病理學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)基本技術(shù)與其應(yīng)用

病理學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)基本技術(shù)與其應(yīng)用分子病理學(xué)基本概念

現(xiàn)代分子生物學(xué)vs傳統(tǒng)病理學(xué)疾病發(fā)生過程中分子事件及其與疾病發(fā)生的關(guān)系揭示根本機制2021/1/52復(fù)習(xí)有關(guān)的分子生物學(xué)概念(1)核酸的結(jié)構(gòu)與功能核酸---多核苷酸。

核酸由核苷酸組成核苷酸由堿基、核糖/脫氧核糖和磷酸構(gòu)成堿基有五種：

A腺嘌呤T胸腺嘧啶U尿嘧啶

G鳥嘌呤C胞嘧啶核苷酸連接方式核酸----DNA（脫氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）2021/1/53DNA和RNA的差別從結(jié)構(gòu)上看DNA：含脫氧核糖及胸腺嘧啶ACGTRNA：含核糖及尿嘧啶ACGU從功能上看DNA：構(gòu)成染色體內(nèi)的基因組、細(xì)胞器基因組，是遺傳信息的貯存和

攜帶者

RNA：包括mRNA(信使RNA),rRNA(核糖體RNA),tRNA(轉(zhuǎn)移RNA)，分別進行轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯的功能2021/1/54DNA結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)

即DNA分子中脫氧核苷酸的排列順序堿基順序就代表了核苷酸順序。又稱為核苷酸序列或堿基序列二級結(jié)構(gòu)

即DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)這種雙螺旋結(jié)構(gòu)的一個重要特征是：在一定條件下，雙鏈可解開，亦可重新形成雙鏈三級結(jié)構(gòu)

DNA超螺旋結(jié)構(gòu)

2021/1/552021/1/56DNA復(fù)制

雙鏈解鏈各自為模板合成新的互補鏈

DNA轉(zhuǎn)錄

以DNA為模板合成RNA過程

DNA翻譯

蛋白質(zhì)合成的同義詞以遺傳密碼破讀的手段轉(zhuǎn)變?yōu)榈鞍踪|(zhì)的氨基酸排列順序2021/1/57如GGC——甘氨酸GTC——頡氨酸遺傳信息貯存于DNA，在核內(nèi)通過轉(zhuǎn)錄成mRNA，在胞漿內(nèi)mRNA作直接模板來指導(dǎo)翻譯(2)基因(gene)基因表達(dá)是指基因的轉(zhuǎn)錄翻譯以及它們的調(diào)控轉(zhuǎn)錄在胞核內(nèi)進行，翻譯在胞漿中進行(3)染色質(zhì)(chromatin)主要成分是DNA和蛋白質(zhì)，細(xì)胞間期,光鏡下呈細(xì)顆粒狀染色體（chromatosome）

主要成分同上，細(xì)胞分裂期，由染色質(zhì)濃集而成，呈桿狀,有恒定數(shù)目2021/1/58

同一物質(zhì)在不同時期的形態(tài)變化

(4)蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)多肽鏈氨基酸排列順序序列改變→構(gòu)型改變→功能改變二級結(jié)構(gòu)局部/某一段肽鏈空間位置三級結(jié)構(gòu)(三維結(jié)構(gòu)）整條肽鏈空間位置四級結(jié)構(gòu)多條肽鏈位置2021/1/59真核生物基因組單復(fù)制順序（singlecopysequence）在整個DNA分子中只出現(xiàn)一次或少數(shù)幾次中等重復(fù)順序

(moderatelyrepetitivesequences)在DNA分子中重復(fù)出現(xiàn)幾十到幾千次高重復(fù)順序(highlytepetitivesequence)在DNA分子中重復(fù)幾百萬次反轉(zhuǎn)重復(fù)順序(invertedrepetitivesequerce)

其特點是一段堿基呈回文結(jié)構(gòu)

回文結(jié)構(gòu)（palindromicstructure）又稱發(fā)夾結(jié)構(gòu)(hairpinstructure)2021/1/510如：5’AAGCTAGCTT3’3’TTCGATCGAA5’其中一條單鏈回折又可形成雙鏈3’TTCGA

