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實(shí)驗(yàn)三、血清中總膽固醇的測(cè)定血清中總膽固醇的測(cè)定實(shí)驗(yàn)三（膽固醇氧化酶法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)膽固醇氧化酶法測(cè)定血清總膽固醇的原理。掌握血清總膽固醇的測(cè)定方法及操作技術(shù)。

（1）（3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚游離膽固醇＋FAA膽固醇酯酶H2O＋紅色醌類物質(zhì)過(guò)氧化物酶（POD）510nm光吸收法測(cè)定相對(duì)血清總膽固醇濃度二、實(shí)驗(yàn)原理血清總膽固醇游離膽固醇膽固醇酯膽固醇氧化酶膽甾烯酮+H2O2（2）游離膽固醇三、實(shí)驗(yàn)器材材料：人血清試劑：總膽固醇測(cè)定試劑盒用具：分光光度計(jì)，微量移液槍，試管，試管架，恒溫水浴鍋（1）取3支試管，按下表加入試劑:四、實(shí)驗(yàn)步驟充分混勻，37℃水浴中保溫15min；冷卻至室溫后，510nm處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及樣品管光密度值。（2）計(jì)算：依據(jù)朗伯-比爾定律：A=KLC標(biāo)準(zhǔn)管膽固醇濃度：5.17mmol/L

樣品管膽固醇濃度(mmol/L)＝樣品管光密度值

標(biāo)準(zhǔn)管光密度值×5.17C樣=A樣A標(biāo)×C標(biāo)參考值膽固醇血清參考值：3.0~5.20mmol/L危險(xiǎn)閾值：5.20~6.20mmol/L高膽固醇血癥：>6.20mmol/L

正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應(yīng)占比色皿的2/3。測(cè)定膽固醇所用的試劑應(yīng)防止被葡萄糖和甘油三酯污染。微量移液槍的正確使用注意事項(xiàng)思考題1、簡(jiǎn)述膽固醇氧化酶

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