雞新城疫抗體水平測(cè)定賽項(xiàng)規(guī)程

2022年全省高職院校技能大賽高職組雞新城疫抗體水平測(cè)定賽項(xiàng)競(jìng)賽規(guī)程一、賽項(xiàng)名稱(chēng)賽項(xiàng)名稱(chēng)：雞新城疫抗體水平測(cè)定賽項(xiàng)組別：高職組二、競(jìng)賽目的本賽項(xiàng)考核的核心技能是雞的采血方法，1%雞紅細(xì)胞懸液配制，血凝試驗(yàn)操作，四單位病毒配制，血凝抑制試驗(yàn)操作，抗體滴度報(bào)告，檢測(cè)結(jié)果分析等技能。本賽項(xiàng)考核的核心知識(shí)是《動(dòng)物微生物與免疫學(xué)》、《動(dòng)物傳染病》等專(zhuān)業(yè)課程理論知識(shí)。賽項(xiàng)由學(xué)校、行業(yè)共設(shè)，通過(guò)技能競(jìng)賽，能有效促進(jìn)全國(guó)高職院校畜牧獸醫(yī)類(lèi)專(zhuān)業(yè)之間的交流，引領(lǐng)專(zhuān)業(yè)建設(shè)與課程改革；能進(jìn)一步深化學(xué)校與企業(yè)之間的合作交流，加大行業(yè)人才隊(duì)伍建設(shè)力度，提升行業(yè)產(chǎn)業(yè)發(fā)展水平。同時(shí)，通過(guò)本賽項(xiàng)的資源轉(zhuǎn)化，可以向社會(huì)展示畜牧獸醫(yī)類(lèi)專(zhuān)業(yè)的師生風(fēng)采和建設(shè)成果，提高專(zhuān)業(yè)的教學(xué)水平，提升人才培養(yǎng)質(zhì)量。三、競(jìng)賽時(shí)間、地點(diǎn)3月26-27日甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院四、競(jìng)賽內(nèi)容賽項(xiàng)分別設(shè)置理論考核和技能考核2個(gè)考評(píng)點(diǎn)。理論考核占總成績(jī)的30%，競(jìng)賽時(shí)長(zhǎng)2小時(shí)，本賽項(xiàng)考核的核心知識(shí)是《動(dòng)物微生物與免疫學(xué)》、《動(dòng)物傳染病》等專(zhuān)業(yè)課程理論知識(shí)。選手根據(jù)賽項(xiàng)提供的理論試卷（填空題、單項(xiàng)選擇題、多項(xiàng)選擇題、判斷題、簡(jiǎn)答題、分析題）作答，主要考參賽選手的知識(shí)應(yīng)用能力、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題能力。技能考核占總成績(jī)的70%，為雞新城疫抗體水平測(cè)定，測(cè)定方法按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，競(jìng)賽時(shí)長(zhǎng)3小時(shí)，主要考核選手臨床采血技術(shù)、實(shí)驗(yàn)規(guī)范操作能力、結(jié)果的判斷能力及操作的執(zhí)行能力等。賽項(xiàng)技能考核為雞新城疫抗體水平測(cè)定（微量法），測(cè)定方法按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，競(jìng)賽時(shí)間為3小時(shí)。具體步驟及其分值如下：（一）試驗(yàn)器材準(zhǔn)備（占總成績(jī)的8%）按照操作規(guī)程進(jìn)行器材準(zhǔn)備，要求器材選擇正確，擺放有序，物品標(biāo)識(shí)合理，桌面整潔等。（二）配制1%雞紅細(xì)胞懸液（占總成績(jī)的13%）按照操作規(guī)程進(jìn)行采血、離心、洗滌、配制1%雞紅細(xì)胞懸液，要求采血規(guī)范、熟練、采血量適量、離心機(jī)使用規(guī)范、洗滌次數(shù)及洗滌時(shí)間適宜、配制過(guò)程規(guī)范、1%雞紅細(xì)胞量適宜等。（三）血凝試驗(yàn)（占總成績(jī)的20%）按照操作規(guī)程，用微量移液器在96孔V型血凝反應(yīng)板1-12孔滴加稀釋液、新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原，充分混勻，倍比稀釋后，再次滴加稀釋液，再添加1%雞紅細(xì)胞懸液，充分振蕩混勻，靜置感作適當(dāng)時(shí)間后，正確判定抗原的血凝效價(jià)。要求微量移液器使用規(guī)范、倍比稀釋操作規(guī)范、結(jié)果判定正確等。（四）配制四單位病毒（占總成績(jī)的10%）根據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果，按照操作規(guī)程配制四單位病毒。要求稀釋倍數(shù)計(jì)算正確，稀釋液體積加入得當(dāng)，四單位病毒配制量適宜等。