HPLC有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證

化學(xué)藥物有關(guān)物質(zhì)HPLC分析方法驗(yàn)證1語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT一、目的了解與規(guī)范有關(guān)物質(zhì)方法學(xué)驗(yàn)證。2語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT二、驗(yàn)證內(nèi)容1、專屬性2、檢測(cè)限、定量限、3、線性范圍4、響應(yīng)因子5、精密度(重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性)6、準(zhǔn)確度7、耐用性3語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

指有其他成分（合成中間體雜質(zhì)、降解物、副產(chǎn)物等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量。1、專屬性4語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT1、專屬性

試驗(yàn)方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針中間體及樣品中間體與樣品混合溶液破壞性試驗(yàn)（酸、堿、氧、高溫、光照等，用到不同溶劑的，溶劑也要進(jìn)樣對(duì)照）系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。褐虚g體與樣品混合溶液、破壞性試驗(yàn)中主成分與主要雜質(zhì)要打印出光譜純度和分離度數(shù)據(jù)，如short+spectum格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印。必要時(shí)提供3D圖5語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT1、專屬性峰純度結(jié)果峰名稱純度閾值結(jié)果峰名稱保留時(shí)間RT相對(duì)保留時(shí)間RRT評(píng)價(jià)：

1、各峰之間的分離狀況。

2、各峰的峰純度情況。報(bào)告數(shù)據(jù)：6語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT(1)檢測(cè)限(LOD)檢測(cè)限系指試樣在確定的實(shí)驗(yàn)條件下，被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或含量。是限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，無(wú)需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。

2、靈敏度7語(yǔ)言優(yōu)教資源PPTLOD試驗(yàn)方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針雜質(zhì)對(duì)照品溶液進(jìn)1針根據(jù)上一針雜質(zhì)對(duì)照品的S/N值進(jìn)行稀釋進(jìn)樣直到S/N為約3時(shí)，平行進(jìn)樣3針。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打印：雜質(zhì)對(duì)照溶液及其稀釋液均要以performance+noise格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印2、靈敏度8語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT(2)定量限(LOQ)

指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度要求。

2、靈敏度9語(yǔ)言優(yōu)教資源PPTLOQ試驗(yàn)方法空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針雜質(zhì)對(duì)照品溶液進(jìn)1針根據(jù)上一針雜質(zhì)對(duì)照品的S/N值進(jìn)行稀釋進(jìn)樣直到S/N為約10時(shí)，平行進(jìn)樣3針。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。弘s質(zhì)對(duì)照溶液及其稀釋液均要以performance+noise格式打印。系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印2、靈敏度10語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT2、靈敏度報(bào)告數(shù)據(jù)：檢測(cè)限LOD濃度雜質(zhì).A雜質(zhì).B雜質(zhì).C雜質(zhì)D雜質(zhì).E雜質(zhì).F雜質(zhì).G主成分定量限LOQ濃度雜質(zhì).A雜質(zhì).B雜質(zhì).C雜質(zhì)D雜質(zhì).E雜質(zhì).F雜質(zhì).G主成分平均值RSD11語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

(1)線性:在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線形通常用最小二乘法處理數(shù)據(jù)求得回歸曲線的斜率來(lái)表示。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個(gè)濃度考察線形，需提供相關(guān)系數(shù)、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數(shù)，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。

(2)范圍：指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。有關(guān)雜質(zhì)測(cè)定應(yīng)為被測(cè)雜質(zhì)最低定量限至限度的150%。3、線性與范圍12語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT3、線性與范圍

線性與范圍試驗(yàn)方法（包括主成分和雜質(zhì)）空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針配制從定量限到雜質(zhì)控制限度的150%的不同濃度樣品不少于6個(gè)（一般包括定量限、控制限度約50%、100%、150%等濃度）。從低濃度依次到高濃度依次進(jìn)樣。系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。合到y(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印其他圖譜可用short格式打印。最后經(jīng)calibration打出線性圖譜及線性方程參數(shù)。13語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT3、線性與范圍報(bào)告數(shù)據(jù)：提供標(biāo)準(zhǔn)曲線圖斜率相關(guān)系數(shù)Y-截距評(píng)價(jià)：相關(guān)系數(shù)不得小于0.99014語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

4、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。

測(cè)定回收率的具體方法可采用“加樣回收試驗(yàn)法”。

15語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

加樣回收試驗(yàn)：已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M4、準(zhǔn)確度16語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測(cè)三份50%加雜樣品檢測(cè)三份100%加雜樣品檢測(cè)三份150%加雜樣品檢測(cè)三份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打?。合到y(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。4、準(zhǔn)確度17語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

數(shù)據(jù)報(bào)告：

規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備高、中、低三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。計(jì)算9次測(cè)定結(jié)果的平均值及RSD。平均值應(yīng)為90%～110%及RSD小于10%。4、準(zhǔn)確度18語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT2．雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如果不能得到雜質(zhì)，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。如不能測(cè)得雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子，可在線測(cè)定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計(jì)算雜質(zhì)含量（自身對(duì)照法）。19語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT已知雜質(zhì)相對(duì)與主成分在HPLC上的響應(yīng)比值計(jì)算方法：

