牛活體采卵技術(shù)規(guī)程編制說(shuō)明

《?；铙w采卵技術(shù)規(guī)程》編制說(shuō)明基本情況任務(wù)來(lái)源2024年3月，由西北農(nóng)林科技大學(xué)向陜西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出《?；铙w采卵技術(shù)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)制定工作的立項(xiàng)申請(qǐng)，2024年5月11日，根據(jù)陜西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局同意立項(xiàng)，并下達(dá)相關(guān)文件（陜市監(jiān)函〔2024〕590號(hào)）及項(xiàng)目編號(hào)（SDBXM102-2024），批準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)的制訂。項(xiàng)目組在“良種奶牛性控胚胎生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)攻關(guān)與種質(zhì)核心群建設(shè)”（省級(jí)國(guó)有資本經(jīng)營(yíng)預(yù)算科技創(chuàng)新專項(xiàng)，陜西省國(guó)資委）、“奶牛良種活體采卵-體外胚胎生產(chǎn)和胚胎移植技術(shù)研究”（寧夏農(nóng)業(yè)關(guān)鍵核心技術(shù)攻關(guān)項(xiàng)目，寧夏農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳）、“良種奶牛繁育技術(shù)創(chuàng)新與種質(zhì)核心群建設(shè)”（陜西省畜禽育種“兩鏈”融合重點(diǎn)專項(xiàng)）和“現(xiàn)代奶牛良種擴(kuò)群高效繁殖技術(shù)研究集成與試驗(yàn)示范”（陜西省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)項(xiàng)目）的項(xiàng)目支撐下，開展相關(guān)研究與實(shí)際工作，并結(jié)合我省奶牛養(yǎng)殖和種業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀與目標(biāo)方向，起草制定《?；铙w采卵技術(shù)規(guī)程》。起草單位西北農(nóng)林科技大學(xué)。協(xié)作單位楊凌秾福農(nóng)牧科技服務(wù)有限公司和陜西省畜牧產(chǎn)業(yè)試驗(yàn)示范中心。起草組組成成員及其所做的主要工作林鵬飛教授，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，標(biāo)準(zhǔn)的起草、審核、驗(yàn)證。靳亞平教授，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，標(biāo)準(zhǔn)的起草、審核、驗(yàn)證。王勇勝教授，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，標(biāo)準(zhǔn)的起草、審核、驗(yàn)證。肖勁邦博士，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，供體牛卵巢刺激與活體采卵技術(shù)的研發(fā)與試驗(yàn)。李赫強(qiáng)博士，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，供體牛卵巢刺激與活體采卵技術(shù)的研發(fā)與試驗(yàn)。謝成運(yùn)博士，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，供體牛卵巢刺激與活體采卵技術(shù)的研發(fā)與試驗(yàn)。田滿園碩士，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，供體牛篩選與飼養(yǎng)管理的研發(fā)與試驗(yàn)。王炳科博士，西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院/楊凌秾福農(nóng)牧科技服務(wù)有限公司，供體牛篩選與飼養(yǎng)管理的研發(fā)與試驗(yàn)。肖紅年站長(zhǎng)，陜西省畜牧陜西省畜牧產(chǎn)業(yè)試驗(yàn)示范中心，標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證。賈永宏主任，陜西省畜牧陜西省畜牧產(chǎn)業(yè)試驗(yàn)示范中心，標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證。標(biāo)準(zhǔn)編制的目的和意義奶業(yè)是健康中國(guó)、強(qiáng)壯民族不可或缺的產(chǎn)業(yè)，奶業(yè)發(fā)展關(guān)乎人民健康、實(shí)體經(jīng)濟(jì)高質(zhì)量發(fā)展、穩(wěn)定擴(kuò)大消費(fèi)和鄉(xiāng)村振興。同樣，奶牛業(yè)是陜西畜牧業(yè)的優(yōu)勢(shì)和支柱產(chǎn)業(yè)之一，擁有國(guó)內(nèi)最早的奶牛育種中心，曾在國(guó)內(nèi)種公牛和優(yōu)秀奶牛繁育等方面處于國(guó)內(nèi)領(lǐng)先地位，但近年來(lái)奶牛場(chǎng)個(gè)體良莠不齊、繁殖率低，奶牛良種化水平幾乎成為制約我省乃至全國(guó)奶牛業(yè)轉(zhuǎn)型升級(jí)的瓶頸因素。奶牛先進(jìn)的高效育種生物技術(shù)體系——活體采卵（OPU）-體外受精（IVF）-胚胎移植（ET），因具有高效、安全、危害小的優(yōu)勢(shì)，目前正逐漸取代體內(nèi)胚胎生產(chǎn)技術(shù)，成為全球奶牛良種擴(kuò)繁的主要技術(shù)手段，同時(shí)也是我國(guó)真正實(shí)現(xiàn)奶牛良種自主獨(dú)立育種，進(jìn)而推進(jìn)“奶業(yè)振興”的重要手段。