藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測分析中質(zhì)量保證

藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測分析中質(zhì)量保證藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測必須有嚴(yán)格的質(zhì)量控制措施，涉及基因擴(kuò)增的檢測項(xiàng)目必須在通過技術(shù)審核的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室完成。分析中質(zhì)量控制的內(nèi)容包括：實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的要求；檢測程序的選擇、驗(yàn)證及確認(rèn)；儀器設(shè)備的使用、維護(hù)與校準(zhǔn)；人員培訓(xùn)；樣本的準(zhǔn)備（如核酸純化等）；執(zhí)行檢測；確認(rèn)檢測結(jié)果的可靠性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定室內(nèi)質(zhì)量控制操作程序（SOP）和參加室間質(zhì)評或?qū)嶒?yàn)室間比對。1實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)要求原則上按照《個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。作為藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測核心技術(shù)之一的PCR，要保證結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性，首要措施就是防“污染”。檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》要求進(jìn)行設(shè)置，并按要求嚴(yán)格控制空氣流向，避免PCR產(chǎn)物污染。2檢測方法藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測過程一般包括核酸提取和靶標(biāo)檢測兩階段。2.1核酸提取方法DNA提取用酚-氯仿提取法和鹽析法等均可。酚-氯仿法提取可能導(dǎo)致DNA樣品中酚或氯仿殘留，從而抑制后續(xù)的PCR反應(yīng)。鹽析法提取可能存在蛋白質(zhì)及其他物質(zhì)的殘余，DNA的純度和得率不高。DNA提取操作要求在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。DNA一般溶解在pH為7.2的TE（Tris-EDTA）溶液中，可減少其降解。但如果DNA在提取后幾天內(nèi)用于PCR，也可用雙蒸水進(jìn)行溶解。提取出的DNA要求OD260/280介于1.6~1.8之間，濃度大于50ng/μL。DNA相對穩(wěn)定，在無DNA酶的情況下，常溫下純化的DNA在TE緩沖液中可放置26周，2~8C冰箱中可放置至少1年。為降低DNA酶的活性和確保DNA的完整性，純化的DNA標(biāo)本的長期保存應(yīng)在0oC以下的環(huán)境中。建議將DNA原液保存于-70oC或以下的環(huán)境中。DNA應(yīng)放置在帶蓋密封、疏水的塑料管中（帶橡膠墊片的塑料管更好，可防蒸發(fā)）。聚丙烯容易吸附DNA，尤其是在高離子強(qiáng)度的時(shí)候，聚乙烯結(jié)合DNA的能力更強(qiáng)。DNA最適于保存在異質(zhì)同晶聚合物材料的塑料管或經(jīng)特殊處理的聚丙烯塑料管中。RNA的提取用異硫氰酸胍結(jié)合酚-氯仿提取法，要求提取后的RNAOD260/280介于1.8~2.1之間，瓊脂糖電泳28S:18S≥2。因RNA很容易被降解，純化好的RNA最好沉淀在無水乙醇中-70C或更低溫度下保存。RNA需儲存在滅菌、疏水、并用焦碳酸二乙酯（DEPC）滅活了RNA酶的塑料管中，操作過程需帶手套。盡量將RNA溶解于偏堿性（pH7.1~7.5）溶液中。純化的RNA在首次凍融后3小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定，但反復(fù)凍融可導(dǎo)致降解。