臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證

臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證臨床檢驗(yàn)方法確認(rèn)與性能驗(yàn)證概念目的具體操作其他一.概念確認(rèn)（validation）驗(yàn)證（verification）確認(rèn)（validation）在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前條件下，證實(shí)所得檢驗(yàn)結(jié)果是否可以滿足臨床需要，能為患者提供可靠的的臨床結(jié)果過(guò)程。本質(zhì)上實(shí)際就是誤差評(píng)價(jià)（errorassessment），如果誤差太大將會(huì)造成結(jié)果不正確的解釋！確認(rèn)的手段應(yīng)是是實(shí)際的或是模擬的！驗(yàn)證（verification）實(shí)驗(yàn)室按廠商說(shuō)明的方法能否得到預(yù)期結(jié)果驗(yàn)證的手段可以是下述活動(dòng)，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評(píng)審。確認(rèn)（validation）通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。注：①“已確認(rèn)”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確認(rèn)所使用的條件可以是實(shí)際的或是模擬的。驗(yàn)證（verification）通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定注：①“已驗(yàn)證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認(rèn)定可包括下述活動(dòng)，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評(píng)審。ISO15189的概念確認(rèn)（validation）通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。注：①“已確認(rèn)”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②確認(rèn)所使用的條件可以是實(shí)際的或是模擬的。驗(yàn)證（verification）通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定注：①“已驗(yàn)證”一詞用于表示相應(yīng)的狀態(tài)。②認(rèn)定可包括下述活動(dòng)，如：變換方法進(jìn)行計(jì)算；將新設(shè)計(jì)規(guī)范與已證實(shí)的類似設(shè)計(jì)規(guī)范進(jìn)行比較；進(jìn)行試驗(yàn)和演示；發(fā)布文件前的評(píng)審。二.目的結(jié)果互認(rèn)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室管理辦法CLIA’88CNAS-CL026．計(jì)算配對(duì)結(jié)果之間的差值，并繪制差值與比較值之間的差值圖提供數(shù)據(jù)的圖形顯示。計(jì)算每一材料的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。大數(shù)定律和中心極限定律用ROC曲線進(jìn)行方法的臨床評(píng)價(jià)Westgard確定不精密度的方法均勻離散度的直觀檢查“總誤差”計(jì)算公式如下：TEcalc=SE+RE選擇至少2個(gè)不同濃度控制物代表了研究項(xiàng)目的低和高的醫(yī)的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。確認(rèn)（validation）通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)特定95%)，可以確定臨界差值表中的行和列相當(dāng)于具有1.確認(rèn)的手段應(yīng)是是實(shí)際的或是模擬的！7．將數(shù)據(jù)進(jìn)行配對(duì)t-檢驗(yàn)計(jì)算確定方法之間的平均差值（偏倚），以及差值的標(biāo)準(zhǔn)差；如：紅細(xì)胞微粒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090001、膽紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090002、氰化高鐵血紅蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090004和純化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090011。CLSI’sEP15指南“真實(shí)度”或偏倚的用戶驗(yàn)證也建議最少為20個(gè)患者樣本。三.具體操作（一）統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)（二）檢驗(yàn)方法分類（三）方法的選擇（四）常用物質(zhì)（五）一些基本術(shù)語(yǔ)（六）質(zhì)量規(guī)范（七）具體操作（一）統(tǒng)計(jì)學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)概述臨床檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的分類統(tǒng)計(jì)方法的分類隨機(jī)變量及其分布正態(tài)分布抽樣分布大數(shù)定律和中心極限定律平均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差均數(shù)的抽樣誤差與t分布兩均數(shù)差別的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義檢驗(yàn)方差分析直線回歸與相關(guān)觀察值一致性

（二）檢驗(yàn)方法分類

決定性方法（definitivemethod）：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準(zhǔn)確度或不確定性原因的方法；參考方法（referencemethod）：經(jīng)詳盡研究證實(shí)其不準(zhǔn)確度與不精密度可以忽略的方法；常規(guī)方法（routinemethod）：可滿足臨床或其他目的需要的日常使用的方法。（三）方法的選擇

足夠特異、靈敏、精密度好校準(zhǔn)可溯源有實(shí)驗(yàn)證據(jù)（雜志、自）與其他檢驗(yàn)項(xiàng)目相比有點(diǎn)何在（四）常用物質(zhì)

1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/參考物質(zhì)（referencematerial）2.校準(zhǔn)品（calibrator）3.質(zhì)控物/控制品（controlmaterial）1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