選取有價(jià)值的供體牛，實(shí)施規(guī)范的OPU操作和提高獲得的卵母細(xì)胞質(zhì)量與數(shù)量，是提高該技術(shù)體系效率的重要保障。但我國(guó)奶牛OPU技術(shù)工作起步較晚，省內(nèi)乃至國(guó)內(nèi)大部分相關(guān)企業(yè)、牧場(chǎng)對(duì)該技術(shù)較為陌生，且與成熟國(guó)家相比，生產(chǎn)效率仍存在一定進(jìn)步空間。因此，本規(guī)程依據(jù)國(guó)家相關(guān)法律和規(guī)范，結(jié)合我省實(shí)際和國(guó)內(nèi)外相關(guān)技術(shù)研究與應(yīng)用成果，旨在提供和規(guī)范牛OPU操作方法及其前期處理流程，制訂符合我省實(shí)際、可操作性強(qiáng)的牛OPU技術(shù)規(guī)程，能夠?yàn)镺PU-IVF-ET技術(shù)體系的推廣和克隆技術(shù)在奶牛育種上的應(yīng)用提供規(guī)范指導(dǎo)，提高良種奶?？焖贁U(kuò)繁的效率、全面提升奶牛場(chǎng)繁殖管理水平，促進(jìn)我省奶牛業(yè)高質(zhì)量發(fā)展重要價(jià)值。主要工作過(guò)程（1）標(biāo)準(zhǔn)調(diào)研、驗(yàn)證、起草階段（2024年6月1日—2024年11月30日）首先，根據(jù)項(xiàng)目組依托各項(xiàng)目支持在陜西、甘肅和寧夏地區(qū)多個(gè)實(shí)踐基地長(zhǎng)期持續(xù)開展的良種奶?？焖贁U(kuò)繁工作，對(duì)前期工作經(jīng)驗(yàn)、試驗(yàn)結(jié)果和科研成果進(jìn)行了總結(jié)歸納，初步明確了開展牛OPU工作所需的基本要求、供體牛篩選標(biāo)準(zhǔn)、供體牛飼養(yǎng)管理、卵巢刺激程序和OPU標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。另外，在標(biāo)準(zhǔn)制定前期，標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)編制組通過(guò)專題研究，進(jìn)行廣泛的調(diào)查，翻閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)資料及行業(yè)最新動(dòng)態(tài)，收集并學(xué)習(xí)了DB21T3493-2021牛體外受精胚胎生產(chǎn)及非手術(shù)法移植操作規(guī)程、DB53T447.5-2012BMY牛第5部分：體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范、GBT26938-2011牛體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程和T/DACS002-2021荷斯坦牛體型鑒定操作技術(shù)規(guī)范等，為后期規(guī)范技術(shù)指標(biāo)的制定提供了依據(jù)。試驗(yàn)驗(yàn)證：①2021年-2024年，標(biāo)準(zhǔn)編制組團(tuán)隊(duì)先后在寧夏興源達(dá)農(nóng)牧有限公司、寧夏沃野牧豐農(nóng)牧股份有限公司優(yōu)質(zhì)后備牛繁育基地、甘肅祁牧乳業(yè)和陜西草灘牧業(yè)建立“校-地-企”合作實(shí)踐基地，持續(xù)開展了基于OPU-IVF-ET技術(shù)體系的良種奶?？焖贁U(kuò)繁工作，截至目前共生產(chǎn)良種奶牛體外胚胎9000余枚，移植受體超6000頭，誕生良種后代近600頭。穩(wěn)定實(shí)施OPU超2000次。各實(shí)踐基地建設(shè)初期，均進(jìn)行了牛OPU室的設(shè)計(jì)規(guī)劃與建設(shè)改進(jìn)，滿足了OPU所需的場(chǎng)地、設(shè)施、設(shè)備和實(shí)際耗材等要求。②在各個(gè)牧場(chǎng)共累計(jì)開展了3萬(wàn)頭規(guī)模奶牛群良種供體牛的篩選工作，具體包括：評(píng)估奶牛歷史生產(chǎn)性能信息超10萬(wàn)條、評(píng)估DHI數(shù)據(jù)超5萬(wàn)條、實(shí)施線性鑒定超2萬(wàn)頭次、送檢并分析全基因組數(shù)據(jù)超500份和累計(jì)篩選良種供體奶牛約1500頭，總結(jié)了篩選準(zhǔn)確、評(píng)估完善、臨床可行的供體牛篩選與飼養(yǎng)管理方案，并建議牧場(chǎng)在育種上應(yīng)注重優(yōu)選優(yōu)育，并共同考慮奶產(chǎn)量因素與線性鑒定結(jié)果。③對(duì)供體奶牛實(shí)施超過(guò)2000頭次的卵巢刺激程序-OPU工作，總結(jié)了高效、穩(wěn)定、臨床操作簡(jiǎn)便的卵巢刺激程序和標(biāo)準(zhǔn)化牛OPU工作流程，實(shí)現(xiàn)每頭牛單次卵巢刺激獲得30-40個(gè)可見卵泡，OPU獲得可用卵母細(xì)胞25-30枚，其中優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞達(dá)75%以上，囊胚率達(dá)40%以上，最終得到可用胚胎4-5枚，各項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)均處于國(guó)際先進(jìn)水平；此外，對(duì)整體牛OPU技術(shù)流程進(jìn)行了牧場(chǎng)適應(yīng)性地調(diào)整優(yōu)化，能夠配合牧場(chǎng)日常管理，利于該技術(shù)體系在我國(guó)深度、廣泛推廣。④經(jīng)過(guò)上述的試驗(yàn)、驗(yàn)證等階段，形成了完整的?；铙w采卵技術(shù)規(guī)程，其科學(xué)、合理，可操作性強(qiáng)，并取得了良好效果。