云南省中央民大附中芒市國際學(xué)校2025屆高三生物第一學(xué)期期末達(dá)標(biāo)測試試題含解析

云南省中央民大附中芒市國際學(xué)校2025屆高三生物第一學(xué)期期末達(dá)標(biāo)測試試題注意事項:1．答題前，考生先將自己的姓名、準(zhǔn)考證號碼填寫清楚，將條形碼準(zhǔn)確粘貼在條形碼區(qū)域內(nèi)。2．答題時請按要求用筆。3．請按照題號順序在答題卡各題目的答題區(qū)域內(nèi)作答，超出答題區(qū)域書寫的答案無效；在草稿紙、試卷上答題無效。4．作圖可先使用鉛筆畫出，確定后必須用黑色字跡的簽字筆描黑。5．保持卡面清潔，不要折暴、不要弄破、弄皺，不準(zhǔn)使用涂改液、修正帶、刮紙刀。一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1．在植物的抗冷脅迫過程中，脫落酸（ABA起到關(guān)鍵的作用。為探究一定濃度范圍內(nèi)的ABA對不同品系番茄幼苗葉片在抗冷脅迫中的影響，研究人員進(jìn)行的相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖。（注：相對電導(dǎo)率可反映細(xì)胞膜受損程度，細(xì)胞膜受損越大，相對電導(dǎo)率越大。）下列分析正確的是（）A．脫落酸參與植物細(xì)胞氧化分解増加產(chǎn)熱，從而提髙抗寒能力B．本實(shí)驗(yàn)的自變量是脫落酸濃度和溫度，因變量是相對電導(dǎo)率C．根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出ABA的作用具有兩重性D．圖中ABA濃度對番茄幼苗葉片的抗冷脅迫具有促進(jìn)作用2．下列有關(guān)“基本骨架”或“骨架”的敘述，錯誤的是A．DNA分子中的核糖和磷酸交替連接排在外側(cè)構(gòu)成基本骨架B．每一個單體都以若干個相連的碳原子構(gòu)成的碳鏈為基本骨架C．生物膜的流動鑲嵌模型認(rèn)為磷脂雙分子層構(gòu)成了膜的基本骨架D．真核細(xì)胞中有維持細(xì)胞形態(tài)保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)有序性的細(xì)胞骨架3．全球各地普降酸雨對環(huán)境造成的影響是（）A．永凍土融化 B．水體富營養(yǎng)化污染C．破壞土壤肥力 D．海平面上升4．下列有關(guān)生態(tài)學(xué)原理在生產(chǎn)生活中應(yīng)用的敘述，錯誤的是A．生態(tài)系統(tǒng)中某種生物的環(huán)境容納量是有限的，因此向池塘投放魚苗時應(yīng)注意控制投放量B．群落的垂直分層有利于充分利用空間和能量，因此在設(shè)計生態(tài)園時應(yīng)注意不同樹種混種C．種群數(shù)量達(dá)K/2時種群增長速率最大，因此在養(yǎng)魚過程中應(yīng)選擇魚數(shù)量為K/2左右捕撈D．能量流動逐級遞減，因此圈養(yǎng)動物減少呼吸消耗，有利于提高與下一營養(yǎng)級間的能量傳遞效率5．下列關(guān)于細(xì)胞代謝的敘述，正確的是A．蛔蟲在細(xì)胞呼吸過程中，釋放能量最多的結(jié)構(gòu)是線粒體內(nèi)膜B．外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時，即使細(xì)胞沒有發(fā)生質(zhì)壁分離，也不能判斷是死細(xì)胞C．細(xì)胞內(nèi)能量通過ATP分子在吸能反應(yīng)和放能反應(yīng)之間循環(huán)流通D．在劇烈運(yùn)動過程中，肌細(xì)胞釋放CO2量/吸收O2量的值將增大6．葉綠體是植物進(jìn)行光合作用的場所。下列關(guān)于葉綠體結(jié)構(gòu)與功能的敘述，正確的是A．葉綠體中的色素主要分布在類囊體腔內(nèi)B．H2O在光下分解為[H]和O2的過程發(fā)生在基質(zhì)中C．CO2的固定過程發(fā)生在類囊體薄膜上D．光合作用的產(chǎn)物——淀粉是在基質(zhì)中合成的7．下列有關(guān)細(xì)胞的分子組成的相關(guān)敘述，正確的是（）A．核酸的單體是脫氧核苷酸B．蛋白質(zhì)水解的最終產(chǎn)物是氨基酸C．蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)多樣性與構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸種類、數(shù)目、空間結(jié)構(gòu)有關(guān)D．膽固醇、磷脂、維生素D都屬于固醇8．（10分）下列有關(guān)基因重組的敘述，正確的是（）A．基因重組是隨機(jī)的不定向的B．基因重組發(fā)生在受精作用過程中C．基因重組可以產(chǎn)生新的性狀D．基因重組是生物變異的根本來源二、非選擇題9．（10分）味精的主要成分是谷氨酸，生產(chǎn)上多采用谷氨酸棒杄菌發(fā)酵法。在碳源略微不足而氮源相對豐富的培養(yǎng)條件下，谷氨酸棒桿菌細(xì)胞內(nèi)會積累谷氨酸?；卮鹣铝袉栴}：（1）從細(xì)胞結(jié)構(gòu)角度看，谷氨酸棒桿菌屬于一種__________生物，除碳源和氮源外微生物可能需要的營養(yǎng)物質(zhì)還有__________。生產(chǎn)味精時應(yīng)使氮源過量，一般可加入一定量的__________（填“其它氨基酸”、“蛋白質(zhì)”或“無機(jī)氮源”）。