概念：又稱參考物質(zhì)（referencematerial），是一類充分均勻，并具有一個(gè)（或多個(gè)）確定的特性值的材料或物質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定值結(jié)果一般表示為：標(biāo)準(zhǔn)值±總不確定度。“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)“是介紹標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的技術(shù)文件，是研制單位向用戶提出的質(zhì)量保證書(shū)和使用說(shuō)明。附有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱為有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（certifiedreferencematerial,CRM），其特性值由建立了溯源性的程序確定，可溯源至準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)該特性值的計(jì)量單位，且每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。作用：校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法，或給其它物質(zhì)賦值分類：一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（primaryreferencematerial）：穩(wěn)定、均一，采用高度準(zhǔn)確、可靠的若干方法定值，可用于校準(zhǔn)決定性方法及為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值。在我國(guó)，一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是測(cè)量準(zhǔn)確度達(dá)到國(guó)內(nèi)最高水平的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，由國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)、頒布并授權(quán)生產(chǎn)。如：人血清無(wú)機(jī)成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW09135）和血清膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW09138）。二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（secondaryreferencematerial）：用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)，參考方法定值。如：紅細(xì)胞微粒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090001、膽紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090002、氰化高鐵血紅蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090004和純化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090011。2.校準(zhǔn)品

3.質(zhì)控品

概念：分類：定值質(zhì)控品非定值質(zhì)控品檢測(cè)系統(tǒng)配套的控制品正確度控制品質(zhì)控品概念具有與檢測(cè)過(guò)程相適應(yīng)的特性，其成份與檢測(cè)樣本的基質(zhì)相同或相似。應(yīng)使用充分均一和穩(wěn)定的質(zhì)控物，其瓶間變異必須小于監(jiān)測(cè)系統(tǒng)預(yù)期的變異，其常規(guī)檢測(cè)應(yīng)有助于確認(rèn)報(bào)告范圍。定值質(zhì)控品定值質(zhì)控品但是公司的定值是從保護(hù)自己利益出發(fā)的。它標(biāo)示的預(yù)期范圍只是想告訴用戶，只要你的測(cè)定值在范圍，說(shuō)明它的控制品是好的。因此不要將預(yù)期范圍認(rèn)為是控制的允許范圍?。?！不定值控制品質(zhì)量和定值的一樣，只是廠商沒(méi)有邀請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室為控制品定值，在說(shuō)明書(shū)上除定值內(nèi)容外，其余都有，還告訴了用戶高值或低值，當(dāng)然更便宜??！但無(wú)論定值或不定值，用戶在使用時(shí)，須使用自己的檢測(cè)系統(tǒng)建立自己的均值和標(biāo)準(zhǔn)差??！只是定值控制品有一個(gè)預(yù)期的范圍便于用戶對(duì)照！！但僅為對(duì)照，若兩者相似不能說(shuō)明用戶結(jié)果準(zhǔn)確，不相似也不說(shuō)明結(jié)果有問(wèn)題。國(guó)內(nèi)限于條件國(guó)產(chǎn)控制品很少，由經(jīng)銷商推出的國(guó)外控制品真正屬于定值的也不多，定值控制品因?yàn)閮r(jià)格貴，用戶不接受，但用戶又要求是定值的控制品，因此不少經(jīng)銷商要求生產(chǎn)廠商提供一個(gè)公司自己檢測(cè)的值，附在不定值控制品上，變成用戶可接受的“定值”控制品?。。?！至于定值所用的檢測(cè)系統(tǒng)，方法學(xué)原理、儀器、試劑盒來(lái)源、操作程序都無(wú)可奉告?。?！此時(shí)如果用戶的靶值和“所為定值”相差甚遠(yuǎn)，我們應(yīng)該可以理解，并不是控制品質(zhì)量有問(wèn)題造成的?。。z測(cè)系統(tǒng)配套的控制品為了使用戶及時(shí)了解檢測(cè)系統(tǒng)的質(zhì)量狀況，大的診斷產(chǎn)品廠商（國(guó)際上六大），除提供儀器、試劑、校準(zhǔn)品外，還提供檢測(cè)系統(tǒng)專用的控制品，必要時(shí)還為使用相同檢測(cè)系統(tǒng)的用戶提供相同批號(hào)的控制品，同時(shí)組織質(zhì)量服務(wù)??！此類控制品專用性強(qiáng)。如羅氏的正常與病理控制品Precinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校準(zhǔn)品定值程序獲得?。?！而且定值一旦發(fā)現(xiàn)中間環(huán)節(jié)出錯(cuò)，還在網(wǎng)上為用戶提供更新！！正確度控制品為了隨時(shí)保證檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人樣本的檢測(cè)結(jié)果具有溯源性，此時(shí)引入了正確度控制品，ISO17511標(biāo)準(zhǔn)定義正確度控制品為：用于評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)偏倚的參考物質(zhì)。而且有專門(mén)的定值過(guò)程，該定制過(guò)程比校準(zhǔn)品定值還要嚴(yán)格，與定值控制品的定值屬于相同檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定值的簡(jiǎn)單統(tǒng)計(jì)處理一定要分開(kāi)?。。ㄎ澹┮恍┗拘g(shù)語(yǔ)

