DB22T 1589-2012 高粱品種鑒定 DNA 指紋法(SSR)　　

備案號：35077-2012DB22DB22/T1589—2012高粱品種鑒定DNA指紋法（SSR）Identificationofsorghum(Sorghumbicolor(L.)Moench)varietiesusingDNAfingerprintingmethod(SSR)吉林省質(zhì)量技術監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢2）：5.1.25親和硅烷（bindingsil3至每種核苷三磷酸終濃度為10mmol40.25g過硫酸銨溶于1mL超純水中，混勻。5引物在DNA分析儀上使用時，須在正向引物5′端加應按本標準方法，確定其大小和對應參照品種。參照品種的名9.1.1樣品材料可為種子、幼苗、植株幼嫩葉片等組織或器官。對d)通風櫥下加入700μL的氯仿:異戊醇（24:1），輕輕倒轉(zhuǎn)搖動5min～10min；），輕混勻。-20℃冰箱靜置一段時間后，至DNA凝集，室溫下鉤出DNA；6ng～40ng，其余以超純水補足至所需體積。如果PCR過程中不采用熱蓋程序，則反應液上加蓋15μL礦），到下部，在上部輕輕插入梳子，使其凝聚至少1h以上。灌膠過程中防止出現(xiàn)氣泡。拔出梳子。80W恒功率預電泳30min～40min。7用移液器吹吸加樣槽，清除殘膠和氣泡，插入樣品梳子，每一個加c)染色：在新配染色液中，輕輕搖蕩20min；使用DNA分析儀的片段分析軟件，讀出每個位點每個樣品的等位變異片段大小數(shù)據(jù)。通過使用參照品種，消除同型號不同批次間或不同型號DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差。比較參照品種的等位將每個核心引物位點的所有譜帶按擴增片段從小到大的順序編號，用二位代碼描述（依次為01、02……），對照參照品種的譜帶確定待測樣品的基因型。純合位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X，其中X為該位點譜帶的代碼；雜合位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/Y，其中X、Y為該位點上兩個不同的譜帶。8純合位點的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X，其中X為該位點等位變異的大??；雜合位點的等位變異數(shù)據(jù)215bp，則該品種在該引物位點上的等位變異數(shù)據(jù)記測品種在這些引物位點的等位變異數(shù)據(jù)，利用這對待測品種進行檢測后利用其檢測數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫中品種的數(shù)據(jù)進行比對時，先用附錄A.1中20對基對品種間差異位點數(shù)=0、1的情況，將這些相近品種或疑同品種與待測品種按照11.1.2的方法進行9123456789123456789GAAATTACAATGCTACCCCTACTCTACTCCTTCCGTCCAGCAAGCGAGCTGACTTATGTACAAAGTGCTACTAAACCTATGCA引物相關信息1323324257677585