（2）為降低生產(chǎn)成本，設(shè)想利用纖維素酶分解作物秸稈生產(chǎn)葡萄糖。為獲得產(chǎn)纖維素酶的細(xì)菌，可從__________采集土壤樣本，然后用__________的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)。純化菌種的方法有__________。（3）從發(fā)酵液或動、植物材料中提取相關(guān)物質(zhì)的方法有很多，從玫瑰花瓣中提取玫瑰精油用__________法，而萃取法適合提取__________的物質(zhì)。10．（14分）蘿卜的蛋白A具有廣泛的抗植物病菌作用，而且對人體沒有影響。我國科學(xué)家欲獲得高效表達(dá)蛋白A的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌作為微生物農(nóng)藥，做了相關(guān)研究。（1）研究者用相同的_________酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒，再將重組質(zhì)粒置于經(jīng)_________處理的大腸桿菌細(xì)胞懸液中，獲得轉(zhuǎn)基因大腸桿菌。（2）檢測發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)入的蛋白A基因在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)效率很低，研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），并按圖2方式依次進(jìn)行4次PCR擴(kuò)增，以得到新的蛋白A基因。①這是一種定點(diǎn)的_________技術(shù)。②圖2所示的4次PCR應(yīng)該分別如何選擇圖1中所示的引物？請?zhí)顚懸韵卤砀瘢ㄈ暨x用該引物劃“√”，若不選用該引物則劃“×”）。_____引物A引物B引物C引物DPCR1PCR2PCR3PCR4（3）研究者進(jìn)一步將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和_________分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用_________方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較_________的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，其優(yōu)點(diǎn)是_________。11．（14分）應(yīng)用基因工程技術(shù)可以獲得人們需要的生物新品種或新產(chǎn)品。請根據(jù)資料和圖解回答下列問題：資料1：蜘蛛絲(絲蛋白)被稱為“生物鋼”，有著超強(qiáng)的抗張強(qiáng)度?？芍瞥煞缽棻承?、降落傘繩等。蜘蛛絲還可被制成人造韌帶和人造肌腱?？茖W(xué)家研究出集中生產(chǎn)蜘蛛絲的方法——培育轉(zhuǎn)基因蜘蛛羊。資料2：注射疫苗往往會在兒童和部分成年人身上引起痛苦。將疫苗藏身水果蔬菜中，人們在食用這些轉(zhuǎn)基因植物的同時也獲得免疫力，因而無需免疫接種，這一新概念將引起疫苗研究的一場革命。(1)過程①⑤所需要的工具酶有_______________和________________，構(gòu)建的蜘蛛絲蛋白基因表達(dá)載體一般由____________、____________、啟動子、終止子等部分組成。(2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入山羊受體細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是_______________。通過①～④過程培育的蜘蛛羊可以作為乳腺生物反應(yīng)器，從____________中提取所需要的蜘蛛絲蛋白。(3)如果將過程③獲得的早期胚胎進(jìn)行如圖分割，則操作正確的是_______________。(4)通過⑤⑥⑦培育轉(zhuǎn)基因萵苣，相比誘變育種和雜交育種方法，具有______和____等突出優(yōu)點(diǎn)。12．已知某種動物灰身（A）對黑身（a）為顯性，有眼（B）對無眼（b）為顯性?？刂朴醒邸o眼的基因位于常染色體上。為了研究A、a與B、b的位置關(guān)系，選取一對表現(xiàn)型為灰身有眼的雄性個體和黑身無眼的雌性個體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)，所得F1雌、雄個體中均出現(xiàn)四種表現(xiàn)型：灰身有眼、黑身有眼、灰身無眼、黑身無眼。分析回答問題。（1）如果F1中四種表現(xiàn)型的比例為1：1：1：1，則基因A、a和B、b的遺傳符合________定律；且控制灰身、黑身的基因位于______（填?；騲”）染色體上，依據(jù)是________________________。若要證明上述推測，可選取F1中______________交配，統(tǒng)計子代雌雄個體的表現(xiàn)型及比例。若只考慮題干中的兩對等位基因，預(yù)測其子代所有灰身個體中純合子所占的比例為_____________________________。（2）如果F1的四種表現(xiàn)型中，親本類型偏多，重組類型偏少，則F1同時出現(xiàn)上述四種表現(xiàn)型的原因最可能是________________________________________。