在充分調(diào)研和分析總結(jié)的基礎(chǔ)上，編制組經(jīng)過(guò)3次會(huì)議確定標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)內(nèi)容，起草本規(guī)范草案稿，完成標(biāo)準(zhǔn)初稿。（2）標(biāo)準(zhǔn)征求意見階段（2024年12月1日—2024年12月30日）標(biāo)準(zhǔn)初稿完成后，經(jīng)過(guò)內(nèi)部討論修改后，上報(bào)陜西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局，申請(qǐng)廣泛征求了行業(yè)專家及相關(guān)單位的意見，并根據(jù)反饋意見修改和完善，于2024年12月30日前形成標(biāo)準(zhǔn)送審稿。（3）標(biāo)準(zhǔn)審查階段（2025年1月1日—2025年2月30日）擬定于2024年1月份召開標(biāo)準(zhǔn)審查會(huì)，根據(jù)審查組專家意見修改和進(jìn)一步完善，在此基礎(chǔ)上，項(xiàng)目組完成標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿，上報(bào)陜西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局審查。標(biāo)準(zhǔn)編制原則和確定標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容編制原則本標(biāo)準(zhǔn)的編制遵循“先進(jìn)性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”的原則，注重突出技術(shù)性、可操作性，嚴(yán)格依據(jù)GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草。主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)主要包括以下5個(gè)部分：（1）范圍（2）規(guī)范性引用文件（3）術(shù)語(yǔ)和定義（4）采卵室基本要求（5）供體牛篩選與飼養(yǎng)管理（6）供體牛卵巢刺激前評(píng)估（7）供體牛卵巢刺激程序（8）OPU操作（9）卵母細(xì)胞分級(jí)鑒定與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性（國(guó)家、行業(yè)、地方）標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系本標(biāo)準(zhǔn)符合現(xiàn)行的法律、法規(guī)和強(qiáng)制性（國(guó)家、行業(yè)、地方）標(biāo)準(zhǔn)要求。本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有沖突。知識(shí)產(chǎn)權(quán)說(shuō)明：標(biāo)準(zhǔn)涉及的相關(guān)知識(shí)產(chǎn)權(quán)說(shuō)明本標(biāo)準(zhǔn)涉及自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)轉(zhuǎn)化，其涉及專利信息如下：專利類型：發(fā)明專利專利名稱：一種奶牛的精細(xì)化卵巢刺激方案及其應(yīng)用專利權(quán)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)專利申請(qǐng)?zhí)枺?02410739083.X專利進(jìn)入實(shí)質(zhì)審查階段時(shí)間：2024年09月24日采標(biāo)情況：采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度或與國(guó)內(nèi)同類標(biāo)準(zhǔn)水平的比較牛活體采卵的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)較為空白，可對(duì)比的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)僅有20214574-T-326牛體外胚胎生產(chǎn)和移植技術(shù)規(guī)程、DB21T3493-2021牛體外受精胚胎生產(chǎn)及非手術(shù)法移植技術(shù)操作規(guī)程、DB53T447.5-2012BMY牛第5部分：體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范等。但本規(guī)程與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)存在以下主要區(qū)別：①本規(guī)程為供體牛的篩選提供了標(biāo)準(zhǔn)和參考依據(jù)，目的是嚴(yán)格把控OPU的實(shí)施對(duì)象，真正優(yōu)選出具有優(yōu)良遺傳資源的供體母牛；②本規(guī)程重點(diǎn)規(guī)范了OPU必要的前期處理-卵巢刺激的程序和實(shí)施細(xì)節(jié)，為顯著提高OPU獲得的卵母細(xì)胞質(zhì)量、數(shù)量以及后續(xù)體外培養(yǎng)的囊胚率提供保障。）本標(biāo)準(zhǔn)參考了現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)GB/T26938-2011牛胚胎生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程和T/DACS002-2021荷斯坦牛體型鑒定操作技術(shù)規(guī)范，已在標(biāo)準(zhǔn)中注明。重大意見分歧的處理：包括處理過(guò)程、依據(jù)和結(jié)果本標(biāo)準(zhǔn)在編寫過(guò)程中沒(méi)有重大意見分歧。實(shí)施表現(xiàn)本標(biāo)準(zhǔn)的措施建議技術(shù)措施要求應(yīng)用本標(biāo)準(zhǔn)的奶