∣∣∣∣∣5’AAGCT2021/1/511內(nèi)含子與外顯子內(nèi)含子（intron）或插入順序外顯子（exon）DNA變性定義變性后性質(zhì)變性條件DNA復(fù)性（renaturation）退火2021/1/512影響復(fù)性因素簡單分子快于復(fù)雜分子

小分子快于大分子

DNA濃度高快于濃度低離子強度高（鹽濃度高）快于離子強度低cDNAmRNA的互補拷貝cDNA缺乏該基因的內(nèi)含子，但含有為產(chǎn)生功能蛋白質(zhì)所需的全部編碼信息寡核苷酸2021/1/513一.病理學(xué)研究中常用的分子生物學(xué)基本技術(shù)(一)核酸分子雜交（nucleicacidmolecularhybridisation）技術(shù)

概念具有一定同源性的核酸單鏈一定條件下堿基互補退火形成雙鏈用帶有標(biāo)記的具有特殊堿基序列（已知堿基序列）的一段DNA或RNA單鏈片段來檢測靶核酸（待測核酸）中是否存在與之同源的序列

已知的核酸序列——即探針（probe）

探針標(biāo)記2021/1/5141.固相雜交(solid-phasehybridization)概念

固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳酸顆粒、磁珠和微孔板等基本方法：在此以膜相為例(1)DNA變性：使DNA由雙鏈解鏈成為單鏈。是成功的關(guān)鍵(2)變性DNA在硝酸纖維素膜上的固定(3)預(yù)雜交(4)雜交(5)洗膜(6)結(jié)果顯示2021/1/515A.放射性測定

放射自顯影法液閃記數(shù)法B.非放射性檢測法AP顯色系統(tǒng)，NBT（四氮唑藍(lán)）顯色分類(1)菌落原位雜交（colonyinsituhybridization）菌落轉(zhuǎn)到膜上將濾膜上的菌落裂解以釋出DNA(2)斑點雜交（Dotblot）最簡單有效的膜雜交方法

核酸原液或純化的標(biāo)本直接點到膜上2021/1/516斑點雜交應(yīng)用于DNA斑點雜交RNA斑點雜交對于培養(yǎng)細(xì)胞，不必提取和純化RNA，只需簡單處理(0.5%NonidetP40低滲緩沖液)

完整細(xì)胞斑點雜交NaOH處理，使DNA暴露可用于篩選大量標(biāo)本，但它不適用于非放射性標(biāo)記探針(DNA純度不夠)2021/1/517斑點雜交的特點優(yōu)點

A操作簡便、快速，事先不用限制性內(nèi)切酶消化或凝膠電泳分離核酸樣品B可在同一張膜上進行多個樣品的檢測C可作半定量分析缺點A不能鑒定所測基因的相對分子量B特異性較差，有一定比例的假陽性(3)印跡雜交（blottinghybridization)southern印跡雜交

（southernblottinghybridization）2021/1/5181975年由Southern創(chuàng)建多用限制性內(nèi)切酶將DNA切成片段進行凝膠電泳分離（分開）,凝膠上使DNA變性原位將單鏈DNA片段轉(zhuǎn)移固相支持物上再與相應(yīng)的已標(biāo)記的探針進行雜交反應(yīng)用放射性自顯影或酶反應(yīng)顯色，確定探針互補的每一條DNA帶的位置可用于DNA圖譜分析

基因克隆鑒定（克隆基因的酶切圖譜分析）

基因構(gòu)成研究（基因組的定性及定量分析、基因突變分析及限制性長度多態(tài)性分析（RFLP）等。），2021/1/5192021/1/520northern印跡雜交（Northernblottinghybridization）其被測樣品是RNA方法與southern印跡雜交類似

此法常用于基因表達(dá)的研究，可推算出癌基因的表達(dá)程度(4)原位雜交（insituhybridization）核酸原位雜交（nucleicacidhybridizationinsitu）的簡稱已知堿基順序并帶有標(biāo)記的核酸作為探針與細(xì)胞組織切片中待測的核酸特異性結(jié)合成雜交體應(yīng)用與標(biāo)記物相應(yīng)的檢測系統(tǒng)在被檢測的核酸原位檢測雜交信號2021/1/521首創(chuàng)放射性標(biāo)記(1969)熒光素標(biāo)記(1981)生物素標(biāo)記(1983)