參考答案一、選擇題(本大題共7小題,每小題6分,共42分。)1、D【解析】

本實(shí)驗(yàn)是探究ABA對不同品系（710、704）番茄幼苗葉片在抗冷脅迫中的影響，自變量是脫落酸濃度和植物品系的不同，因變量是相對電導(dǎo)率，分析曲線圖可知：704品系的番茄幼苗再脫落酸濃度為300（mg/l）時相對電導(dǎo)率低，抗寒能力強(qiáng)，710品系的番茄幼苗再脫落酸濃度為200（mg/l）時相對電導(dǎo)率低，抗寒能力強(qiáng)?！驹斀狻緼、脫落酸是植物激素，起調(diào)節(jié)作用，不能參與植物細(xì)胞氧化分解增加產(chǎn)熱，A錯誤；B、本實(shí)驗(yàn)的自變量是脫落酸濃度和番茄品系，B錯誤；C、根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能得出ABA的作用具有兩重性，C錯誤；D、圖中ABA濃度對應(yīng)電導(dǎo)率（細(xì)胞受損程度）都低于0濃度對應(yīng)的電導(dǎo)率（細(xì)胞受損程度），所以對番茄幼苗葉片的抗冷脅迫具有促進(jìn)作用，D正確。故選D?！军c(diǎn)睛】本題借助于脫落酸對番茄抗寒的影響，考查考生分析曲線圖，獲取有效信息的能力，屬于中等難度題。2、A【解析】

DNA分子中磷酸和脫氧核糖交替排列構(gòu)成基本骨架；每一個單體都是以若干個相連的碳原子構(gòu)成的碳鏈為基本骨架，許多單體連接成多聚體；桑格和尼克森提出了生物膜的流動鑲嵌模型，認(rèn)為磷脂雙分子層構(gòu)成了膜的基本支架；真核細(xì)胞中的細(xì)胞骨架是由蛋白質(zhì)纖維組成的，它對于有維持細(xì)胞形態(tài)、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)有序性，與細(xì)胞運(yùn)動、能量轉(zhuǎn)換等生命活動密切相關(guān)?！驹斀狻緼.DNA分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接排在外側(cè)構(gòu)成基本骨架，A錯誤；B.每一個單體都以若干個相連的碳原子構(gòu)成的碳鏈為基本骨架，B正確；C.流動鑲嵌模型認(rèn)為磷脂雙分子層構(gòu)成了膜的基本支架，C正確；D.真核細(xì)胞中有維持細(xì)胞形態(tài)、保持細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)有序性的細(xì)胞骨架，D正確。