2.2藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測的檢測方法用于靶標(biāo)檢測的方法包括PCR-直接測序法、PCR-焦磷酸測序法、熒光定量PCR法、PCR-基因芯片法、PCR-電泳分析、PCR-高分辨率熔解曲線法、等位基因特異性PCR法、PCR-限制性片段長度多態(tài)性方法、原位雜交（ISH）等多種方法，每種方法的原理和優(yōu)缺點(diǎn)如下：1）PCR-直接測序法也稱PCR-Sanger測序，該方法基于雙脫氧核糖核酸（ddNTP）末端終止法，根據(jù)核苷酸在某一固定點(diǎn)開始延伸，隨機(jī)在某一特定堿基處終止，由于摻入的每個(gè)堿基都進(jìn)行了熒光標(biāo)記，因此產(chǎn)生了以A、T、C、G結(jié)束的四組相差一個(gè)堿基的不同長度的系列核酸片段；通過毛細(xì)管電泳分離這些片段后讀取待測核酸的堿基序列。Sanger法測序是DNA序列分析的經(jīng)典方法。由于該方法可直接讀取DNA的序列，因此被認(rèn)為是基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)。PCR-Sanger測序法的操作過程主要包括PCR擴(kuò)增和PCR產(chǎn)物純化、測序反應(yīng)、測序和結(jié)果分析四個(gè)主要步驟。分析時(shí)需要設(shè)置陰性對照和陽性質(zhì)控品。該方法屬于定性檢測，優(yōu)點(diǎn)是測序長度較長，可發(fā)現(xiàn)新的變異位點(diǎn)。主要不足：靈敏度不高，尤其是在進(jìn)行腫瘤組織體細(xì)胞突變檢測時(shí)，當(dāng)組織中靶標(biāo)基因突變比例低于20％時(shí)，可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果；對試劑和儀器有特殊要求，不易普及；操作復(fù)雜，成本相對較高，速度慢、通量低。2）PCR-焦磷酸測序法本方法是由4種酶催化的同一反應(yīng)體系中的酶級聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)需設(shè)計(jì)一條生物素標(biāo)記的測序引物，當(dāng)引物與單鏈模板DNA退火后，在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、熒光素酶和三磷酸腺苷雙磷酸酶4種酶的協(xié)同作用下，將引物上每一個(gè)dNTP的聚合與一次熒光信號的釋放偶聯(lián)起來，通過檢測熒光的釋放和強(qiáng)度，達(dá)到實(shí)時(shí)測定DNA序列的目的。所需試劑包括樣本處理試劑、核酸擴(kuò)增試劑、單鏈模板制備試劑、焦磷酸測序試劑和陽性質(zhì)控品五大類。所需儀器為PCR儀和焦磷酸測序儀。為避免假陽性和假陰性結(jié)果，應(yīng)嚴(yán)格區(qū)分陽性質(zhì)控品和反應(yīng)試劑的使用，防止因試劑污染致假陽性發(fā)生。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)：檢測靈敏度較高，對體細(xì)胞突變和甲基化等可實(shí)現(xiàn)定量檢測；分型準(zhǔn)確可靠，通量較高，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)靈活，可發(fā)現(xiàn)新的突變或遺傳變異。主要缺點(diǎn)：對試劑和儀器有特殊要求，不易普及；檢測靈敏度有限，對腫瘤組織中的低豐度體細(xì)胞突變（<3％）容易出現(xiàn)假陰性；測序長度僅10多個(gè)堿基，不能對長片段進(jìn)行分析。3）實(shí)時(shí)熒光PCR法根據(jù)檢測原理的不同，實(shí)時(shí)熒光PCR法可分為探針法和非探針法兩種，前者利用與靶序列特異雜交的探針（Taqman和分子信標(biāo)）來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，后者利用熒光染料或特殊設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加。Taqman探針法同時(shí)綜合了5’端核酸酶活性和熒光等技術(shù)，其在反應(yīng)過程使用4條寡核苷酸鏈，其中兩條為等位基因特異性探針，兩條為PCR引物。兩條探針可分別與突變型和野生型模板互補(bǔ)，其兩端分別應(yīng)用含報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)的染料進(jìn)行標(biāo)記，兩條探針的報(bào)告基團(tuán)熒光染料不一樣。在進(jìn)行SNP檢測時(shí)，PCR擴(kuò)增的退火過程導(dǎo)致探針與模板雜交結(jié)合，當(dāng)引物延伸至探針處時(shí)，DNA聚合酶的5’端外切酶活性將探針的5’端報(bào)告基團(tuán)從探針上切除，使之與淬滅基團(tuán)分離，從而釋放出相對應(yīng)的熒光，而沒有配對的探針仍然保持完整而不會發(fā)熒光。不同的等位基因探針由于標(biāo)記的熒光染料不同，因此所發(fā)熒光信號不同，可通過對熒光信號的檢測判斷樣本的基因型。