其與菌落原位雜交不同原位雜交可以確定探針的互補序列在細(xì)胞內(nèi)的空間位置2021/1/522用途

檢測特定DNA序列在細(xì)胞核或染色體上的特定位置分布

檢測細(xì)胞內(nèi)RNA在細(xì)胞中和組織中的分布及特定基因表達(dá)水平；檢測細(xì)胞、組織中有無特異性病原菌、病毒

優(yōu)點：A特異性高，可精確定位,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性

B能在成分復(fù)雜的組織中進行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其它成分的影響

2021/1/523C不需要從組織中提取核酸

D可完整的保持組織與細(xì)胞的形態(tài)，準(zhǔn)確反映其與組織細(xì)胞的相互關(guān)系原位雜交與免疫組化方法結(jié)合免疫組化

檢測抗原成分，在翻譯水平上研究基因表達(dá)

原位雜交檢測DNA/RNA，進行基因定位，在基因擴增或在轉(zhuǎn)錄水平上研究基因表達(dá)2021/1/524原位雜交的探針單鏈DNA雙鏈DNARNA探針基本方法(RNA雜交為例)

A.雜交前準(zhǔn)備

固定盡快予以冷凍/固定

培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮組織、石蠟包埋組織均可進行原位雜交通常石蠟包埋信號低于冰凍切片2021/1/525玻片處理增強組織通透性和探針穿透性稀釋的酸去垢劑（detergent）或清洗劑TritonX100某些消化酶

應(yīng)掌握其用量及孵育時間

減低背景染色充分洗滌

預(yù)雜交

雜交后低濃度RNA酶處理防止RNA酶污染

B.雜交2021/1/526C.雜交后處理D.顯示

如AP顯色系統(tǒng)NBT（四氮唑藍(lán)）顯色等有兩種方法:

直接法直接標(biāo)記探針

間接法抗原標(biāo)記探針,雜交后,再用特異性標(biāo)記的抗體反應(yīng),在呈色2021/1/5272021/1/5282021/1/5292021/1/530雙重原位雜交方法

通常有兩種方法

A.用相鄰的連續(xù)切片（3μ），用兩種不同的探針進行原位雜交

適用于較大細(xì)胞的研究2021/1/531優(yōu)點

二者雜交過程和結(jié)果互不干擾

顯示方法和呈色可用同一檢測系統(tǒng)，敏感性相同，可比性強缺點

雜交信號可能因切片較薄而減弱尋找同一細(xì)胞的切面進行分析有一定困難B.用兩種探針在同一標(biāo)本上作原位雜交，兩種不同標(biāo)記探針的雜交陽性信號呈色不同2021/1/532(5)熒光原位雜交（fluorescenceinsituhybridization,FISH）技術(shù)基本原理生物素、地高辛或熒光素標(biāo)記特異的DNA探針對外周血、腫瘤細(xì)胞或癌前組織的離散培養(yǎng)細(xì)胞的染色體鋪片或切片（包括石蠟切片）DNA-DNA原位雜交熒光素標(biāo)記抗探針標(biāo)記物的抗體其雜交定位信號用熒光法顯示。2021/1/533可用多種熒光素的不同顏色顯示多個染色體的結(jié)構(gòu)或DNA。如FITC

(fluorescienisothiocy-anate,異硫氰酸熒光素)——呈黃綠色

Texas紅——呈紅色特點

操作簡易，快捷,探針標(biāo)記后穩(wěn)定方法敏感在同一標(biāo)本上可以同時檢測幾個不同的基因不僅可以在染色體分裂相上觀察結(jié)果，而且可以應(yīng)用于培養(yǎng)的間期細(xì)胞，組織的石蠟切片、冰凍切片2021/1/5342021/1/535應(yīng)用

臨床應(yīng)用

應(yīng)用非常廣泛研究應(yīng)用

腫瘤中染色體異常基因圖譜繪制確定基因在染色體上的順序(6)其它雜交方法

A.差異雜交（differentialhybridization）B.cDNA微點陣雜交（cDNAmicroarrayhybridization）C.