準(zhǔn)確度正確度精密度溯源性a.準(zhǔn)確度與誤差準(zhǔn)確度（accuracy）的完整表達(dá)應(yīng)是檢測(cè)準(zhǔn)確度（accuracyofmeasurement）：檢測(cè)結(jié)果與被測(cè)量真值或約定真值（可接受參照值）之間的一致程度（、GB/T6379）.可接受參照值：用來(lái)做比較的經(jīng)協(xié)商同意的值，它可以是理論值（真值），賦值，公認(rèn)值或由程序確定的值。準(zhǔn)確度不能直接得出，只能用偏離（deviation）也就是誤差從反面衡量誤差：測(cè)量值與真值之間的偏離，包括RE和SE。誤差是用來(lái)度量不準(zhǔn)確度的。這樣對(duì)于檢測(cè)結(jié)果只做一次時(shí)，結(jié)果的偏離即不準(zhǔn)確度=分析過(guò)程的不正確度+分析過(guò)程的不精密度也即不準(zhǔn)確度=總誤差=分析過(guò)程的隨機(jī)誤差+分析過(guò)程的系統(tǒng)誤差b.正確度與偏倚正確度（trunees）即真實(shí)度，完整表達(dá)檢測(cè)真實(shí)度：大量檢測(cè)結(jié)果得到的均值與可接受參考值之間的一致程度（GB/T6379），用偏倚（bias）來(lái)表示,即測(cè)試結(jié)果的期望與真值（可接受參考值）之差。（GB/T6379）系統(tǒng)誤差：在可重復(fù)的條件下，大量檢測(cè)結(jié)果的均值與真值之差偏倚表示的是一種系統(tǒng)誤差。c.精密度和標(biāo)準(zhǔn)差精密度（precision），完整表達(dá)檢測(cè)精密度：在規(guī)定條件下獨(dú)立測(cè)試結(jié)果之間一致程度（GB/T6379）。用標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)來(lái)表示。分為兩種，“重復(fù)性（repeatability）”相同條件下執(zhí)行連續(xù)測(cè)量結(jié)果之間的一致性程度，又稱為序列內(nèi)精密度和批內(nèi)精密度?！霸佻F(xiàn)性（reproducibility）”在改變測(cè)量條件下執(zhí)行測(cè)量結(jié)果之間的一致性程度。隨機(jī)誤差（randomerror）：在可重復(fù)的條件下，對(duì)相同的被測(cè)量無(wú)數(shù)次檢測(cè)結(jié)果的均值，與檢測(cè)結(jié)果的差異。用標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)度量。d.總誤差總誤差（totalerror,TE）:能影響分析準(zhǔn)確度的確定誤差的組合【CLSIEP15-A2】,即偏倚和不精密度的和?；诳茖W(xué)原理的理論或確定值基于一些國(guó)家或組織的實(shí)驗(yàn)工作的指定值或認(rèn)證值基于科學(xué)或工程組織贊助下合作實(shí)驗(yàn)工作中的同意值或認(rèn)證值。以上三點(diǎn)不能獲得時(shí)，則用可獲得的期望，即規(guī)定測(cè)量總體的均值。溯源性

通過(guò)一條連續(xù)的比較連，使FPS檢測(cè)結(jié)果與國(guó)際或國(guó)家的參考系統(tǒng)（在參考實(shí)驗(yàn)室，使用參考方法，參考品得到的結(jié)果）聯(lián)系起來(lái)的特性（六）質(zhì)量規(guī)范

質(zhì)量規(guī)范簡(jiǎn)史

1963年加拿大臨床化學(xué)家DavidTonks建議用參考區(qū)間的寬度1/4表示允許誤差。

1968年臨床化學(xué)家RoyBarnett博士提出標(biāo)準(zhǔn)差表示允許誤差。

1976年CAP舉辦的分析目標(biāo)討論會(huì)議，Westgard提出了以“允許總誤差”作為規(guī)定質(zhì)量的最佳形式，一直沿用至今。

1999年斯德哥爾摩協(xié)商大會(huì)匯集了臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的許多專家協(xié)商一致的“建立全球分析質(zhì)量規(guī)范”，其結(jié)果提出了“質(zhì)量規(guī)范（qualityspecifications）”的層次結(jié)構(gòu)：

1.評(píng)價(jià)在特定情況下分析性能對(duì)臨床結(jié)果的影響2.評(píng)價(jià)在一般情況下分析性能對(duì)臨床決策的影響3.基于生物學(xué)變異的規(guī)范4.基于臨床醫(yī)生觀點(diǎn)的分析5.已發(fā)表專業(yè)推薦來(lái)自國(guó)家和國(guó)際的專家組來(lái)自地方組織或某個(gè)國(guó)家6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范法規(guī)機(jī)構(gòu)能力驗(yàn)證（PT）和（或）室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃（EQAS）組織者7.基于當(dāng)前分析技術(shù)的目標(biāo)有時(shí)間質(zhì)量質(zhì)量評(píng)價(jià)或能力驗(yàn)證計(jì)劃數(shù)據(jù)證實(shí)由當(dāng)前發(fā)表方法學(xué)性能文章3.基于生物學(xué)變異的規(guī)范。用法CVA<1/2CVIBA<1/4（CVI2+CVG2）1/2CV儀器之間<1/3CVIA+BA(α<0.05)A+BA(α<0.01)不精密度CV：用于室內(nèi)質(zhì)控精密度分析用于方法學(xué)性能驗(yàn)證：1.與客觀比較

