)試劑盒（貨號AD7553），由北京利德曼生化技術有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。當試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀，表明試劑已變質，不能繼續(xù)使用。4.3試劑盒準備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準備。4.4試劑盒主要成分：R1：Tris緩沖液50mmol/L，4-氨基安替比林4mmol/L，PNP100U/L，XOD700U/L，過氧化物酶2000U/L；R2：Tris緩沖液50mmol/L，腺苷10mmol/L，EHSPT2mmol/L。5校準品與校準模式校準品：不使用校準品，以有色醌的雙波長（546/800nm）毫摩爾消光系數計算ADA活性。6質控品與室內質控規(guī)則6.1質控品采用由由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質控血清。6.2質控液重建方法：液態(tài)質控血清，即開即用，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每一批標本中測定兩個水平質控血清各一次。6.4質控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。9主要分析參數參見說明書。10、結果計算計算公式：ADA(U/L)＝公式中ΔA/min即單位時間中吸光度降低的值，VT為總反應體積ml（試劑總量＋標本量），Vs為標本體積ml，l為比色皿光徑cm，ε為有色醌的546/800nm測定的毫摩爾消光系數。儀器根據此公式自動給出每個標本測定結果。11檢驗結果的報告及范圍11.1結果的報告11.1.1結果經審核后，確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：0～200U/L，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據標本稀釋后重復測定的結果。12、操作性能12.1精密度：批內CV<5.0%，批間CV<6.0%。12.2線性范圍：0～200U/L。12.3方法的有限性及干擾因素：內源性干擾物溶血為10g/L、脂血4.5mmol/L、黃疸513umol/L、抗壞血酸17mmol/L對測試結果無明顯影響。12.4靈敏度：ADA濃度為：25U/L時，吸光度變化率ΔA546nm/min為0.009。13參考值及醫(yī)學決定水平參考值：血清：4～18U/L14、臨床意義本試劑盒用于檢驗血清和體液中ADA活性。ADA是催化腺苷脫氨基生成的鳥苷，該酶主要分布于人體淋巴組織，急性肝炎、酒精肝、慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者ADA活性明顯偏高。因此，該項指標與ALT、GGT聯(lián)用會在肝病診斷方面提供重要依據。ADA活性測定也用于結核性腦膜炎、結核性胸腹膜炎鑒別診斷具有很高的臨床價值。15結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2認真審核每一個測定結果，審核者對發(fā)出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。16威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定通常無威脅生命的“緊急值”17有關引用程序與文件17.1Abbott全自動生化分析儀儀器標準操作規(guī)程。