故選A。

3、C【解析】

酸雨不僅能殺死水生生物、破壞水體生態(tài)平衡，而且還能傷害陸地植物、農(nóng)作物和各種樹木；破壞土壤肥力；使樹木生長緩慢并容易感染病害；同時還能腐蝕金屬、建筑物和歷史古跡；酸雨中含有的少量重金屬對人體健康也會帶來不利影響?！驹斀狻緼D、永凍土融化和海平面上升都是溫室效應(yīng)的結(jié)果，A、D錯誤；B、水體富營養(yǎng)化是指在人類活動的影響下，由干大量氮、磷等營養(yǎng)物質(zhì)超標(biāo)引起的，B錯誤C、酸雨中的酸會破壞土壤肥力，C正確。故選C?！军c(diǎn)睛】酸雨是燃燒煤、石油和天然氣所產(chǎn)生的硫和氮的氧化物，與大氣中的水結(jié)合而形成的酸性產(chǎn)物。這些含酸的微粒隨著雨雪回降到地面就是酸雨，酸雨中所含的酸主要是硫酸和硝酸。4、C【解析】

由于種群在資源有限、空間有限和受到其他生物制約的條件下發(fā)展，其種群的增長曲線會呈“邏輯斯諦增長”，環(huán)境容納量（K）則是指在長時期內(nèi)環(huán)境所能維持的種群最大數(shù)量。種群數(shù)量在K/2時增長最快，在K時種群密度最大?！驹斀狻可鷳B(tài)系統(tǒng)中某種生物的環(huán)境容納量是有限的，由環(huán)境所決定，種群數(shù)量超過環(huán)境容納量，種群數(shù)量會下降，因此向池塘投放魚苗時應(yīng)注意控制投放量，A選項正確；群落的垂直分層有利于不同種的物種的共存，能夠充分利用空間和能量，因此在設(shè)計生態(tài)園時應(yīng)注意不同樹種混種，B選項正確；種群數(shù)量達(dá)到K/2時種群增長速率最大，因此在養(yǎng)魚過程中應(yīng)選擇魚數(shù)量為K/2-K之間左右捕撈，最多捕撈至K/2左右時停止，C選項錯誤；各營養(yǎng)級的生物因呼吸而消耗相當(dāng)大的一部分能量，若能圈養(yǎng)動物降低呼吸消耗，則可以提高下一營養(yǎng)級的同化量，進(jìn)而提高與下一營養(yǎng)級間的能量傳遞效率，D選項正確。因此錯誤的選項選擇C。5、B【解析】

1、原核生物只有核糖體一種細(xì)胞器。2、外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度，細(xì)胞不發(fā)生質(zhì)壁分離，可以判定細(xì)胞死活，前提是那個細(xì)胞必須要有細(xì)胞壁，比如植物細(xì)胞。3、ATP含量少，在體內(nèi)可以分解，也可以迅速合成，供給生命活動的能量。4、人體細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸吸收O2，釋放CO2，而進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乳酸?！驹斀狻緼、蛔蟲寄生于人體消化道內(nèi)，沒有線粒體，A錯誤；B、質(zhì)壁分離是植物的原生質(zhì)層和細(xì)胞壁發(fā)生分離，細(xì)胞沒有發(fā)生質(zhì)壁分離有可能是動物細(xì)胞，所以不能判斷細(xì)胞死活，B正確；C、能量不能循環(huán)，C錯誤；D、人體細(xì)胞無氧呼吸既不吸收O2，也不釋放CO2，所以細(xì)胞釋放CO2量/吸收O2量的值將不變，D錯誤。故選B?！军c(diǎn)睛】本題主要考查質(zhì)壁分離實(shí)驗(yàn)以及呼吸作用的知識，理解質(zhì)壁分離的條件，易錯點(diǎn)是D項動物細(xì)胞無氧呼吸的過程。6、D【解析】葉綠體中的色素主要分布在類囊體膜上，H2O在光下分解的過程也是在類囊體膜上進(jìn)行的，CO2的固定和淀粉的合成發(fā)生在暗反應(yīng)中，在葉綠體的基質(zhì)中進(jìn)行。所以D正確。7、B【解析】

