花生抗旱品種鑒定技術規(guī)程

1花生抗旱品種鑒定技術規(guī)程本文件規(guī)定了花生抗旱品種的鑒定方法、評價指標和分級標準。本文件適用于花生抗旱性評價及抗旱品種鑒定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.4農作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB4407.2經濟作物種子第2部分：油料類3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4樣品準備選取籽粒飽滿、大小一致的種子樣品300粒，充分混合均勻，用1%的次氯酸鈉溶液浸泡消毒10min，自來水沖洗3次，蒸餾水沖洗3次。種子質量應符合GB4407.2的規(guī)定。5幼苗培養(yǎng)將待測種子樣品在25℃條件下浸種12h，均勻擺放至鋪有雙層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，置于人工氣候箱內，進行紙間（BP）發(fā)芽試驗，按照GB/T3543.4規(guī)定執(zhí)行。選取塑料盆缽20盆，裝等量蛭石后，每盆均勻播種5粒，置于人工氣候箱內培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度28℃/23℃（晝/夜）、光周期16h/8h（晝/夜）、光照強度400μmol·m-2·s-1～600μmol·m-2·s-1、相對濕度60%～70%。6試驗設計采取PEG6000模擬干旱的方式。盆栽樣品幼苗生長至4葉期時，分成對照組和干旱處理組，每組10盆，每盆保留3株。將幼苗從塑料盆缽中完整取出，用蒸餾水沖洗根部，吸干表面水分。對照組幼苗根系于蒸餾水中浸泡24h，干旱處理組幼苗根系于20%的PEG6000溶液中浸泡24h，其他培養(yǎng)條件同本文件5的規(guī)定。設3次重復。7指標測定27.1相對植株鮮重培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，用蒸餾水沖洗根部，用吸水紙吸干表面水分，用電子天平稱量植株鮮重（g）,按照公式（1）計算相對植株鮮重。7.2葉片相對含水量培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，剪取倒數第四片復葉，稱量葉片鮮重（g然后，將葉片完全浸泡在蒸餾水中至恒重，稱量葉片飽水重（g最后，將葉片放入烘箱80℃烘干至恒重，稱量葉片干重（g）。按照公式（2）計算葉片相對含水量。7.3比葉重采用打孔稱重法測定。培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，剪取倒數第四片復葉，用直徑為0.5cm的打孔器，避開主葉脈，打20個小圓片，并稱量鮮重（g）。按照公式（3）計算葉片比葉重。7.4離體葉片失水速率培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，剪取第四片復葉，稱量葉片鮮重（g然后,于室內避光自然風干,2h后稱量葉片風干重（g）；最后，于烘箱中80℃烘干至恒重，稱量葉片干重（g）。按照公式（4）計算離體葉片失水速率。式中：RWL—離體葉片失水速率；FWI—葉片鮮重；FW2—葉片風干重；DW—葉片干重。7.5傷害度培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，剪取倒數第四片復葉，用直徑為0.5cm的打孔器，避開主葉脈，打20個小圓片，于5mL蒸餾水中浸泡5h后，用電導儀測定初始電導值；然后沸水浴15min，冷卻至室溫后，測定終電導值。按照公式（5）和公式（6）計算傷害度。式中：L—相對電導率（%K1—初始電導值；K2—終電導值。3式中：I—傷害度（%）；Lt—干旱處理組的相對電導率（%Lck—對照組的相對電導率（%）。7.6游離脯氨酸含量7.6.1標準曲線繪制用分析天平精確稱取25.0mg脯氨酸，倒入小燒杯中，用少量蒸餾水溶解，然后倒入250mL容量瓶，加蒸餾水定容至刻度，作為標準溶液（脯氨酸含量為100μg/mL）；取6個50mL容量瓶，分別裝入脯氨酸標準溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL和3.0mL，用蒸餾水定容至刻度并搖勻，脯氨酸濃度分別為1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL和6μg/mL。取6支具塞試管，分別吸取2mL各濃度的脯氨酸標準溶液，再加入2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加熱30min。室溫冷卻后，各試管加入4mL甲苯，震蕩30s，靜置片刻，至色素全部轉移到甲苯層，用移液器將各管上層脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液為空白對照，于520nm波長處比色。根據吸光值和脯氨酸濃度擬合回歸方程，并繪制標準曲線，計算測定液中脯氨酸的含量(μg/mL）。7.6.2游離脯氨酸測定培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，剪取第四片復葉，稱取0.5g并剪碎，置于試管中。然后向試管中加入5mL3%的磺基水楊酸溶液，加塞在沸水浴中提取10min（提取過程中要經常搖動）。室溫冷卻后，吸取2mL提取液至另一具塞試管中，加入2mL冰醋酸和2mL酸性茚三酮溶液，在沸水浴中加熱30min。再次室溫冷卻后，加入4mL甲苯，震蕩30s，靜置片刻，萃取紅色甲苯層。用移液器將上層脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液為空白對照，測定520nm波長的吸光值。根據回歸方程計算測定液中脯氨酸的含量(μg/mL），根據公式（7）計算樣品中游離脯氨酸含量的百分數。式中：X—測定液中脯氨酸的含量。7.7萎蔫指數培養(yǎng)24h后，選取對照組和干旱處理組長勢一致的幼苗各5株，采用目測法評定萎蔫指數等級，并用數碼相機拍攝花生植株狀態(tài)，即：0級，花生葉片自然伸展，葉色鮮亮且有光澤，莖稈堅挺；1級，葉片開始出現(xiàn)失水反應，葉色無光澤，頂一葉、二葉略微下垂；2級，植株繼續(xù)失水，葉片皺縮下垂幅度增大；3級，部分葉片干硬、卷曲；4級，所有葉片均下垂、皺縮，葉片變黃；5級，葉片完全失水干硬，植株死亡。若萎蔫程度介于兩級之間，則為半級。8抗旱性綜合評價8.1評價方法4根據測定的相對植株鮮重、葉片相對含水量、比葉重、離體葉片失水速率、傷害度、游離脯氨酸含量和萎蔫指數，利用隸屬函數法進行綜合性分析。按照公式（8）、公式（9）和公式（10）計算抗旱性綜合評價隸屬函數。μij=(xij?xjmin)/(xjmax?xjmin)（與抗旱性呈正相關的性狀） μij=1?(xij?xjmin)/(xjmax?xjmin)（與抗旱性呈負相關的性狀） 式中：μij—第i個品種第j個指標的隸屬