（五）血凝抑制試驗(yàn)（占總成績(jī)的20%）按照操作規(guī)程，對(duì)20個(gè)被檢血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)操作，并設(shè)新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清對(duì)照、陰性血清對(duì)照；正確讀取標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清及被檢血清的結(jié)果，確定抗體滴度，完成報(bào)告。要求移液器使用規(guī)范、反應(yīng)板各孔的稀釋正確、感作時(shí)間得當(dāng)、對(duì)照成立、結(jié)果判斷正確等。（六）抗體滴度報(bào)告（占總成績(jī)的24%）按照操作規(guī)程，正確判定抗體滴度，完成報(bào)告。要求抗體滴度判讀正確、報(bào)告方式正確、結(jié)果誤差符合要求及場(chǎng)地整潔等。（七）結(jié)果分析（占總成績(jī)的5%）對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。五、競(jìng)賽方式1.本賽項(xiàng)為團(tuán)體賽，每組參賽隊(duì)隊(duì)員為2名，理論競(jìng)賽部分，選手單獨(dú)完成；技能競(jìng)賽部分由2名選手配合完成，參賽選手均為高職院校在籍學(xué)生。2.比賽由2022年全省職業(yè)院校技能大賽組委會(huì)統(tǒng)一組織。全省有關(guān)高職院校根據(jù)2022年全省職業(yè)院校技能大賽組委會(huì)要求推薦1-3支隊(duì)伍參賽。3.理論競(jìng)賽安排在26日，技能競(jìng)賽安排在27日。技能競(jìng)賽場(chǎng)工位號(hào)由選手抽簽決定，競(jìng)賽用設(shè)備、材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與工位號(hào)對(duì)應(yīng)。六、競(jìng)賽環(huán)境1.理論競(jìng)賽場(chǎng)：標(biāo)準(zhǔn)筆試考場(chǎng)。2.技能競(jìng)賽場(chǎng)：照明、控溫良好；賽場(chǎng)內(nèi)設(shè)有相對(duì)獨(dú)立的長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)臺(tái)并標(biāo)明編號(hào)，選手根據(jù)抽簽結(jié)果在相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)完成比賽；賽場(chǎng)內(nèi)設(shè)置攝像頭，可將實(shí)時(shí)賽況直播到觀摩室。七、技術(shù)規(guī)范本賽項(xiàng)以教育部頒布的職業(yè)院校相關(guān)專(zhuān)業(yè)教學(xué)指導(dǎo)方案和國(guó)家職業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物疫病防治員》（三級(jí)）規(guī)定的知識(shí)和技能要求為基礎(chǔ)，依據(jù)《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)，確定比賽內(nèi)容及方式。八、技術(shù)平臺(tái)儀器設(shè)備按《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T16550-2020）標(biāo)準(zhǔn)要求配備。本賽項(xiàng)所用的儀器、設(shè)備與材料見(jiàn)表1。表1項(xiàng)目競(jìng)賽用儀器、設(shè)備與材料序號(hào)器材或設(shè)備名稱(chēng)數(shù)量規(guī)格1托盤(pán)天平1臺(tái)500g2離心機(jī)1臺(tái)L6003微型振蕩器1臺(tái)4微量移液器1支0.005～0.05mL5微量移液器1支0.1～1mL6微量移液器1支2～10mL7微量移液器吸頭150個(gè)0.005～0.05mL20個(gè)0.1～1mL10個(gè)2～10mL8微量移液器吸頭盒2個(gè)0.005～0.05mL1個(gè)0.1～1mL1個(gè)2～10mL9板式微量移液器架1個(gè)1096孔V型血凝反應(yīng)板5塊11燒杯5個(gè)50mL2個(gè)500mL12禽用采血器2支5mL2支10mL13具蓋塑料離心管6支15mL14指型離心管6支1.5mL15試管架1個(gè)16指型離心管架1個(gè)17細(xì)記號(hào)筆1支18實(shí)驗(yàn)白大褂2件190.9%生理鹽水500mL203.8%枸櫞酸鈉溶液20mL21雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原1份22被檢血清樣本20個(gè)23雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清1份24雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陰性血清1份2575%酒精棉球若干26干棉球若干27非免疫公雞1只28乳膠手套4副29醫(yī)用防護(hù)口罩2只 30實(shí)驗(yàn)報(bào)告單1張31標(biāo)簽紙若干33A4紙2張34簽字筆2支九、評(píng)分方法成績(jī)?cè)u(píng)定按照公平、公正、客觀的原則進(jìn)行。