脂質(zhì)的種類與作用：脂肪：儲能、維持體溫；磷脂：構(gòu)成膜（細(xì)胞膜、液泡膜、線粒體膜等）結(jié)構(gòu)的重要成分；固醇：維持新陳代謝和生殖起重要調(diào)節(jié)作用，分為膽固醇、性激素和維生素D?！驹斀狻緼、核酸的單體是核苷酸，核苷酸包括脫氧核苷酸和核糖核苷酸，A錯誤；B、蛋白質(zhì)的基本單位是氨基酸，故蛋白質(zhì)水解的最終產(chǎn)物是氨基酸，B正確；C、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性與蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)有關(guān)，與氨基酸的空間結(jié)構(gòu)無關(guān)，C錯誤；D、膽固醇、維生素D屬于固醇，磷脂不是，D錯誤。故選B。8、A【解析】

基因重組：（1）概念：在生物體進(jìn)行有性生殖的過程中，控制不同性狀的非等位基因重新組合。（2）類型：①自由組合型：減數(shù)第一次分裂后期，隨著非同源染色體自由組合，非同源染色體上的非等位基因也自由組合。②交叉互換型：減數(shù)第一次分裂前期（四分體），基因隨著同源染色體的非等位基因的交叉互換而發(fā)生重組。（3）意義：①形成生物多樣性的重要原因之一。②是生物變異的來源之一，對生物的進(jìn)化也具有重要的意義。【詳解】A、突變和基因重組是隨機(jī)的、不定向的，是生物進(jìn)化的原始材料，A正確；B、基因重組發(fā)生在減數(shù)分裂過程中，B錯誤；C、基因重組不能產(chǎn)生新的性狀，只能將原有性狀進(jìn)行重組組合，C錯誤；D、基因突變是生物變異的根本來源，D錯誤。故選A。【點(diǎn)睛】本題考查基因重組的相關(guān)知識，要求考生識記基因重組的概念、類型及意義，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確判斷各選項。二、非選擇題9、原核水、無機(jī)鹽和特殊營養(yǎng)物質(zhì)無機(jī)氮源寓含纖維素的土壤以纖維素為唯一碳源平板劃線法和稀釋涂布平板法水蒸氣蒸餾法易溶于有機(jī)溶劑【解析】

本題主要是對培養(yǎng)基的成分，選擇培養(yǎng)基的原理，植物有效成分的提取，考查的知識點(diǎn)比較基礎(chǔ)，結(jié)合教材內(nèi)容具體作答即可?！驹斀狻浚?）谷氨酸棒桿菌屬于細(xì)菌，是原核生物。培養(yǎng)基中除了水、無機(jī)鹽、碳源、氮源這幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)外，有些還需要滿足微生物對特殊營養(yǎng)物質(zhì)的要求。生產(chǎn)上一般選擇無機(jī)氮源以降低生產(chǎn)成本。（2）要想獲得產(chǎn)纖維素酶的分解菌，應(yīng)該在富含纖維素的土壤中取樣，然后以纖維素為唯一碳源進(jìn)行富集培養(yǎng)，不能分解纖維素的細(xì)菌生長受到抑制。純化菌種常用的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法。（3）玫瑰精油化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，揮發(fā)性強(qiáng)，能隨水蒸氣一同蒸餾，因此從玫瑰花瓣中提取玫瑰精油常用水蒸氣蒸餾法。萃取法適合提取易溶于有機(jī)溶劑的物質(zhì)?！军c(diǎn)睛】解答本題的關(guān)鍵是識記和理解微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)、植物有效成分提取原理和方法以及微生物的篩選與分離的原理和步驟等。10、限制酶和DNA連接CaCl2基因突變引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）抗原-抗體雜交抑菌圈對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高【解析】