2.與廠家比較偏差Bias：用于方法學(xué)比較，即考核真實(shí)度。允許總誤差Tea：用于EQA5.已發(fā)表專業(yè)推薦

6.基于法規(guī)和EQA的質(zhì)量規(guī)范

（七）具體操作

內(nèi)容常用的方案具體方案

方法確認(rèn)

內(nèi)容：總是包括可報(bào)告范圍、精密度、準(zhǔn)確度和參考區(qū)間。某些研究還應(yīng)包括檢出限（或靈敏度）、特異度、干擾和回收以及校準(zhǔn)品確認(rèn)。CLIA規(guī)則規(guī)定對(duì)不同復(fù)雜程度分類的方法需要確認(rèn)不同的特征。對(duì)不太復(fù)雜的方法，要求很少的研究。對(duì)于自建檢測(cè)系統(tǒng)或?qū)嶒?yàn)室修改的方法需要更多的實(shí)驗(yàn)。方法驗(yàn)證除應(yīng)驗(yàn)證儀器的安裝和檢驗(yàn)程序的操作外對(duì)于定量方法應(yīng)驗(yàn)證：測(cè)量精密度：包括重復(fù)性和再現(xiàn)性、患者結(jié)果與以前方法或參考程序之間的一致性、在整個(gè)分析測(cè)量范圍內(nèi)被測(cè)量的回收、高濃度的攜帶污染、干擾或非特異性（溶血、脂血、黃疸、容器添加劑、藥物）、參考區(qū)間。對(duì)于定性方法應(yīng)驗(yàn)證陽(yáng)性和陰性及臨界值上和下標(biāo)本的再現(xiàn)性和重復(fù)性、患者結(jié)果的一致性、攜帶污染、干擾或非特異性。常用的方案1.相關(guān)機(jī)構(gòu)：NCCLA/CLSI、CLIA2.具體方案定量實(shí)驗(yàn)室方法的初步評(píng)價(jià):

CLSIEP10定性測(cè)試性能評(píng)估：CLSIEP12基質(zhì)效應(yīng)的評(píng)價(jià)：CLSIEP14精密度和正確度性能的用戶驗(yàn)證：CLSIEP15-A使用ROC曲線實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)臨床準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)：CLSIGP10總誤差估計(jì)

:CLSIEP21-A：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的估計(jì)精密度評(píng)價(jià):

EP5-A，臨床化學(xué)設(shè)備精密性能的評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)：方法比較試驗(yàn)EP9-A，使用病人樣本進(jìn)行方法比較和偏倚估計(jì)回收實(shí)驗(yàn)干擾試驗(yàn)EP7-P，臨床化學(xué)干擾試驗(yàn)總誤差估計(jì)

:CLSIEP21-A：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的估計(jì)患者結(jié)果可報(bào)告范圍（即線性范圍）的驗(yàn)證：EP6-A：定量分析方法線性的評(píng)價(jià)

臨床可報(bào)告范圍的確立參考范圍

：NCCLS/CLSIC28-A

：臨床實(shí)驗(yàn)室如何定義和確定參照區(qū)間交叉污染:NCCLS/CLSIEP10-A

分析靈敏度:CLSIEP17-A：檢出限和定量下限確定方案分析特異性:NCCLA/CLSIEP7-A:臨床化學(xué)干擾試驗(yàn)

評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度除按ISO/IECl7025對(duì)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系評(píng)價(jià)外，在實(shí)際工作中我們常用以下幾種方法來(lái)核驗(yàn)、評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度。用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度（t檢驗(yàn)）用標(biāo)準(zhǔn)方法評(píng)價(jià)分析結(jié)果的準(zhǔn)確度回收率試驗(yàn)Westgard確定不精密度的方法考慮因素1.實(shí)驗(yàn)周期：20天以內(nèi)2.樣本基質(zhì)3.檢測(cè)材料數(shù)量和濃度水平：MDL4.檢測(cè)樣本個(gè)數(shù)：20次5.數(shù)據(jù)計(jì)算：CV/S6.可接受性能準(zhǔn)則

Sw-run/Sw-day<1/4TEaSI-run<1/3TEa7.廠家聲明的驗(yàn)證8.推薦的最低程度研究9.基于未來(lái)的考慮廠家聲明的驗(yàn)證

CLIA并沒(méi)有嚴(yán)格地要求實(shí)驗(yàn)室確定性能的可接受性。更確切地，CLIA主張實(shí)驗(yàn)室應(yīng)驗(yàn)證廠家精密度的聲明。這可由F檢驗(yàn)完成，如下：1.從廠家聲明材料（通常包括在儀器的文件中）中獲得用于重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)差和測(cè)量個(gè)數(shù)，如基于31次測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)差（s）為3mg/dl。2.從你的重復(fù)實(shí)驗(yàn)獲得的標(biāo)準(zhǔn)差和測(cè)量結(jié)果個(gè)數(shù)，如基于21個(gè)測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)差為4mg/dl。3.計(jì)算F值，較大s平方除較小s平方，即=16/9=。4.查F值表，查分子自由度為20，分母自由度為30的臨界F值，其值為。5.在這一實(shí)例中，計(jì)算的F值小于臨界F值，其表示實(shí)驗(yàn)室觀測(cè)的s與廠家聲明的s之間沒(méi)有真正的差異。6.結(jié)論——已驗(yàn)證廠家的聲明。推薦的最低程度研究