（一）評(píng)分方法競(jìng)賽現(xiàn)場(chǎng)裁判對(duì)選手技能操作根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)真評(píng)分，并簽名確認(rèn)；賽項(xiàng)裁判長(zhǎng)對(duì)所有裁判員的打分成績(jī)進(jìn)行審核，并簽名。結(jié)果評(píng)定采用百分制，理論成績(jī)占30%，技能操作占70%計(jì)算總成績(jī)。（二）成績(jī)審核為保障成績(jī)?cè)u(píng)判的準(zhǔn)確性，監(jiān)督組將對(duì)賽項(xiàng)總成績(jī)排名前30%的所有參賽隊(duì)伍（選手）的成績(jī)進(jìn)行復(fù)核；對(duì)其余成績(jī)進(jìn)行抽檢復(fù)核，抽檢覆蓋率不得低于15%。如發(fā)現(xiàn)成績(jī)錯(cuò)誤以書(shū)面方式及時(shí)告知裁判長(zhǎng)，由裁判長(zhǎng)更正成績(jī)并簽字確認(rèn)。復(fù)核、抽檢錯(cuò)誤率超過(guò)5%的，裁判組將對(duì)所有成績(jī)進(jìn)行復(fù)核。（三）成績(jī)公布記分員將解密后的各參賽隊(duì)成績(jī)匯總成最終成績(jī)單，經(jīng)裁判長(zhǎng)、監(jiān)督組簽字后，在指定地點(diǎn)、以紙質(zhì)形式進(jìn)行公示，公示時(shí)間為2小時(shí)。成績(jī)公示無(wú)異議后，由仲裁長(zhǎng)、監(jiān)督組長(zhǎng)在成績(jī)單上簽字，并在閉幕式上公布競(jìng)賽成績(jī)。項(xiàng)目技能競(jìng)賽評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2。表2項(xiàng)目技能競(jìng)賽評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)序號(hào)考核內(nèi)容考核要點(diǎn)分值評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)一試驗(yàn)器材準(zhǔn)備（8分）儀器與材料準(zhǔn)備2儀器正確準(zhǔn)備，1分；材料準(zhǔn)備到位，1分。參考評(píng)分要點(diǎn)：未檢查清點(diǎn)儀器材料，儀器使用不正確，材料準(zhǔn)備不到位，口罩、滅菌橡膠外科手套穿戴不規(guī)范，酌情扣分。物品標(biāo)識(shí)4標(biāo)識(shí)合理，2分；標(biāo)識(shí)清晰，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：使用的燒杯、離心管（包括管蓋）和血凝反應(yīng)板均要標(biāo)記；標(biāo)識(shí)遺漏或標(biāo)識(shí)不清，酌情扣分，不標(biāo)識(shí)不得分。桌面整潔度2擺放合理，2分；參考評(píng)分要點(diǎn)：試驗(yàn)器材無(wú)序擺放，不得分。二配制1%雞紅細(xì)胞懸液（13分）采血方法和采血量5抗凝劑適量，1分；采血方法規(guī)范、熟練，2分；采血量控制在2～4mL之間，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：雞正確保定；血液與抗凝劑比例4:1；采血時(shí)，雞放置于雞籠上保定；采血部位宜首選翅靜脈；采血部位合理消毒；采血時(shí)一針見(jiàn)血；采血量控制在2~4mL之間用干棉球按壓止血；采血后采血局部未見(jiàn)明顯血腫；采血未成功的，該項(xiàng)不得分。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計(jì)扣完5分為止。離心機(jī)使用2離心機(jī)使用規(guī)范，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：離心前做好平衡，對(duì)稱(chēng)放入離心機(jī)中；規(guī)范使用天平，應(yīng)“左物右碼”；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計(jì)扣完2分為止。