實(shí)時(shí)熒光PCR法靈敏度高，分型準(zhǔn)確，操作簡便快捷，所用儀器容易普及，易于推廣使用。但該方法通量不高，探針成本較高，單個(gè)位點(diǎn)的檢測成本與樣本量有關(guān)，樣本量越小，成本越高。本方法主要適于對少量位點(diǎn)、大樣本進(jìn)行分型。目前CFDA已批準(zhǔn)CYP2C9、VKORC1等多種基因多態(tài)性檢測的PCR-熒光檢測試劑盒。4）PCR-基因芯片法該方法以特定的寡核苷酸片段作為探針，將其有規(guī)律地排列固定于支持物上，然后將樣品DNA通過PCR擴(kuò)增、熒光標(biāo)記等程序，按堿基配對原理與芯片雜交，再通過熒光檢測系統(tǒng)對芯片上的熒光信號進(jìn)行檢測和分析，從而迅速獲得個(gè)體的基因型信息?；蛐酒中头ǖ牟僮鬟^程包括PCR核酸擴(kuò)增、雜交、芯片掃描和結(jié)果分析。該方法用于DNA基因分型時(shí)屬于定性檢測，靈敏度為50ng/μL?；蛐酒ǚ治鰰r(shí)需設(shè)置陰性對照和陽性質(zhì)控品。應(yīng)用基因芯片檢測試劑盒時(shí)應(yīng)確保試劑在開封前按要求保存、各組分液體使用前振蕩混勻，雜交和洗片操作務(wù)必在避光條件下進(jìn)行，PCR反應(yīng)液和定位參照需避光保存，芯片加樣時(shí)注意使液體鋪滿整個(gè)反應(yīng)區(qū)，但不能溢出、不能出現(xiàn)氣泡，以防交叉污染。其主要優(yōu)點(diǎn)是可同時(shí)對多個(gè)待測SNP位點(diǎn)進(jìn)行檢測。我國CFDA已批準(zhǔn)多種用于藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因如ALDH2、CYP2C9、CY2C19、CYP2D6、ADR1、ACE、VKORC1多態(tài)性檢測的基因芯片試劑盒。5）PCR-電泳分析該方法是指對待分析的目的基因片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并通過瓊脂糖凝膠電泳或毛細(xì)管電泳分析，根據(jù)PCR產(chǎn)物的大小對基因多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。該方法屬于定性檢測，且只能用于對已知的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行檢測，不能識別未知多態(tài)性。瓊脂糖電泳法適用于對片段較長的插入缺失多態(tài)性進(jìn)行檢測，如ACE插入缺失多態(tài)性；毛細(xì)管電泳法適于對較短的插入缺失多態(tài)性如UGT1A1*28多態(tài)性和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）進(jìn)行檢測。PCR過程中需建立陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品，電泳分析時(shí)需同時(shí)用分子量標(biāo)記物進(jìn)行片段大小的判斷。當(dāng)分子量標(biāo)記物反應(yīng)管無條帶或出現(xiàn)較弱的條帶時(shí)，可能的原因包括點(diǎn)樣孔漏、熒光染料不夠或失效、電泳時(shí)間過長或電壓過大。該方法的優(yōu)點(diǎn)是成本低，在普通實(shí)驗(yàn)室即可開展；缺點(diǎn)是只適合對DNA插入/缺失多態(tài)性或融合基因進(jìn)行定性測定，不能用于SNP的檢測。6）PCR-高分辨率熔解曲線（HRM）法該方法通過對PCR反應(yīng)的熔解曲線分析進(jìn)行基因分型。PCR擴(kuò)增的熔解曲線取決于其擴(kuò)增序列，序列中一個(gè)堿基的差異都可導(dǎo)致雙鏈DNA的解鏈溫度發(fā)生變化。HRM法應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀監(jiān)測這種細(xì)微的溫度變化，確定所擴(kuò)增的目的片段中是否存在突變，從而用于基因分型。HRM分析使用LCGreen等飽和熒光染料，該類染料在飽和濃度時(shí)對PCR反應(yīng)無抑制作用，因此可以高濃度使用，從而全部結(jié)合DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝。在雙鏈DNA的變性過程不存在熒光分子的重排，其特異度得到大幅提升，因此，熔解曲線細(xì)微的變化可以反映擴(kuò)增片段中堿基的差異。應(yīng)用本方法進(jìn)行基因分型屬于定性分析。該方法操作簡便、快速、通量大、使用成本低、結(jié)果準(zhǔn)確，有利于實(shí)現(xiàn)閉管操作，在進(jìn)行甲基化檢測時(shí)可根據(jù)熔解曲線確定甲基化程度的高低。