選擇至少2個(gè)不同濃度控制物代表了研究項(xiàng)目的低和高的醫(yī)學(xué)決定性濃度。每一個(gè)濃度在一批內(nèi)或一天內(nèi)對(duì)每一控制物檢測(cè)20個(gè)樣本獲得短期的不精密度估計(jì)值。計(jì)算每一控制物的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。在進(jìn)行更進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)之前確定短期不精密度是否可接受。在20個(gè)不同天對(duì)兩個(gè)控制物的每一種分析1個(gè)樣本，確定長(zhǎng)期的不精密度。計(jì)算每一材料的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。確定長(zhǎng)期不精密度是否可接受?；谖磥?lái)的考慮

采用更為詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供關(guān)于短期和長(zhǎng)期變異量的信息。這些設(shè)計(jì)通常使用方差分析（analysisofvariance,ANOVA)，如CLSI精密度方案所闡述EP5方案預(yù)期用于廠家的精密度評(píng)價(jià)，而EP15方案預(yù)期用于臨床實(shí)驗(yàn)室用戶進(jìn)行的評(píng)價(jià)。EP15明確指出在5天的時(shí)間內(nèi)每天最少是采用3個(gè)重復(fù)測(cè)量，給出總的15個(gè)測(cè)量值。為了估計(jì)總的不精密度，計(jì)算提供確定批內(nèi)和批間分量的方式，然后將其結(jié)合來(lái)提供總的不精密度。在EP15附錄中描述了所需要的計(jì)算，以及一組數(shù)據(jù)實(shí)例顯示如何驗(yàn)證廠家的聲明。給出的EP15允許僅只有5天的數(shù)據(jù)就可進(jìn)行精密度驗(yàn)證，很有可能它將成為許多實(shí)驗(yàn)室采用的方案。CLSIEP5-A2

定量方法精密度性能評(píng)價(jià)EvaluationofPrecisionPerformanceofQuantitativeMethods;ApprovedGuideline—SecondEdition精密度的內(nèi)容批內(nèi)精密度（重復(fù)性：repeatability）批間精密度日內(nèi)精密度日間精密度實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度（within-laboratoryprecision）實(shí)驗(yàn)方法試劑和校準(zhǔn)物：同一批號(hào)樣本：基質(zhì)與臨床樣本相似，2個(gè)以上濃度（參考醫(yī)學(xué)決定水平）。實(shí)驗(yàn)天數(shù)：20天以上實(shí)驗(yàn)次數(shù)：每天2批，每批2個(gè)樣本，每個(gè)樣本重復(fù)2次Westgard確定偏倚的方法概述

由新方法（試驗(yàn)方法）和可比較方法同時(shí)分析患者樣本的實(shí)驗(yàn)，基于兩方法觀測(cè)的差值估計(jì)系統(tǒng)誤差?？紤]因素1.可比較方法2.患者標(biāo)本數(shù)量3.單次或雙份測(cè)量4.時(shí)間周期5.標(biāo)本穩(wěn)定性6.數(shù)據(jù)分析7.圖形顯示數(shù)據(jù)8.計(jì)算適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)量9.可接受性能標(biāo)準(zhǔn)10.廠家聲明的驗(yàn)證11.推薦的最低程度的研究12.未來(lái)的發(fā)展方向1.可比較方法

“可比較方法”并不意味方法已證明其正確性。大多數(shù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法歸為此類。必須仔細(xì)解釋試驗(yàn)方法和常規(guī)方法之間的任何差異。如果差別很小，則兩方法具有相同的相對(duì)的準(zhǔn)確度。如果差別很大并醫(yī)學(xué)上不可接受，則需要識(shí)別哪一方法是不準(zhǔn)確的。可采用回收和干擾實(shí)驗(yàn)提供這一額外的信息。2.患者標(biāo)本數(shù)量

