第二章 熱滅活微生態(tài)制劑課件

第二章熱滅活乳酸菌微生態(tài)制劑

——全新的益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑主要內(nèi)容一、傳統(tǒng)益生素概念二、熱滅活的乳酸菌三、國外產(chǎn)品臨床試驗結(jié)果四、我們的研究五、下一步研究第二章+熱滅活微生態(tài)制劑1、益生菌和益生素(Probiotic)益生菌是指能夠在人或動物體內(nèi)存活，對宿主的生命健康有益的一類微生物。它是人或動物胃腸道共生微生物的培養(yǎng)物或其發(fā)酵產(chǎn)品，故又稱活菌制劑或微生態(tài)制劑。由活體微生物及其代謝產(chǎn)物制成的有益微生物活性制劑稱作益生素。（袁鐵錚和姚斌，2004，中國生物工程雜志）一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑乳桿菌(Lactobacillusplantarum/acidophilus)一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑糞鏈球菌(Streptococcusfaecalis)附著在小腸表面一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑酵母菌(Yeast)啤酒酵母Saccharomycescerevisiae一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑酵母菌(yeast)假絲酵母Candidaalbicans一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑益生素的作用機(jī)理-2前因：益生菌進(jìn)入畜禽腸道后，在復(fù)雜的微生態(tài)環(huán)境中與近400種正常菌會合，顯現(xiàn)出棲生、偏生、共生、競爭或吞噬等復(fù)雜關(guān)系，從而對宿主產(chǎn)生營養(yǎng)、免疫、刺激生長及生物拮抗等生物作用，以保持胃腸道微生態(tài)環(huán)境的平衡，提高動物生長性能，防病治病，最終取得良好的保健效果或經(jīng)濟(jì)效益。益生素的飼喂作用機(jī)理概括起來有三大方面，即保健、促生長和防治疾病。一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑益生素作用機(jī)理-3保健：作用機(jī)制理論基礎(chǔ)是微生態(tài)平衡論、失調(diào)論。從微生態(tài)學(xué)角度講，人或畜禽腸胃道疾病是由于體內(nèi)菌群平衡失調(diào)所引起，使用益生素后體內(nèi)有益菌群逐漸增加，并消耗氧氣而造成厭氧環(huán)境，從而抑制致病性需氧菌生長。有益菌產(chǎn)生的有機(jī)酸降低pH值，產(chǎn)生溶菌酶、過氧化氫等物質(zhì)抑制有害菌及毒素的產(chǎn)生，恢復(fù)或維持正常菌群原有的平衡狀態(tài)，達(dá)到保健的目的。一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑促進(jìn)生長：其作用機(jī)制理論基礎(chǔ)是微生物營養(yǎng)論。即產(chǎn)生多種消化酶，提高飼料轉(zhuǎn)化率和促進(jìn)腸內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收；降低大腸菌群數(shù)，減少營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)耗。產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物可以抑制腸內(nèi)胺和氨的產(chǎn)生；產(chǎn)生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等消化酶，有利于物質(zhì)的分解；合成B族維生素，氨基酸、未明促生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)。

一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑防治疾?。?/p>

競爭性排斥作用（competitiveexclusion,CE）;

免疫刺激作用；以IgA為主。

減少胺或氨的產(chǎn)生；

減少致癌致變物質(zhì)的產(chǎn)生；

代謝產(chǎn)物對致病菌的直接殺滅作用。一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑4、存在的缺點和問題1、受環(huán)境條件(溫度、水分、酸堿度等)的影響，其活菌制劑在生產(chǎn)、運輸中易失活，從而降低使用效果；2、飼料加工的高溫過程使大量的活菌致死，導(dǎo)致有效成份損失；3、飼料中添加的或在治療過程使用的抗生素和化學(xué)合成抗菌劑，對益生菌同樣具有殺滅或抑制作用；4、進(jìn)入消化道后不能有效抵抗鹽酸、膽鹽，來不及到達(dá)腸道或無法長時間定植腸道發(fā)揮其功效；二度感染的可能。5、對動物腸道疾病的治療效果仍不盡人意。一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑4、克服缺點的技術(shù)與方法1、選育優(yōu)良菌種或利用芽孢。耐高溫、耐酸、耐膽鹽或耐氧等。甚至有的公司在宣傳其具有耐藥性的乳酸菌。2、將活菌制成微膠囊。保護(hù)作用，隔離高溫、氧氣和胃酸。很有效，但成本高。3、飼料高溫加工后再噴涂。避免高溫失活。一：傳統(tǒng)益生素概念第二章+熱滅活微生態(tài)制劑二、熱滅活的乳酸菌制劑概念：有人嘗試將乳酸菌培養(yǎng)好之后，將細(xì)胞熱滅活(heat-killed)后，仍保持細(xì)胞的完整性（或碎片）作為益生素使用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)同樣具有活菌的效果。后來我們將乳酸菌發(fā)酵代謝產(chǎn)物也加入其中，預(yù)防和治療人和動物腹瀉效果更加理想。第二章+熱滅活微生態(tài)制劑1、發(fā)展歷史法國LaboratoireduLactéol公司是這方面的先驅(qū)。醫(yī)學(xué)博士皮埃爾、布卡德(PierreBoucard)先生于一九零七年創(chuàng)建。并率先研究和開發(fā)出熱滅活的乳酸菌細(xì)胞制成的微生態(tài)制劑。用于預(yù)防及治療人或畜禽的腹瀉，包括抗生素相關(guān)性、細(xì)菌性和病毒性腹瀉。目前作為人或動物用藥在全球取得了空前成功。1998年我們首次在國內(nèi)做了介紹與報道，并于當(dāng)年展開研究。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑2、熱滅活乳酸菌制劑的優(yōu)點1、收集純細(xì)胞，可制成高濃度制劑，如100-1000億/克甚至更高；2、滅活的細(xì)胞不再擔(dān)心環(huán)境條件的影響；3、不再擔(dān)心二度感染；4、同微膠囊比，生產(chǎn)成本大大降低。5、同抗生素一起使用有協(xié)同作用；6、不用選育耐高溫、耐抗生素菌種。7、避免了噬菌體的爆發(fā)。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑3、作用特點1、細(xì)胞濃度高，見效快；2、耐高溫、耐抗生素、耐胃酸和膽鹽，效果穩(wěn)定。3、粘附到腸細(xì)胞皮面，競爭性排斥有害菌；4、選擇性抑殺有害菌，而對乳酸菌沒有作用?？勺鳛橹委熕幬?；5、細(xì)胞壁多糖的免疫刺激作用；6、吸附生物毒素，如黃曲霉毒素；7、預(yù)防與治療的作用。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑4、作用機(jī)理（競爭性排斥）滅活的乳酸菌細(xì)胞粘附到腸細(xì)胞表面形成具保護(hù)作用的生物膜，競爭性排斥有害菌的粘附與侵入。German和Fourniat研究證實熱滅活的LB菌株粘附于HeLa細(xì)胞，并對E.coliB41的粘附有阻礙作用二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑AdhesionofStrainLBontoHeLacells

inducingagainsttheadhesionofE.coliB41二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑AdhesionoftheHeat-killedLBStraintotheBrushBorderofIntestinalEpitheliaCells二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑競爭排斥的原理二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑4、作用機(jī)理（抑菌活性）產(chǎn)生的乳酸、類細(xì)菌素、類抗生素等物質(zhì)對胃腸道致病菌有抑殺作用。而對產(chǎn)酸菌沒有抑殺作用。German等（1980）發(fā)現(xiàn)，有熱滅活的LB存在時，68%的外源菌（沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌）和64%腸道致病菌的生長被延遲了10小時。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑5、作用機(jī)理(刺激產(chǎn)酸菌生長)發(fā)酵過程中產(chǎn)生的大量B族維生素（B2）能作為刺激產(chǎn)酸菌，如乳酸菌生長的生長因子（growthfactor）。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑4、作用機(jī)理（免疫刺激作用）給受試動物以滅活的LB菌刺激，使IgA局部水平顯著提高。Lysates由多種細(xì)菌與真菌組成。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑5、滅活菌益生素菌種要求國家有關(guān)部門批準(zhǔn)使用的菌種；對人或動物腸道有很強(qiáng)的粘附能力；代謝產(chǎn)物對致病菌有抑殺作用；能產(chǎn)生生長因子，促進(jìn)產(chǎn)酸菌的生長。對環(huán)境條件有耐受性。二：熱滅活的乳酸菌第二章+熱滅活微生態(tài)制劑三、國外產(chǎn)品臨床試驗

——1、人類臨床試驗1992-1994年對腸易激綜合征的六項癥狀指標(biāo)（腹痛、腹脹、排便次數(shù)、糞便稀軟、便中帶粘液及排便不完全）以滅活的LB菌處理，達(dá)到50%的有效治愈率。對30例慢性腹瀉進(jìn)行治療，29例有不同程度的改善，達(dá)96.6%。特別是對I類慢性肝源性腹瀉效果尤佳。（趙洪濤，1994）第二章+熱滅活微生態(tài)制劑對嬰幼兒輪狀病毒性腸炎的治療效果顯著。治療組有效率達(dá)91.7%，補充電解質(zhì)和水份組為63.3%，差異顯著(P<0.01)。(孫先軍，1996）。治療使用抗生素后引起的小兒腹瀉。治療組治愈率達(dá)73%；對照組為20%。差異顯著（P<0.01)三：國外產(chǎn)品臨床試驗第二章+熱滅活微生態(tài)制劑2、動物臨床試驗試驗設(shè)計（法國）260只3周齡小豬分成4組，37天試驗飼料抗生素LB添加量L1加入25萬個/克飼料L2加入50萬個/克L4不加250萬個/克C加入0三：國外產(chǎn)品臨床試驗第二章+熱滅活微生態(tài)制劑平均日增重/飼料報酬22%16%三：國外產(chǎn)品臨床試驗第二章+熱滅活微生態(tài)制劑四、我們的研究乳桿菌的分離純化與鑒定1、從動物糞便中分離出多株乳酸菌；2、耐酸、耐膽鹽試驗；可耐受0.6%膽鹽，pH值低至2.0。3、生長快、產(chǎn)酸量大。4、發(fā)酵產(chǎn)物對沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有抑制作用。（可能是類抗生素）第二章+熱滅活微生態(tài)制劑對腸道致病菌的抑制作用大腸桿菌O78雞沙門氏菌發(fā)酵液及細(xì)胞煮沸10min煮沸30min第二章+熱滅活微生態(tài)制劑乳桿菌及其發(fā)酵液處理大腸桿菌大腸桿菌O-78先培養(yǎng)24小時，之后與乳桿菌發(fā)酵液同培養(yǎng)24小時。大腸桿菌全部被滅活。四：我們的研究第二章+熱滅活微生態(tài)制劑熱滅活乳桿菌對竹絲肉雞免疫性能的影響在基礎(chǔ)日糧中添加熱滅活乳桿菌制劑，研究其對竹絲肉雞免疫性能的影響。結(jié)果表明熱滅活乳桿菌制劑能明顯地促進(jìn)竹絲肉雞法氏囊的生長發(fā)育和機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。在28日齡時，0.15‰添加組法氏囊指數(shù)比對照組高36.1%，差異顯著(P<0.05)；T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率0.10‰與0.15‰添加組比對照組分別高