(1)可直接用主成分對(duì)照品及雜質(zhì)對(duì)照品進(jìn)行測(cè)定。

(2)也可由主成分及雜質(zhì)線性方程中的斜率比求得。5、響應(yīng)因子20語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT精密度是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)（變異系數(shù)，CV）表示。

6、精密性21語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（SD）6、精密性22語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)（偏）差（RSD）6、精密性23語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

1.重復(fù)性:A、在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或（回收率法）B、把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。（樣品測(cè)定法）6、精密性24語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

2.中間精密度同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。

3.重現(xiàn)性不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。一般申報(bào)注冊(cè)不要求

數(shù)據(jù)要求：需報(bào)告平均值，RSD。6、精密性25語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT報(bào)告數(shù)據(jù)：1、回收率、2、平均回收率、3、RSD評(píng)價(jià)：1、回收率應(yīng)為90%~110%2、RSD不得大于10%6、精密性26語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT供試溶液與對(duì)照溶液分別放在室溫和冷藏下保存，分別在不同時(shí)間測(cè)定HPLC對(duì)照溶液峰面積下降值不得過(guò)10%供試品溶液中雜質(zhì)，峰面積相對(duì)偏差不得過(guò)10%。7、溶液穩(wěn)定性27語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT報(bào)告數(shù)據(jù)：1、樣品與對(duì)照品的總雜質(zhì)峰面積及變化率。2、樣品與對(duì)照品的已知雜質(zhì)峰面積及變化率。3、樣品與對(duì)照品的最大未知雜質(zhì)峰面積及變化率。評(píng)價(jià)：1、對(duì)照品主峰的下降不得過(guò)10%2、樣品與初始值比較，雜質(zhì)變化不得過(guò)10%7、溶液穩(wěn)定性28語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

耐用性指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。它是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。通過(guò)在不同的條件下對(duì)同一樣品的分別測(cè)試而獲得的。（獲得的數(shù)據(jù)與正常檢測(cè)下的精密度進(jìn)行比較，從而確定該法的耐用性，或稱粗放度）8、耐用性29語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT典型的變動(dòng)因素包括：

流動(dòng)相的組成

流動(dòng)相的pH值

流動(dòng)相的流速

不同廠牌的同類型色譜柱

不同批號(hào)的同類型色譜柱

柱溫

波長(zhǎng)

樣品溶劑的組成及pH等，

其它操作條件同常規(guī)檢驗(yàn)8、耐用性30語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

耐用性試驗(yàn)方法1空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測(cè)三份50%加雜樣品檢測(cè)三份100%加雜樣品檢測(cè)三份150%加雜樣品檢測(cè)三份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打印：系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。8、耐用性31語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT

耐用性試驗(yàn)方法2（被測(cè)物質(zhì)有較高的含量）空白溶劑系統(tǒng)適用性溶液5針正常樣品檢測(cè)六份系統(tǒng)適用性溶液1針圖譜打印：系統(tǒng)適用必至少有一針用extendperformance格式打印，其他圖譜可用short格式打印。8、耐用性32語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT數(shù)據(jù)報(bào)告：求平均值與RSD，RSD小于10%。與重復(fù)性一起共計(jì)12個(gè)數(shù)據(jù)，計(jì)算平均值與RSD，RSD小于10%8、耐用性序號(hào)系統(tǒng)適用性參數(shù)測(cè)得值限度1分離度3.32NLT2.02標(biāo)準(zhǔn)品圖中的理論板數(shù)23324NLT50003標(biāo)準(zhǔn)品圖中的拖尾因子0.95NMT2.04三針標(biāo)準(zhǔn)液的RSD值.0.03NMT15.033語(yǔ)言優(yōu)教資源PPT匯總一下系統(tǒng)適用性要求要說(shuō)明各峰的色譜參數(shù)，以extendperformance打印專屬性試驗(yàn)說(shuō)明各已知物質(zhì)的分離度與峰純度最低檢測(cè)限要說(shuō)明信噪比參數(shù)，以performance+noise打印強(qiáng)力試驗(yàn)以DAD檢測(cè)器試驗(yàn)，要說(shuō)明分離度、理論板數(shù)等要符合全要求，要有主峰和各已知雜峰的峰純度數(shù)據(jù)定量限要說(shuō)明信噪比參數(shù)，以performance+noise打印線性與范圍要說(shuō)明線性方程的斜率、截距及相關(guān)系數(shù)，用Calibration處理后打印出線性圖重復(fù)性試驗(yàn)要說(shuō)明各試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值與RSD中間精密性試驗(yàn)要說(shuō)明各試驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值與RSD準(zhǔn)確性試驗(yàn)要說(shuō)明各試驗(yàn)數(shù)據(jù)的回收率與RSD耐用性試驗(yàn)要說(shuō)明分離度、理論板數(shù)等要符合全要求，說(shuō)明各次數(shù)據(jù)與正常測(cè)定數(shù)據(jù)的RSD，或要說(shuō)明各試驗(yàn)數(shù)據(jù)的回收率與RSD。溶液穩(wěn)定