兩個(gè)方法檢測(cè)最少40份不同的患者標(biāo)本。選擇的這些標(biāo)本覆蓋整個(gè)方法的可報(bào)告范圍及代表方法在常規(guī)應(yīng)用預(yù)期疾病的濃度范圍。檢測(cè)標(biāo)本的實(shí)際個(gè)數(shù)沒(méi)有標(biāo)本的質(zhì)量重要。在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前條件下，證實(shí)所得檢驗(yàn)結(jié)果是否可以滿足臨床需要，能為患者提供可靠的的臨床結(jié)果過(guò)程。50%）和樣本#2(混合CV=1.本質(zhì)上實(shí)際就是誤差評(píng)價(jià)（errorassessment），如果誤差太大將會(huì)造成結(jié)果不正確的解釋！均勻離散度的直觀檢查附有證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱為有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（certifiedreferencematerial,CRM），其特性值由建立了溯源性的程序確定，可溯源至準(zhǔn)確復(fù)現(xiàn)該特性值的計(jì)量單位，且每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。4．真實(shí)度試驗(yàn)樣本可在同一批內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)?！翱傉`差”計(jì)算公式如下：TEcalc=SE+RE正確度控制品檢測(cè)系統(tǒng)配套的控制品決定性方法（definitivemethod）：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準(zhǔn)確度或不確定性原因的方法；以上三點(diǎn)不能獲得時(shí)，則用可獲得的期望，即規(guī)定測(cè)量總體的均值。誤差：測(cè)量值與真值之間的偏離，包括RE和SE。如：紅細(xì)胞微粒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090001、膽紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090002、氰化高鐵血紅蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090004和純化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)—GBW（E）090011。2．在實(shí)驗(yàn)室以常規(guī)操作方式檢測(cè)新鮮患者樣本。為了隨時(shí)保證檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人樣本的檢測(cè)結(jié)果具有溯源性，此時(shí)引入了正確度控制品，ISO17511標(biāo)準(zhǔn)定義正確度控制品為：用于評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)偏倚的參考物質(zhì)。3.單次或雙份測(cè)量

雙份測(cè)定不同的批、或至少不同的順序（而不是在同一樣本杯中來(lái)回重復(fù)）不同的樣本（或杯）4.時(shí)間周期

一般建議最少5天每天檢測(cè)2至5個(gè)患者標(biāo)本5.標(biāo)本穩(wěn)定性

一般由試驗(yàn)和可比較方法在兩個(gè)小時(shí)內(nèi)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，除非標(biāo)本有很短的穩(wěn)定性6.數(shù)據(jù)分析

方式存在爭(zhēng)論和討論7.圖形顯示數(shù)據(jù)

差值圖（differenceplot）比對(duì)圖”（comparisonplot）8.計(jì)算適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)量

1.以比較方法測(cè)定值Xc為橫坐標(biāo)，試驗(yàn)方法測(cè)定值Yc為縱坐標(biāo)，采用直線回歸或最小二乘法擬合直線，建立回歸方Y(jié)c=a+bXc，并由此計(jì)算在MDL時(shí)的SE，SE=Yc-Xc2.另一常計(jì)算的指標(biāo)是相關(guān)系數(shù)r，主要用于評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)范圍是否足夠?qū)捯员闾峁┬甭屎徒鼐喔玫墓烙?jì)。而不是判斷方法的可接受性。當(dāng)r為或更大時(shí)，簡(jiǎn)單的線性回歸計(jì)算可提供斜率和截距可靠的估計(jì)。如果r小于，最好是收集額外的數(shù)據(jù)擴(kuò)大濃度范圍。考慮到使用t-檢驗(yàn)計(jì)算估計(jì)數(shù)據(jù)均值的系統(tǒng)誤差，或使用更復(fù)雜的回歸計(jì)算適合于數(shù)據(jù)更窄的范圍。3.對(duì)于比對(duì)結(jié)果覆蓋較窄的分析范圍，如：鈉或鈣等，計(jì)算兩方法平均值之間的差，也通常稱為偏倚。這種計(jì)算的偏倚從統(tǒng)計(jì)程序可獲得提供配對(duì)t-檢驗(yàn)計(jì)算。例如，如果鈉試驗(yàn)方法40個(gè)分析的均值是，相同樣本比較方法的均值為，則平均系統(tǒng)誤差或偏倚是（）。9.可接受性能標(biāo)準(zhǔn)

判斷可接受性依賴于允許分析誤差的大小，任何單個(gè)試驗(yàn)的總誤差（TE）包括系統(tǒng)誤差（SE）加隨機(jī)誤差（RE）。“總誤差”計(jì)算公式如下：TEcalc=SE+RETEcalc=Biasmeas+3SmeasSmeas是重復(fù)性試驗(yàn)估計(jì)的方法標(biāo)準(zhǔn)差，Biasmeas是從回歸方程Yc=a+bXc計(jì)算的Yc-Xc或從配對(duì)t-檢驗(yàn)計(jì)算的平均差，當(dāng)TEcalc<TEa方法性能是可接受的方法決定圖10.廠家聲明的驗(yàn)證CLIA并沒(méi)有嚴(yán)格地要求實(shí)驗(yàn)室參照任何質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，甚至是其能力驗(yàn)證可接受性能準(zhǔn)則判斷任何觀測(cè)的偏倚或系統(tǒng)誤差的可接受性。代之，CLIA強(qiáng)調(diào)驗(yàn)證廠家的準(zhǔn)確度（或不準(zhǔn)確度、偏倚，系統(tǒng)誤差）聲明。如果廠家的聲明沒(méi)有偏倚，t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量將揭示出實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)證實(shí)其聲明是否符合。如果從配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)計(jì)算的t值小于臨界t值，則沒(méi)有顯著性差異，或觀測(cè)到?jīng)]有真實(shí)的偏倚。如果廠家聲明有限的偏倚，則有用的是確定你估計(jì)偏倚的置信區(qū)間，并將其與廠家的聲明的偏倚進(jìn)行比較。如果廠家的聲明偏倚落在觀測(cè)偏倚的上下置信限之內(nèi)，則證實(shí)了聲明；如果不在此區(qū)間內(nèi)，則沒(méi)有驗(yàn)證聲明。11.推薦的最低程度的研究

