第八章-免疫學應用(二)

第八章免疫學的臨床應用（二）免疫預防免疫治療免疫診斷免疫學診斷一、抗原或抗體的檢測二、淋巴細胞的測定免疫學診斷（一）抗原抗體反應的原理免疫學診斷一、抗原或抗體的檢測1、抗原抗體反應的特異性（1）特異性：基于兩種分子間的結構互補性和親和性。（2）可逆性（3）適宜的條件：電解質、pH、溫度等2、抗原抗體反應的可見性抗原抗體按適當比例結合，形成肉眼可見的現(xiàn)象。應用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應抗體以輔助診斷疾?。簜?、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體——診斷自身免疫病：SLE、類風濕性關節(jié)炎等2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原：確認運動員是否服用興奮劑（二）抗原或抗體的檢測方法凝集反應沉淀反應免疫標記技術

（一）凝集反應（agglutination）

顆粒性抗原（紅細胞、細菌、乳膠顆粒等）與抗體特異性結合，形成肉眼可見的凝集塊。1、直接凝集(directagglutination)

玻片凝集、試管凝集2、間接凝集（indirectagglutination）

可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細胞表面，與相應抗體混合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。3、抗球蛋白試驗（Coomb)乳膠顆粒紅細胞類風濕因子檢測妊娠試驗間接凝集直接凝集（二）沉淀反應（precipitation）

可溶性抗原（免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等）與相應抗體結合，形成不溶性免疫復合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色的沉淀。可分為單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳、免疫比濁法等。免疫比濁法：快速簡便。用于血清IgG、IgA、IgM、補體C3、C4含量測定

用標記物標記抗體或抗原進行抗原抗體反應借以提高免疫學診斷的敏感性熒光素：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、羅丹明（紅色熒光）放射性同位素：125I、131I酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA）

（三）免疫標記技術液相（ELISA）、固相（免疫組化技術）直接熒光法間接熒光法免疫熒光技術間接法雙抗夾心法競爭法E:辣根過氧化酶HRPS:底物二氨基聯(lián)苯胺DAB/鄰苯胺酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA法）間接法DAB雙抗夾心法DABBAS-ELISA法（

biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、RNA的檢測。卵白及某些微生物中的蛋白質

靈敏度達pg水平。常用于微量物質測定，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素、嗎啡、地高辛等藥物以及IgE等。放射免疫檢測法（RIA）競爭法能分離分子大小不同的蛋白質并確定其分子量，常用于檢測多種病毒的抗體或抗原，如抗HIV抗體的檢測。免疫印跡法膠體金斑點免疫層析試驗

抗HCG免疫金復合物干片粘貼在近下端C處，抗HCG單克隆抗體和抗小鼠IgG抗體分別固化于醋酸纖維素膜的檢測區(qū)T處和對照區(qū)R處。當試紙條下端B處浸入液體標本中，下端吸水材料即吸取液體液體向上端移動，流經(jīng)干片C處時，使免疫金復合物復溶，并帶動其向膜條滲移。若標本中有HCG，可與C處抗HCG免疫金復合物結合。此抗原抗體復合物流至測試區(qū)時即被固相抗體所獲，在T處顯出紅色反應線條。過剩的免疫金復合物繼續(xù)前行，至質控參照區(qū)R處與固相抗小鼠IgG結合（免疫金復合物中的單克隆抗體為小鼠IgG），而呈現(xiàn)出紅色質控線條。反之，陰性標本則無反應線條，而僅顯示質控線條。膠體金斑點免疫層析試驗原理操作及結果判定

二、淋巴細胞的測定（一）淋巴細胞的分離與類型鑒定1、淋巴細胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法白膜層單核細胞淋巴細胞BT吸附分離過尼龍毛柱分離（1）間接免疫熒光法：鑒定細胞的群、亞群。用CD3、CD4、CD8單克隆抗體檢測患者外周血T細胞表面相應抗原CD3+——T細胞，計算T細胞總數(shù)。

CD4+——CD4+T細胞，計算CD4+T細胞數(shù)。

CD8+——CD8+T細胞，計算CD8+亞群T細胞數(shù)

計算CD4+/CD8+比例

正常人PMB中T細胞占65~75%CD4+

/CD8+約為1.5~22、淋巴細胞的類型鑒定：淋巴細胞表面標記檢測、記數(shù)用mIgM、mIgD單克隆抗體檢測患者外周血B細胞表面相應的抗原已檢測B細胞的數(shù)量正常人外周血中SmIg+

細胞占8~12%（2）流式細胞術（flowcytometry）

（二）淋巴細胞功能測定1、T細胞功能測定（1）T細胞增殖試驗（淋轉）：絲裂原、抗CD3單克隆抗體等能非特異地激活T細胞，使之發(fā)生轉化增殖，計算淋巴母細胞轉化率（正常值65~80%）。①形態(tài)學觀察法②3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測定樣品的β射線放射活性③MTT法（2）淋巴細胞介導的細胞毒試驗（LMC）

——檢測CTL、NK、LAK、TIL細胞殺傷靶細胞的功能淋巴細胞轉化實驗T細胞PHA淋巴母細胞（體積增大，形態(tài)不整齊，核大，松散，有核仁，胞漿變寬，出現(xiàn)空泡）刀豆素A(ConA）美洲商陸（PWM）

分型：小淋巴細胞：核質密、胞漿小、無核仁過渡型：比小淋巴細胞略大、核質略疏松，出現(xiàn)核仁淋巴母細胞：大4～5倍，核質疏松，核仁1～3個，核周淡染的透明區(qū)，胞漿網(wǎng)狀可見空泡分裂相：染色體型方法：外周血+PHA→混勻，37℃72小時→取培養(yǎng)液涂片染色、鏡檢，分別計數(shù)轉化細胞（淋巴母細胞、過渡型母細胞和核有絲分裂相細胞）和成熟的淋巴細胞，共計數(shù)200個細胞。并計算轉化率。轉化率﹦轉化的淋巴細胞數(shù)轉化的淋巴細胞數(shù)+未轉化的淋巴細胞數(shù)×100%正常成人轉化率為：60%~80%，﹤50%視為降低E玫瑰花環(huán)實驗

（Erythocyte)TcellCD2（SRBCreceptor）結果判斷及意義結果判斷：圍繞≥3個綿羊紅細胞為陽性E花環(huán)形成率=正常值：40%-70%意義：反映T細胞的數(shù)量E花環(huán)形成陽性+E花環(huán)形成