該方法的缺點(diǎn)是：不能排除待測核酸中新出現(xiàn)的遺傳變異；由于單個(gè)堿基突變導(dǎo)致DNA解鏈溫度的變化非常小，該方法對儀器的靈敏度和分辨率有較高要求。7）等位基因特異性PCR（Allele-specificPCR，AS-PCR）又稱為擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)PCR（AmplificationRefractoryMutationSystemPCR，ARMS-PCR）。該技術(shù)的基本原理：由于TaqDNA聚合酶缺乏3’到5’端的外切酶活性，3’端錯(cuò)配的堿基會導(dǎo)致引物延伸速度變慢，當(dāng)錯(cuò)配達(dá)到一定程度時(shí)，引物延伸將終止，得不到特異長度的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，從而提示模板DNA沒有與引物3’端配對的堿基，反之則有。因此，AS-PCR反應(yīng)需要兩條等位基因特異的引物和一條共用的反向引物，兩條非特異性引物在3’端與模板錯(cuò)配，但其他部分堿基序列完全一樣。只有引物的3’端與模板完全配對時(shí)，PCR擴(kuò)增才可以進(jìn)行。PCR產(chǎn)物可通過凝膠電泳進(jìn)行分析和基因型的判斷。該方法也可與實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)合起來進(jìn)行基因分型。該方法可以用于檢測各種類型的SNP，其優(yōu)勢是靈敏度高，特別適合于對腫瘤組織中的體細(xì)胞突變進(jìn)行檢測；缺點(diǎn)是假陽性率較高。8）PCR-限制性片段長度多態(tài)性方法限制性片段長度多態(tài)性方法（RFLP）是一種基于酶切原理的方法，是最早用于基因分型的經(jīng)典方法之一，現(xiàn)在仍被廣泛采用。該方法主要基于某些限制性內(nèi)切酶可以特異性識別某一特定序列和結(jié)構(gòu)DNA，并對其進(jìn)行剪切的原理。限制性內(nèi)切酶通常識別雙鏈DNA的某一特定序列，并在特定位置或者附近將雙鏈DNA切斷，從而產(chǎn)生較短的DNA片段。由于限制性內(nèi)切酶識別序列的嚴(yán)格性，一個(gè)堿基的變化都可以導(dǎo)致酶切活性的消失。利用這一特性，若待分型的SNP位點(diǎn)在某一限制性內(nèi)切酶的識別位點(diǎn)上，將會導(dǎo)致該酶只對其中的一種等位基因具有酶切活性。因此，對位于限制性酶切識別位點(diǎn)的SNP進(jìn)行分型時(shí)，可以使用包含該位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物與相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行溫育。酶切以后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳，并根據(jù)酶切產(chǎn)物片段的大小來進(jìn)行基因分型。該方法不需要任何探針，也不需要特別的儀器設(shè)備，成本較低，實(shí)驗(yàn)過程簡單，可操作性強(qiáng)。但缺點(diǎn)也很明顯，主要是通量太低，大量分型時(shí)工作量大，并且只適用于部分SNP分型。9）原位雜交（ISH）法ISH法以各種人體標(biāo)本，包括相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法制備的細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)標(biāo)本（福爾馬林固定石蠟包埋）作為靶標(biāo)，采用目的DNA探針與該靶標(biāo)進(jìn)行分子雜交，從而檢測相關(guān)的靶基因異常。ISH技術(shù)按照探針標(biāo)記物的類型，可分為亮視野原位雜交和熒光原位雜交（FISH）。ISH法檢測的靶標(biāo)具有完整的細(xì)胞核，無需進(jìn)行核酸的提取。其具體的方法學(xué)原理見《原位雜交（ISH）指南》。在藥物代謝酶和靶點(diǎn)基因檢測中，ISH法主要用于測定基因擴(kuò)增和基因缺失異常。表1.各種藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)及適用性比較方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)適用性AS-PCR靈敏度高，適于對腫瘤組織中突變比例較低的體細(xì)胞突變進(jìn)行檢測。通量低對小樣本、低突變比例的體細(xì)胞突變進(jìn)行檢測。實(shí)時(shí)熒光PCR通量較高，操作簡單，儀器設(shè)備易普及。探針較昂貴對相同位點(diǎn)、大樣本標(biāo)本進(jìn)行檢測，可用于mRNA表達(dá)檢測。