紅細(xì)胞懸液配制方法6稀釋液倍數(shù)正確，2分；離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)、離心時(shí)間正確，2分；紅細(xì)胞洗滌次數(shù)適宜，1分；壓積紅細(xì)胞吸取正確，1分。參考評(píng)分要點(diǎn)：紅細(xì)胞洗滌時(shí)，用3～4倍體積的滅菌生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尯箅x心管中液體體積最大不可超過(guò)12mL；紅細(xì)胞洗滌時(shí)滅菌生理鹽水與紅細(xì)胞充分混勻；離心參數(shù)設(shè)定：2000r/min，5～10min/次；紅細(xì)胞洗滌時(shí)吸除血漿和白細(xì)胞等雜質(zhì)；紅細(xì)胞洗滌應(yīng)3～5次；最后配置1%紅細(xì)胞懸液為10~20mL；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累計(jì)扣完6分為止。三血凝試驗(yàn)（20分）器材使用4微量移液器使用規(guī)范，2分；吸頭更換操作符合規(guī)范，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：更換吸頭時(shí)操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；微量移液器量程設(shè)置準(zhǔn)確；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范，移液器垂直加樣為規(guī)范，傾斜角度不要過(guò)大；微量移液器用完后應(yīng)置于移液器架，不得隨意放于桌面；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。操作程序6吸取試劑更換吸頭，2分；加樣順序正確，1分；倍比稀釋操作規(guī)范，2分；振蕩及感作時(shí)間得當(dāng)，1分。參考評(píng)分要點(diǎn)：稀釋液加樣完成后，在吸取待檢樣品前需更換吸頭；1%紅細(xì)胞懸液加之前應(yīng)充分混勻；邊滴加邊震蕩混勻，按由病毒低濃度往高濃度的方向加樣；倍比稀釋時(shí)不產(chǎn)生氣泡；倍比稀釋時(shí)混勻充分，移液正確；加樣時(shí)，吸頭與液面、孔壁不接觸；試劑不滴加到孔外；可以使用振蕩器，以液體不振出來(lái)為準(zhǔn)；固、液廢棄物分開(kāi)放置。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完6分為止。結(jié)果判定準(zhǔn)確10能依據(jù)生理鹽水對(duì)照孔的RBC呈明顯鈕扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果，4分；對(duì)照孔結(jié)果正確時(shí)，能確定完全凝集的新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原最高稀釋倍數(shù)為病毒的血凝價(jià)，4分；能把完全凝集的病毒的最高稀釋倍數(shù)作為1個(gè)血凝單位，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：判定血凝價(jià)時(shí)機(jī)不正確扣4分（必須是完全凝集）；結(jié)果判定不正確扣4分；對(duì)照孔凝集扣4分；HA重復(fù)3排，少做1排扣1分；未作記錄扣2分；讀數(shù)時(shí)，結(jié)果有跳孔現(xiàn)象的，每跳1孔扣2分。*以上細(xì)節(jié)累計(jì)扣完10分為止。四配制4個(gè)血凝單位病毒溶液（10分）器材選擇4器材選擇合理，2分；使用規(guī)范、熟練，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：加吸頭時(shí)操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；選擇合適量程微量移液器移取樣品；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。配制方法4稀釋倍數(shù)計(jì)算正確，2分；稀釋液加入得當(dāng)、操作規(guī)范，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：計(jì)算錯(cuò)誤扣2分微量移液器選擇適宜，設(shè)置準(zhǔn)確，未規(guī)范操作酌情扣分。配制量適宜2配制量適宜，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：配制量10~20mL為適量，每超過(guò)10mL扣1分，最多扣2分。五血凝抑制試驗(yàn)（20分）器材使用4器材使用規(guī)范、熟練，4分。