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備案號：56305-2017DB22DB22/T2692—2017飼料中金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌檢測雙重微滴數(shù)字PCR法DeterminationofStaphylococcusaureusandBacilluscereusinfeeds-DuplexdropletdigitalPCRmethod吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1警示——使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中金黃色葡萄球菌和蠟樣芽孢桿菌檢測雙重微滴數(shù)字PCR法的試劑和材料、GB4789.10-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢GB/T26427-2010飼料中蠟WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）微滴式數(shù)字PCR平臺(tái)通過產(chǎn)生微小油包水體系實(shí)現(xiàn)反應(yīng)體系的分割，根據(jù)金黃色葡萄球菌的nuc24.6裂解液，成分包括：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基EDTA(ethylenediaminetetraac4.13金黃色葡萄球菌nuc基因引物和探針nuc上游引物：5’-GGTTTTTCTTTTTCGCTACTAGTTG-3’nuc下游引物：5’-TGGATCTTCAGAACCACTTCTATTT-3’nuc探針：5’-（FAM）-CAGCAAATGCATCACAAACAGATAACGGC-（BHQ1）-3’16s上游引物：5’-CCTTATGACCTGGGCTACAC-3’16s下游引物：5’-AACGGTTTTATGAGATTAGCTCC-3’16s探針：5’-（HEX）-TGCAGCTCTTTGTACCGTCCATTGT-（ECLIPSE）-3’3nm和280nm處的吸收值，從而確定DNA濃度最優(yōu)濃度上游引物（10μmol/L）nuc下游引物(10μmol/L）nuc探針(10μmol/L）nucDNA模板(1ng/μL～100n41根據(jù)數(shù)字PCR體系中陰性分割體系的終點(diǎn)熒光值設(shè)定熒光的閾值限。閾值限需要對空白和陽性擴(kuò)增48.2.1陽性對照為金黃色葡萄球菌和蠟樣芽胞桿菌陽性基因有明顯擴(kuò)增，擴(kuò)增8.3.1樣品金黃色葡萄球菌和蠟樣芽胞桿菌基因均未得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終點(diǎn)熒光8.3.2樣品金黃色葡萄球菌和蠟樣芽胞桿菌基因僅有一種得到擴(kuò)增，擴(kuò)增終點(diǎn)8.3.3樣品
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