焦磷酸測序高通量，高靈敏度，可以檢測插入/缺失突變和未知突變。等位基因含量的比例可用于室內(nèi)質(zhì)控。需要特殊儀器設(shè)備。適合于較大樣本、突變比例高于5％的各種類型SNP檢測、甲基化位點(diǎn)的確定。HRM成本低，靈敏度高，閉管操作，降低污染風(fēng)險(xiǎn)。需要特殊儀器設(shè)備，條件摸索過程較為困難適合有該類機(jī)器的實(shí)驗(yàn)室開展各種類型SNP分型研究；可用于已知甲基化位點(diǎn)的檢測。Sanger法測序直接獲取序列，分型的金標(biāo)準(zhǔn)，可發(fā)現(xiàn)未知突變。通量低，不能檢測突變比例小于20％的SNP。各種SNP的檢測，未知突變的篩查以及驗(yàn)證其他分型的結(jié)果。PCR-RFLP無需特殊的儀器設(shè)備，成本較低，實(shí)驗(yàn)過程簡單，可操作性強(qiáng)。通量低，只適用于部分SNP分型適用于無條件夠買貴重儀器設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室開展小樣本的分型檢測。基因芯片法通量高靈活度低，成本高，需要特殊的儀器設(shè)備。適用于具備芯片檢測能力的實(shí)驗(yàn)室對已知固定位點(diǎn)、大樣本標(biāo)本進(jìn)行檢測。原位雜交（ISH）在細(xì)胞核原位對基因的異常進(jìn)行檢測成本高，通量低，時(shí)間較長。適于對基因擴(kuò)增和缺失異常進(jìn)行檢測。2.3藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測項(xiàng)目及類型遺傳藥理學(xué)知識庫（PharmGKB）根據(jù)項(xiàng)目成熟程度將個(gè)體化用藥基因檢測項(xiàng)目分為4級，并認(rèn)為其中1級項(xiàng)目（包括1A級和1B級）滿足臨床應(yīng)用的最高標(biāo)準(zhǔn)，而4級項(xiàng)目適于臨床應(yīng)用的證據(jù)最少[1]。1A級項(xiàng)目為同時(shí)獲臨床遺傳藥理學(xué)實(shí)施聯(lián)盟（ClinicalPharmacogeneticsImplementationconsortium，CPIC）、認(rèn)可CPIC藥物基因組學(xué)指南的醫(yī)學(xué)會、以及美國國家衛(wèi)生研究院藥物基因組學(xué)研究網(wǎng)絡(luò)（PharmagenomicsResearchNetwork，PGRN）認(rèn)同的項(xiàng)目，這類項(xiàng)目通常經(jīng)大規(guī)模隨機(jī)對照臨床試驗(yàn)（RCT）對項(xiàng)目的意義進(jìn)行了論證；1B級項(xiàng)目有確切的臨床證據(jù)提示相關(guān)性，且這種相關(guān)性被具有一定樣本規(guī)模的研究所證實(shí)，但還需進(jìn)一步的臨床證據(jù)。根據(jù)檢測項(xiàng)目所涉及的基因在影響藥物反應(yīng)中的作用機(jī)制和被測靶分子（DNA或RNA）的不同，個(gè)體化用藥分子檢測項(xiàng)目包括藥物代謝酶與轉(zhuǎn)運(yùn)體基因遺傳多態(tài)性檢測、藥物作用靶點(diǎn)基因遺傳變異檢測、其他基因變異檢測和藥物作用靶點(diǎn)基因mRNA表達(dá)檢測四種類型（附錄C）。3儀器設(shè)備的使用、維護(hù)與保養(yǎng)原則上按照《個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測涉及的儀器設(shè)備眾多，實(shí)驗(yàn)室可參考生產(chǎn)商提供的操作說明書編寫書面的、有案可查的預(yù)防性維護(hù)及校準(zhǔn)計(jì)劃，確定儀器設(shè)備的維護(hù)周期，建立儀器設(shè)備日常維護(hù)的SOP。對于某些計(jì)量分析儀器，應(yīng)依照我國計(jì)量法規(guī)定，由計(jì)量檢定機(jī)構(gòu)定期進(jìn)行校驗(yàn)，并保存好校驗(yàn)證書。加熱系統(tǒng)及冰箱等設(shè)備的維護(hù)包括對溫度進(jìn)行監(jiān)測。儀器維護(hù)過程中要注意清潔劑的使用，尤其是儀器的光路系統(tǒng)。每臺儀器應(yīng)該配備專用的清潔工具。在例行儀器的維護(hù)和保養(yǎng)后，應(yīng)填寫儀器維護(hù)保養(yǎng)記錄表。如維護(hù)中發(fā)現(xiàn)問題，應(yīng)及時(shí)匯報(bào)并將出現(xiàn)的問題詳細(xì)記錄，最后由維護(hù)操作人員簽名。4人員培訓(xùn)原則上按照《個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。