DB32T 2792-2015 南粳9108原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程　

備案號：47706-2015DB32BasicSeedProducingTechnologyofRiceVarietyNanjing9108江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周麗慧、陳濤、趙慶勇、姚姝、趙春芳、趙凌、朱鎮(zhèn)、張亞東、王才1南粳9108原種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適2選擇標(biāo)準(zhǔn)和決選標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合DB32/T2791—2015水稻品種南粳9108的規(guī)定。株行選擇標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合DB32/T27913儲藏和檢驗按GB/T3543.1～7-1995進行，符合GB4404.1-2008之規(guī)定的原種種子4(資料性附錄)南粳9108暗胚乳突變基因和香米基因的分子檢測方法南粳9108是含有暗胚乳突變基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品種，可針對這兩個基因進行分子標(biāo)記檢A.1.1四引物PCR分子標(biāo)記序列稻谷出苗后在三葉期按單株提取基因組DNA,利用四引物PCR標(biāo)記進行分子檢測。正向外引物(Wx-mq-O-F)序列為5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3',反向外引物(Wx-mg-O-R)序列為5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3',正向內(nèi)引物(Wx-mq-I-F)序列為5'-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3',反向內(nèi)引物(Wx-mq-I-R)序列為5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。A.2PCR反應(yīng)體系。20μLPCR反應(yīng)體系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,PrA.1.3產(chǎn)物分析反應(yīng)產(chǎn)物在質(zhì)量比濃度為1.5%的瓊脂糖凝膠上電泳，經(jīng)溴化乙錠染色并于凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。利用Wx-mq基因四引物分子標(biāo)記擴增水稻品種的基因組DNA,南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷能同時擴增出439bp和292bp的DNA條帶，而非南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷則同時擴增出439bp和200bp或同時存在439bp、292bp和200bp的DNA條帶?！?39bp (M:分子量標(biāo)準(zhǔn)；1、2、5、7、8、9、10為南粳91020μLPCR反應(yīng)體系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4MgCl?)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL,Taq酶(5U/μL)05ResearchPTC-200熱循環(huán)儀上進行，反應(yīng)程序如下：94℃下預(yù)變性5min,每個循環(huán)94℃下變性30A.2.3產(chǎn)物分析反應(yīng)產(chǎn)物在8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，經(jīng)硝酸銀染色并于凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。利用fgr基因InDel分子標(biāo)記擴增水稻品種的基因組DNA,南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷能擴增出100bp的DNA條帶，而非南粳9108標(biāo)準(zhǔn)稻谷則擴增出107bp或同時具有100bp和107bp的帶型。