選擇40份患者標(biāo)本覆蓋方法的整個(gè)可報(bào)告范圍。由試驗(yàn)和比較方法在2小時(shí)內(nèi)一天分析8份標(biāo)本。很快地將結(jié)果繪制差值圖并檢查差異；重新分析給出差異結(jié)果的標(biāo)本消除離群值，識(shí)別潛在的干擾。如果沒(méi)有觀測(cè)到差異的結(jié)果，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)5天。如果在頭5天觀測(cè)到差異，繼續(xù)另外的5天。繪制所有數(shù)據(jù)的比對(duì)圖評(píng)價(jià)范圍，離群值和線性。計(jì)算相關(guān)系數(shù)，如果r為或更大，計(jì)算簡(jiǎn)單直線回歸統(tǒng)計(jì)量及在醫(yī)學(xué)決定濃度水平上估計(jì)系統(tǒng)誤差。如果，從t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)量估計(jì)數(shù)據(jù)均值的偏倚或另外從更為復(fù)雜的回歸技術(shù)進(jìn)行估計(jì)。使用方法決定圖結(jié)合估計(jì)的系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差，并對(duì)方法觀測(cè)的總誤差作出判斷。在此參考物質(zhì)可包括有證參考物質(zhì)，如從國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究院獲得，但也可來(lái)自能力驗(yàn)證樣本，質(zhì)量控制材料，或具有指定值的相同方法比對(duì)材料應(yīng)驗(yàn)證：測(cè)量精密度：包括重復(fù)性和再現(xiàn)性、患者結(jié)果與以前方法或參考程序之間的一致性、在整個(gè)分析測(cè)量范圍內(nèi)被測(cè)量的回收、高濃度的攜帶污染、干擾或非特異性（溶血、脂血、黃疸、容器添加劑、藥物）、參考區(qū)間。根據(jù)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)允許總誤差（TEa)確定允許的CV%:用EXCEL表格計(jì)算T值精密度評(píng)價(jià):EP5-A，臨床化學(xué)設(shè)備精密性能的評(píng)價(jià)“再現(xiàn)性（reproducibility）”在改變測(cè)量條件下執(zhí)行測(cè)量結(jié)果之間的一致性程度。界限：（雙份測(cè)定）相對(duì)差值均值的4倍學(xué)決定性濃度。分析特異性:NCCLA/CLSIEP7-A:臨床化學(xué)干擾試驗(yàn)每一個(gè)濃度在一批內(nèi)或一天內(nèi)對(duì)每一控制物當(dāng)r為或更大時(shí)，簡(jiǎn)單的線性回歸計(jì)算可提供斜率和截距可靠的估計(jì)。它標(biāo)示的預(yù)期范圍只是想告訴用戶，只要你的測(cè)定值在范圍，說(shuō)明它的控制品是好的。Westgard確定不精密度的方法在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前條件下，證實(shí)所得檢驗(yàn)結(jié)果是否可以滿足臨床需要，能為患者提供可靠的的臨床結(jié)果過(guò)程?？傉`差估計(jì):CLSIEP21-A：臨床實(shí)驗(yàn)方法總分析誤差的估計(jì)12.未來(lái)的發(fā)展方向

CLIA當(dāng)前指南給出20為方法確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的“經(jīng)驗(yàn)法則”。CLSI’sEP15指南“真實(shí)度”或偏倚的用戶驗(yàn)證也建議最少為20個(gè)患者樣本。另外，EP15包括備選方法使用最少2個(gè)具有制定值參考物質(zhì)，以在3到5批中以雙份測(cè)定方式進(jìn)行測(cè)量.在此參考物質(zhì)可包括有證參考物質(zhì)，如從國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和技術(shù)研究院獲得，但也可來(lái)自能力驗(yàn)證樣本，質(zhì)量控制材料，或具有指定值的相同方法比對(duì)材料CLSIEP9-A2使用病人樣本進(jìn)行方法比較和偏倚估計(jì)目的及用途引進(jìn)新方法前或用一種方法替代另一種方法時(shí)進(jìn)行偏倚分析；評(píng)價(jià)同一分析項(xiàng)目的兩種分析方法間的偏倚。評(píng)價(jià)操作要求熟悉儀器操作熟悉評(píng)價(jià)方案質(zhì)量控制足夠的數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)樣本要求來(lái)源于健康人或患者，無(wú)干擾，盡量避免儲(chǔ)存；測(cè)定物濃度范圍應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布；樣本數(shù)至少40例，增加數(shù)量能提高可信性對(duì)比方法

廠家要求的實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法或公認(rèn)的參考方法。具有好的精密度沒(méi)有已知的干擾物相同單位相對(duì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或參考方法的偏倚是已知的測(cè)定方法每天分別用兩種方法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定順序：

1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1測(cè)定次數(shù)：至少測(cè)定5天，共40個(gè)樣本數(shù)據(jù)監(jiān)督常規(guī)質(zhì)控：系統(tǒng)誤差人為誤差實(shí)驗(yàn)步驟?