藥物代謝酶和藥物作用靶點(diǎn)基因檢測通常要涉及試劑配制、核酸提取、儀器編程、結(jié)果分析和報(bào)告等步驟。操作人員需要有一定的專業(yè)技術(shù)知識和經(jīng)驗(yàn)才能獲得穩(wěn)定可靠的檢測結(jié)果。加強(qiáng)人員培訓(xùn)是確保檢測質(zhì)量的關(guān)鍵。人員培訓(xùn)分為入職培訓(xùn)、內(nèi)部培訓(xùn)和外部培訓(xùn)。通過培訓(xùn)，讓操作人員掌握和建立安全操作的概念、“防污染”的概念、具備獨(dú)立進(jìn)行質(zhì)控活動和儀器維護(hù)的能力，可對試劑和質(zhì)控品的出入庫及使用情況、設(shè)備保養(yǎng)等情況進(jìn)行準(zhǔn)確記錄，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)室工作人員在培訓(xùn)后書面確認(rèn)其已接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)，閱讀并理解了相關(guān)SOP。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對實(shí)驗(yàn)室工作人員進(jìn)行處事能力考核和周期性能力再考核，定期開展內(nèi)部培訓(xùn)。外部培訓(xùn)包括國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心和國家衛(wèi)生計(jì)生委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測培訓(xùn)基地等機(jī)構(gòu)組織開展的各種技術(shù)培訓(xùn)。5檢測體系的性能驗(yàn)證原則上按照《個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的體外診斷試劑包括國家藥品食品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)的試劑盒和國家衛(wèi)生計(jì)生委個(gè)體化醫(yī)學(xué)檢測試點(diǎn)單位通過性能評定、具有嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）的自配試劑（LDT）。所有試劑都需進(jìn)行性能評價(jià)。實(shí)驗(yàn)室所購買的商業(yè)化的儀器應(yīng)根據(jù)說明書進(jìn)行驗(yàn)證。在報(bào)告結(jié)果之前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該證明其性能能夠滿足廠家規(guī)定的準(zhǔn)確度、精密度、線性與可報(bào)告范圍和參考區(qū)間。實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)該為每個(gè)檢測系統(tǒng)建立性能規(guī)范，包括適用性、準(zhǔn)確度、精密度和分析特異性（包括干擾物質(zhì)）、可報(bào)告范圍和其他重要特性，并根據(jù)性能規(guī)范確定系統(tǒng)的校準(zhǔn)和質(zhì)控程序，保持性能特征建立、校準(zhǔn)和質(zhì)控程序相關(guān)活動的記錄。同時(shí)也需對檢驗(yàn)中的耗材進(jìn)行質(zhì)檢。個(gè)體化醫(yī)學(xué)分子檢測包括定性檢測和定量檢測。定性檢測的性能驗(yàn)證指標(biāo)主要包括重復(fù)性/精密度、準(zhǔn)確度（突變型的檢測能力）、分析特異性、檢出限等，可參考美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）的EPl2一A2文件進(jìn)行。定量檢測監(jiān)測體系性能驗(yàn)證的指標(biāo)主要包括準(zhǔn)確度、精密度、線性、可報(bào)告范圍、檢出限、參考區(qū)間、靈敏度、特異性等。準(zhǔn)確度的評價(jià)有兩種方法，一種方法是與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比較，使用待評估的項(xiàng)目對已知標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如定性檢測中用到的陽性參照品）進(jìn)行分析，將檢測結(jié)果與已知標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較；第二種方法是同時(shí)用待評估項(xiàng)目與標(biāo)準(zhǔn)方法（或參考方法）對同一批次樣品進(jìn)行分析，然后將不同方法得到的結(jié)果進(jìn)行對比分析。精密度是指重復(fù)檢測條件下，