寡核苷酸微點陣雜交

（oligonucleotidemicroarrayhybridization）

2021/1/5362.液相雜交

（solutionhybridization）所參加反應(yīng)的兩條核酸鏈都游離在溶液中(1)吸附雜交方法HAP（羥基磷灰石）吸附雜交方法(DNA:DNA)親和吸附雜交方法(DNA:RNA)生物素標(biāo)記DNA探針?；H和素包被固相支持物用特異性抗DNA-RNA雜交物的酶標(biāo)單克隆抗體與固相支持物上的雜交物反應(yīng)酶顯色2021/1/537磁珠吸附雜交方法吖啶翁酯（acridiniumester）標(biāo)記探針吸附在磁化的有孔小珠(2)發(fā)光液相方法能量傳遞法兩個緊接的探針，一個探針的一端用化學(xué)發(fā)光基團（供體）標(biāo)記，另一個探針的一端用熒光物質(zhì)標(biāo)記，并且這兩個探針靠得很近。由于只有在兩個探針分子靠得很近時，才能產(chǎn)生發(fā)光具有較好的特異性2021/1/538

吖啶翁酯標(biāo)記法檢測雜交探針的化學(xué)發(fā)光此法敏感度低僅適用于檢測擴增的靶序列(3)液相夾心雜交方法親和雜交方法兩個探針與靶核酸雜交，形成夾心結(jié)構(gòu)。雜交物上的吸附探針可結(jié)合到固相支持物上雜交物上的檢測探針可產(chǎn)生檢測信號一般用生物素標(biāo)記吸附探針，用125I標(biāo)記檢測探針該試驗保持了固相雜交的高度特異性2021/1/5392021/1/540(二)聚合酶鏈反應(yīng)及其相關(guān)技術(shù)1.聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction,PCR）技術(shù)又稱體外基因擴增利用DNA變性和復(fù)性原理在體外進行特定的DNA片段高效擴增的技術(shù)獲得或放大特異基因信號的重要手段基本原理

在模板DNA（待測DNA）引物（模板兩端的已知序列）四種脫氧核苷酸(dNTP)DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng)2021/1/541擴增的特異性取決于引物與模板DNA整個步驟分三步變性加熱模板DNA成兩條單鏈退火降溫模板DNA與引物互補結(jié)合延伸DNA聚合酶及鎂離子形成與模板鏈互補的新DNA鏈三步為一個循環(huán)DNA量增加1倍25-30個循環(huán)DNA可增加106-109倍

2021/1/5422021/1/543PCR反應(yīng)體系組分包括引物DNA聚合酶PCR反應(yīng)緩沖液dNTPs（四種核苷酸）實際操作中,分別有不同的要求和注意事項反應(yīng)條件應(yīng)不斷優(yōu)化如變性復(fù)性延伸溫度及時間循環(huán)參數(shù)鎂離子濃度平臺效應(yīng)防止污染等2021/1/544

PCR模板（待測DNA）細(xì)菌全血標(biāo)本或白細(xì)胞新鮮組織石蠟包埋組織

但各自的制備方法各異

PCR擴增產(chǎn)物的檢測分析

凝膠電泳分析瓊脂糖凝膠電泳(最常用)聚丙烯酰胺凝膠電泳單一條帶點雜交方法將產(chǎn)物直接點到膜上2021/1/5452021/1/5462021/1/5472.PCR相關(guān)技術(shù)(1)定量PCR最常用的為競爭性PCR

(2)逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)

用來擴增RNA的方法

由mRNA逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription,RT）反應(yīng)產(chǎn)生的cDNA第一條鏈作PCR的模板

2021/1/548(3)競爭逆轉(zhuǎn)錄PCR(competitivereversttranscription-polymerasechainreaction,c-RT-PCR)(4)多重PCR(multiplexPCR)