（一）基因工程的基本工具1、“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。2、“分子縫合針”——DNA連接酶（1）兩種DNA連接酶（E?coliDNA連接酶和T4DNA連接酶）的比較：①相同點(diǎn)：都縫合磷酸二酯鍵。②區(qū)別：E?coliDNA連接酶來源于大腸桿菌，只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶來源于T4噬菌體，可用于連接粘性末端和平末端，但連接效率較低。（2）與DNA聚合酶作用的異同：DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵．DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。3、“分子運(yùn)輸車”——載體（1）載體具備的條件：①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。②具有一至多個限制酶切點(diǎn)，供外源DNA片段插入。③具有標(biāo)記基因，供重組DNA的鑒定和選擇。（2）最常用的載體是質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡單的、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。（3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒。（二）基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的獲取1、目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。2、原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。3、PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因（1）原理：DNA雙鏈復(fù)制（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建1、目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。2、組成：目的基因+啟動子+終止子+標(biāo)記基因（1）啟動子：是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。（2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的尾端。（3）標(biāo)記基因的作用：是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來．常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。第三步：將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1、轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。2、常用的轉(zhuǎn)化方法：將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞：采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞：最常用的方法是顯微注射技術(shù)．此方法的受體細(xì)胞多是受精卵。將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞：原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少，最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用Ca2+處理細(xì)胞，使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。3、重組細(xì)胞導(dǎo)入受體細(xì)胞后，篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。第四步：目的基因的檢測和表達(dá)1、首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。2、其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交。3、最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交。4、有時還需進(jìn)行個體生物學(xué)水平的鑒定，如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀?！驹斀狻浚?）在基因工程中，利用相同的限制酶和DNA連接酶處理蛋白A基因和pET質(zhì)粒，得到重組質(zhì)粒；大腸桿菌作為受體細(xì)胞，需要用氯化鈣處理，以便重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。（2）①根據(jù)題意和圖示分析，經(jīng)過4次PCR技術(shù)后獲得了新的基因，這是一種定點(diǎn)的基因突變技術(shù)。②與研究者推測不同生物對密碼子具有不同的偏好，因而設(shè)計了與蛋白A基因結(jié)合的兩對引物（引物B和C中都替換了一個堿基），因此4次PCR應(yīng)該分別選擇如圖所示的引物如下表所示：引物A引物B引物C引物DPCR1√√××PCR2××√√PCR3××××PCR4√××√（3）根據(jù)實(shí)驗(yàn)中的對照原則，若要比較新蛋白A的表達(dá)效率是否提高，則需設(shè)置三組實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)變量的處理分別為：僅含新蛋白質(zhì)A的重組質(zhì)粒，僅含蛋白A的重組質(zhì)粒和空白對照（僅含空質(zhì)粒，以排除空質(zhì)?？赡墚a(chǎn)生的影響）。因此，將含有新蛋白A基因的重組質(zhì)粒和含有蛋白A基因的重組質(zhì)粒、空質(zhì)粒（pET質(zhì)粒）分別導(dǎo)入大腸桿菌，提取培養(yǎng)液中的蛋白質(zhì)，用抗原——抗體雜交方法檢測并比較三組受體菌蛋白A的表達(dá)產(chǎn)物，判斷新蛋白A基因表達(dá)效率是否提高。由于蛋白A（或新蛋白A）具有抗菌作用，所以為檢測表達(dá)產(chǎn)物的生物活性，研究者將上述各組表達(dá)產(chǎn)物加入到長滿了植物病菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，比較抑菌圈的大小，以確定表達(dá)產(chǎn)物的生物活性大小。（4）作為微生物農(nóng)藥，使用時常噴灑蛋白A基因的發(fā)酵產(chǎn)物而不是轉(zhuǎn)蛋白A基因的大腸桿菌，是因?yàn)榈鞍譇基因的發(fā)酵產(chǎn)物對人、畜、農(nóng)作物和自然環(huán)境安全；不會造成基因污染；有效成分純度較高?！军c(diǎn)睛】本題主要考查基因工程、PCR技術(shù)等相關(guān)知識，考生需要理解和記憶相關(guān)知識，并學(xué)會應(yīng)用所學(xué)知識正確答題。11、限制酶DNA連接酶目的基因標(biāo)記基因顯微注射法乳汁B目的性強(qiáng)克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性(或能有效地打破物種的生殖隔離界限)【解析】

分析題圖：圖中①～④為蜘蛛羊的培育過程，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的過程；③表示早期胚胎培養(yǎng)過程；④表示胚胎移植過程．⑤～⑦表示轉(zhuǎn)基因萵苣的培育過程，其中⑤表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；⑥表示將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的過程；⑦表示植物組織培養(yǎng)過程?！驹斀狻浚?）圖中①和⑤均表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程中需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，還需DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體以形成重組質(zhì)粒，基因表達(dá)載體的組成：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因。（2）顯微注射法是將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法；以培育出的蜘蛛羊作為乳腺生物反應(yīng)器時，最