熟悉儀器及方法?

收集數(shù)據(jù)?

檢查方法內(nèi)的離群點(diǎn)界限：（雙份測(cè)定）相對(duì)差值均值的4倍繪圖散點(diǎn)圖：均值散點(diǎn)圖（X，Y）所有值散點(diǎn)圖（Yij，Xi）偏倚圖：散點(diǎn)圖（（Yij-Xij），Xi）均值散點(diǎn)圖（X，Y）偏差圖：每次測(cè)定的Y均值與X均值

之差-相應(yīng)X均值圖相關(guān)指標(biāo)計(jì)算適合范圍：計(jì)算r，r2>=0.95范圍適合

r2<0.95擴(kuò)大數(shù)據(jù)范圍線性回歸：回歸方程計(jì)算：截距

斜率Y=1.17X–

均勻離散度的直觀檢查結(jié)果判讀預(yù)期偏倚及可信范圍線性回歸方程計(jì)算偏倚（高、中、低3組）解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)比較

CLSIEP15-A

精密度和正確度性能的用戶驗(yàn)證：UserVerificationofPerformanceforPrecisionandTrueness）主要的3種方案：1.精密度基于5天，每天分析3份重復(fù)控制樣本；2.真實(shí)度基于分析20份患者標(biāo)本；3.真實(shí)度基于分析至少2份具有指定值的參考物質(zhì)。EP15精密度方案

規(guī)定熟悉時(shí)期學(xué)習(xí)分析系統(tǒng)的適當(dāng)操作，包括校準(zhǔn)、維護(hù)程序和監(jiān)測(cè)程序（質(zhì)量控制）。使用廠家推薦的質(zhì)量控制程序監(jiān)測(cè)在EP15檢測(cè)方案期的性能。選擇的控制物應(yīng)具有的濃度水平接近醫(yī)學(xué)決定性點(diǎn)。用于聲明驗(yàn)證的控制物應(yīng)選擇接近于醫(yī)學(xué)決定點(diǎn)的濃度及接近于廠家進(jìn)行其精密度聲明試驗(yàn)所具有的濃度。如果可能，它們應(yīng)該與建立廠家聲明使用相同的材料，或非常類似的材料（類似的基質(zhì)）。實(shí)驗(yàn)方案1．五天，每日一分析批，每日兩個(gè)濃度水平，每一水平上同一樣本三次重復(fù)測(cè)定。2．如果因?yàn)橘|(zhì)量控制程序或操作困難判斷一批為失控，剔除數(shù)據(jù)，并執(zhí)行額外的批。3．包括正常地使用每日質(zhì)量控制樣本。4．真實(shí)度試驗(yàn)樣本可在同一批內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。5．操作者按照廠家說(shuō)明書(shū)規(guī)定進(jìn)行校準(zhǔn)。如果廠家指出在其聲明它的精密度數(shù)據(jù)是在多個(gè)校準(zhǔn)周期下產(chǎn)生的，則操作者在實(shí)驗(yàn)期間選擇重新校準(zhǔn)。誤差：測(cè)量值與真值之間的偏離，包括RE和SE。它標(biāo)示的預(yù)期范圍只是想告訴用戶，只要你的測(cè)定值在范圍，說(shuō)明它的控制品是好的。決定性方法（definitivemethod）：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準(zhǔn)確度或不確定性原因的方法；也即不準(zhǔn)確度=總誤差=分析過(guò)程的隨機(jī)誤差+分析過(guò)程的系統(tǒng)誤差具有與檢測(cè)過(guò)程相適應(yīng)的特性，其成份與檢測(cè)樣本的基質(zhì)相同或相似。在20個(gè)不同天對(duì)兩個(gè)控制物的每一種分析1個(gè)樣本，確定長(zhǎng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)差和測(cè)量個(gè)數(shù)，如基于31次測(cè)量的標(biāo)計(jì)算r，r2>=0.每一個(gè)濃度在一批內(nèi)或一天內(nèi)對(duì)每一控制物BA<1/4（CVI2+CVG2）1/2如羅氏的正常與病理控制品Precinorm/Precipath，它的控制品定值完全按照校準(zhǔn)品定值程序獲得！即不準(zhǔn)確度=分析過(guò)程的不正確度+分析過(guò)程的不精密度分為兩種，“重復(fù)性（repeatability）”相同條件下執(zhí)行連續(xù)測(cè)量結(jié)果之間的一致性程度，又稱為序列內(nèi)精密度和批內(nèi)精密度。精密度基于5天，每天分析3份重復(fù)控制樣本；用標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)度量。統(tǒng)計(jì)量的計(jì)算建立EXCEL表格用EXCEL表格計(jì)算T值精密度聲明的驗(yàn)證EP15使用患者樣本的真實(shí)度方案