(5)反向PCR(inversePCR)對已知DNA片段兩側(cè)未知序列進行擴增(6)不對稱PCR

(7)錨定PCR

(8)著色互補試驗或熒光PCR(9)雙溫PCR(two-temperaturePCR)2021/1/549(10)原位PCR（insituPCR,ISPCR）技術(shù)90年Hasse首次創(chuàng)建概念在細(xì)胞(爬片,甩片,涂片)組織切片(冰凍/石蠟)直接對核酸進行擴增，通過摻入標(biāo)記基團直接顯色或結(jié)合原位雜交進行檢測的方法

2021/1/550既能在組織原位檢測單復(fù)制的特定DNA/RNA又能使擴增的特定的DNA/RNA片段在組織切片中定位特點1.PCR特異性高敏感性,又有原位雜交樣的定位準(zhǔn)確性2.能檢測低于2個拷貝量的細(xì)胞內(nèi)特定的DNA序列2021/1/5513.有助于細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列定位與其形態(tài)學(xué)變化的結(jié)合分析基本方法

A.細(xì)胞或組織切片上滴加PCR反應(yīng)液B.把載玻片放入熱循環(huán)儀（原位PCR儀）中進行擴增C.進行原位擴增產(chǎn)物檢測

2021/1/5522021/1/553分類A.直接法原位PCR(directinsituPCR)

基本原理對三磷酸核苷酸或引物進行標(biāo)記使擴增產(chǎn)物直接攜帶標(biāo)記分子據(jù)標(biāo)記物性質(zhì)進行產(chǎn)物的檢測

標(biāo)記物

最常用的有三種

放射性同位素生物素地高辛2021/1/554特點

操作簡便特異性較差易出現(xiàn)假陽性擴增效率低應(yīng)用注意事項

a.不能用于切片標(biāo)本b.不適用于研究內(nèi)源性基因重排和染色體易位

B．間接原位PCR(indirectinsitu,PCR)基本原理同常規(guī)PCR,不帶任何標(biāo)記物再利用原位雜交方法加以檢測2021/1/555

主要步驟

標(biāo)本固定保持原有組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)

滲入使引物核苷酸和酶等反應(yīng)液進入細(xì)胞內(nèi)(如用酶進行消化)

原位擴增通過原位PCR技術(shù)（原位PCR儀）增加靶核酸序列的數(shù)量，以達(dá)到可檢測的水平

原位雜交檢測用特異性探針檢測產(chǎn)物特點

步驟雖然較多，但擴增效率高，特異性較直接法強

2021/1/556在原位PCR中常用的原位雜交標(biāo)記物

非同位素標(biāo)記物如生物素地高辛等C．原位反轉(zhuǎn)錄PCR

(insitureversetranscription,PCR)又稱為insituRT-PCR結(jié)合反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（以mRNA為模板合成cDNA）和PCR擴增檢測細(xì)胞內(nèi)低復(fù)制mRNA的方法

2021/1/557基本原理

它由mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)生cDNA鏈（即在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，以mRNA為模板合成cDNA）

再以cDNA為模板，用PCR對靶序列進行擴增擴增結(jié)束后，再用特異性的探針進行原位雜交

整個反應(yīng)過程均在固定的組織或細(xì)胞標(biāo)本上進行

標(biāo)本要用DNA酶處理2021/1/558

原位PCR的應(yīng)用

1)檢測內(nèi)源性基因

固有基因的檢測異?；蜃儺惢?/p>

2)外源性基因的檢測

感染基因病毒基因細(xì)菌基因

導(dǎo)入基因原位PCR應(yīng)用中存在的問題及對策

敏感性特異性2021/1/559產(chǎn)生假陽性原因(直接法)錯配核苷酸錯誤摻入受損DNA修復(fù);擴增產(chǎn)物彌散對策熱啟動減少彌散復(fù)雜性定量分析目前還停留在相對定量或半定量水平(11)免疫聚合酶鏈反應(yīng)（immunopolymerasechainreaction,immuno-PCR,簡稱免疫PCR）技術(shù)由Sano等于1992年首建2021/1/560基本原理單克隆抗體進行生物素化核苷酸（DNA）也生物素化用親和素或鏈霉親和素將兩者連接構(gòu)成具有雙功能的嵌合分子2021/1/561單抗--生物素--中介分子--生物素--DNA