參考評(píng)分要點(diǎn)：加吸頭時(shí)操作規(guī)范，不可用力撞擊吸頭盒；微量移液器量程設(shè)置準(zhǔn)確；微量移液器吸取和打出液體操作規(guī)范，移液器垂直加樣為規(guī)范，傾斜角度不要過(guò)大；*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完4分為止。操作程序6加樣順序正確，2分；倍比稀釋操作規(guī)范，2分；感作時(shí)間得當(dāng)，1分；吸頭更換正確，1分。參考評(píng)分要點(diǎn)：參照國(guó)標(biāo)，對(duì)照設(shè)立完整，每缺一個(gè)對(duì)照扣1分；稀釋液加樣完成后，在吸取待檢樣品前需更換吸頭；倍比稀釋時(shí)不產(chǎn)生氣泡；加樣時(shí)，吸頭與液面不接觸；試劑不滴加到孔外；加1%紅細(xì)胞時(shí)邊滴加邊振蕩混勻，加樣順序正確；感作時(shí)間正確；固、液廢棄物分開(kāi)放置。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，酌情扣分，累加扣完6分為止。結(jié)果判定準(zhǔn)確10能在對(duì)照孔紅細(xì)胞呈明顯鈕扣狀沉淀到孔底時(shí)判定結(jié)果，2分；在對(duì)照孔結(jié)果正確情況下，能從背側(cè)觀察RBC有無(wú)呈淚珠樣流淌，2分；能把完全不凝集（RBC完全流下）被檢血清的最高稀釋倍數(shù)作為該血清的HI滴度，3分；陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度不大于2log2，陽(yáng)性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度與已知滴度相差在1個(gè)稀釋度范圍內(nèi)，3分。參考評(píng)分要點(diǎn)：陰性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度大于2log2或/和陽(yáng)性血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原對(duì)照的HI滴度與已知滴度大于±1扣3分；結(jié)果有跳孔現(xiàn)象的，每跳1孔扣2分。判斷血清HI滴度，做好記錄；判讀不準(zhǔn)扣1分，未作記錄扣2分；*以上細(xì)節(jié)累計(jì)扣完10分為止。六抗體滴度報(bào)告（24分）抗體滴度報(bào)告2抗體滴度報(bào)告方式正確，1分；試驗(yàn)記錄清晰，1分。參考評(píng)分要點(diǎn)：抗體滴度用log2表示；試驗(yàn)記錄和報(bào)告書(shū)寫(xiě)整潔，不亂涂改。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范書(shū)寫(xiě)，酌情扣分，累加扣完2分為止。結(jié)果誤差20每個(gè)樣本1分，共20個(gè)樣本參考評(píng)分要點(diǎn)：結(jié)果誤差±1，得1分；誤差超過(guò)±1，0分。場(chǎng)地整潔度2場(chǎng)地整潔，2分。參考評(píng)分要點(diǎn)：移液槍未調(diào)到最大量程；其他儀器和器皿未復(fù)位；采血器、殘留紅細(xì)胞泥離心管等未放入固廢缸等。*以上細(xì)節(jié)未規(guī)范操作，每錯(cuò)1項(xiàng)扣1分，累加扣完2分為止。七結(jié)果分析（5分）5總分100十、獎(jiǎng)項(xiàng)設(shè)定本賽項(xiàng)設(shè)一、二、三等獎(jiǎng)。以賽項(xiàng)實(shí)際參賽隊(duì)總數(shù)為基數(shù)，一、二、三等獎(jiǎng)獲獎(jiǎng)比例分別為10%、20%、30%（小數(shù)點(diǎn)后四舍五入）。獲得獎(jiǎng)項(xiàng)的參賽隊(duì)，授予榮譽(yù)證書(shū)。獲得一等獎(jiǎng)的參賽隊(duì)指導(dǎo)教師由大賽組委會(huì)頒發(fā)優(yōu)秀指導(dǎo)教師證書(shū)。十一、申訴與仲裁1.各參賽隊(duì)對(duì)不符合賽項(xiàng)規(guī)程規(guī)定的儀器、設(shè)備、工裝、材料、物件、計(jì)算機(jī)軟硬件、競(jìng)賽使用工具、用品，競(jìng)賽執(zhí)裁、賽場(chǎng)管理、競(jìng)賽成績(jī)，以及工作人員的不規(guī)范行為等，可向賽項(xiàng)仲裁組提出申訴，申訴主體為參賽隊(duì)領(lǐng)隊(duì)。2.申訴啟動(dòng)時(shí)，參賽隊(duì)向賽項(xiàng)仲裁組遞交領(lǐng)隊(duì)親筆簽字同意的書(shū)面報(bào)告。書(shū)面報(bào)告應(yīng)對(duì)申訴事件的現(xiàn)象、發(fā)生時(shí)間、涉及人員、申訴依據(jù)等進(jìn)行充分、實(shí)事求是的敘述。非書(shū)面申訴不