(親和素)與抗原結(jié)合PCR擴增抗體端可以與抗原結(jié)合，特異性地捕獲待測抗原，以保證檢測結(jié)果的特異性，核酸（DNA）端則可用引物對其進行擴增，通過對擴增產(chǎn)物的檢測，間接證明抗原的存在。產(chǎn)物可用瓊脂糖電泳檢測采用不同大小標(biāo)準(zhǔn)的DNA進行標(biāo)記，進行電泳檢測，則可同時檢出不同的抗原分子。2021/1/562(12)原位免疫PCR（insituimmuno-PCR,IS-PCR）技術(shù)

基本原理中介分子同時與DNA和抗體分子特異結(jié)合其一端連接DNA（DNA作為標(biāo)記物）另一端連接抗原-抗體復(fù)合物形成一個抗原-抗體-DNA連接物作為標(biāo)記物的DNA分子用原位PCR擴增，檢測特異的PCR產(chǎn)物，即可間接地證明抗原的存在

中介分子鏈酶親和素（SA）-蛋白A嵌合體2021/1/563(三)用引物介導(dǎo)的原位標(biāo)記（primedinsitulabelling,PRINS）技術(shù)用于細(xì)胞或染色體原位檢測特異性DNA/RNA基本原理PCR和FISH技術(shù)的結(jié)合

dUTP（用熒光素如FITC標(biāo)記）和dATPdCTP,dGTP摻入延伸的DNA中，使新合成的DNA帶有熒光素,用熒光顯微鏡檢測地高辛標(biāo)記再用免疫細(xì)胞化學(xué)顯色普通光學(xué)顯微鏡檢測2021/1/564特點及應(yīng)用前景

1.快速，簡便也適用于組織切片2.敏感性和特異性較高.3.具有很高的快速性4.地高辛標(biāo)記，適用于普通顯微鏡觀察，避免了標(biāo)本熒光素標(biāo)記褪色快的缺點5.不需使用DNA或cDNA探針，只需要特異性引物序列，合成簡便2021/1/565(四)

基因重組技術(shù)基因重組是基因克隆的關(guān)鍵技術(shù)。其基本內(nèi)容包括分離純化或人工合成DNA制備DNA重組體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞篩選表達(dá)重組DNA的宿主細(xì)胞使其擴增鑒定目的基因的正確連接及表達(dá)主要目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝2021/1/566目的基因的獲得通常所需要的目的基因都是一些已有相關(guān)基礎(chǔ)研究的基因

常用方法

1.PCR擴增目的基因2.從基因組文庫或cDNA文庫中獲得目的基因3.人工合成目的基因2021/1/567DNA體外重組載體常用的有

質(zhì)粒載體最常用的是pBR322

噬菌體（phage）載體最常用的為λDNA及其衍生物重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞重組體克隆的篩選與鑒定酶切、電泳、雜交等方法2021/1/568(五)

基因轉(zhuǎn)染（genetransfection）技術(shù)將純化的含有靶基因的質(zhì)粒DNA送入細(xì)胞內(nèi)，并在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的技術(shù)方法有磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染法DEAE葡聚糖介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染法電擊基因轉(zhuǎn)染法2021/1/569二.腫瘤研究中常用的分子生物學(xué)技術(shù)

(一)基因擴增的檢測1.原位雜交（ISH）2.熒光原位雜交（FISH）3.Southernblot(DNA雜交)4.Northernblot(RNA雜交)5.原位PCR6.RT_PCR2021/1/570(二)基因突變的檢測突變的幾種形式點突變基因特定位置發(fā)生一個核苷酸的改變基因缺失基因易位或重排其他：插入甲基化染色體非組蛋白改變等2021/1/571突變的檢測方法1.聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（Singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP）

長度相同，但堿基序列不同的單鏈DNA構(gòu)象不同,在非變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳時，遷移率（泳動率）不同基本方法

作PCR將產(chǎn)物變性而成為單鏈進行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