液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第9部分：桑黃

1液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第9部分：桑黃本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了桑黃液體菌種術(shù)語及定義、生產(chǎn)的基本要求、主要包括制作要求、生產(chǎn)工藝流程、質(zhì)量要求、技術(shù)要求、生產(chǎn)記錄與存檔等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于桑黃液體菌種的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB150.1壓力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB12728食用菌術(shù)語GB50073潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1液體菌種Liquidstrain用液體基質(zhì)培養(yǎng)的菌種即為液體菌種。3.2發(fā)酵罐fermentationbioreactor一種生物反應(yīng)器，是指為活細(xì)胞或酶提供適宜的反應(yīng)環(huán)境，讓他們進(jìn)行細(xì)胞增殖或生產(chǎn)的裝置系統(tǒng)。3.3發(fā)酵罐空消emptyfermentersterilization是指在發(fā)酵罐內(nèi)沒有放發(fā)酵液時(shí)，對(duì)整個(gè)空的罐體進(jìn)行滅菌消毒。3.4發(fā)酵罐實(shí)消fermentersterilization是指加入培養(yǎng)基后消毒滅菌。24生產(chǎn)要求生產(chǎn)要求應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。環(huán)境要求應(yīng)符合NY/T1731的規(guī)定。液體種發(fā)酵罐質(zhì)量應(yīng)符合GB150.1的規(guī)定。生產(chǎn)用水標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合GB5749的規(guī)定。4.1環(huán)境條件應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。4.2生產(chǎn)車間應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。4.3生產(chǎn)原料培養(yǎng)基生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的要求，化學(xué)投入品應(yīng)符合NY/T2375要求，天然材料要求新鮮、無霉變、無螨、無蟲、潔凈、干燥。4.4菌種選擇選用菌絲生長(zhǎng)旺盛、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強(qiáng)的菌種。5生產(chǎn)工藝5.1母種制備5.1.1培養(yǎng)基配方5.1.2母種培養(yǎng)基制作取新鮮去皮馬鈴薯200g切成小塊，加水煮沸20?30min，然后用紗布過濾，補(bǔ)充水至1000ml，加入瓊脂加熱攪勻，充分溶解后加入葡萄糖、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，溶解后分裝至試管，分裝量為試管長(zhǎng)度的1/3～1/2，使用硅膠塞封口，將試管置于高壓蒸汽滅菌鍋中，0.1Mpa滅菌30min，冷卻后擺放斜面。5.1.3接種與培養(yǎng)在無菌條件下，用接種工具取黃豆粒大小的初始菌種接種至母種培養(yǎng)基中，24℃~26℃避光培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿斜面后檢驗(yàn)合格即可使用。5.1.4母種質(zhì)量要求培養(yǎng)期間每天檢查，及時(shí)淘汰染菌或劣勢(shì)菌種。菌絲長(zhǎng)滿管后逐支進(jìn)行感官和菌絲微觀特征檢驗(yàn)，合格菌種進(jìn)入生產(chǎn)流程。5.2液體菌種配方3表1液體菌種培養(yǎng)基配方配方1葡萄糖20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氫鉀1.5g/L、硫酸鎂1g/L，pH自然配方2玉米粉20g/L、蛋白胨3g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L，pH自然配方3玉米粉20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氫鉀1g/L、硫酸鎂0.5g/L，pH自然5.3搖瓶液體菌種生產(chǎn)5.3.1培養(yǎng)基配制按液體培養(yǎng)基配方配制，混合均勻，裝入250mL、500mL或1000mL無色玻璃三角瓶中，裝液量宜為搖甁容量的1/4～1/3，瓶塞封口，并用報(bào)紙或牛皮紙包扎，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，在0.1Mpa下滅菌25min～30min。5.3.2接種待培養(yǎng)基冷卻至25℃以下，在無菌條件下，用接種工具挑取取塊徑3mm～5mm的菌塊迅速轉(zhuǎn)接于搖甁培養(yǎng)基內(nèi)，封口。5.3.3培養(yǎng)24℃~26℃條件下，靜置培養(yǎng)24h，然后置于搖床上震蕩暗光培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150r/min～160r/min，培養(yǎng)時(shí)間6d～9d。5.3.4搖瓶液體菌種質(zhì)量要求菌液澄清透明，菌球均勻密集，無異味，鏡檢無雜菌、菌絲形態(tài)正常。5.4發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.4.1培養(yǎng)基配制將配制好的培養(yǎng)基材料攪拌均勻，倒入或用泵抽入處理好的發(fā)酵罐中，加水定容至所需體積。培養(yǎng)基投料總量為罐體總?cè)莘e的60%~80%。擰緊上料口蓋，在0.1Ma壓力下滅菌40min~60min。5.4.2接種滅菌結(jié)束后培養(yǎng)基溫度冷卻至24℃以下，利用火焰保護(hù)接種，接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總體積的1%~2%。5.4.3培養(yǎng)根據(jù)菌絲生長(zhǎng)情況，適時(shí)調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，通入適量無菌空氣，同時(shí)調(diào)節(jié)排氣閥，維持罐壓培養(yǎng)具體要求如下：a）罐壓：0.02Mpa~0.05Mpa；b）罐溫：25℃±2℃;c）通氣量：1:0.5~1.2V/V（料液體積/空氣體積）；d）培養(yǎng)時(shí)間：6~9d。5.4.4質(zhì)量要求4每隔24h從取樣口取樣檢查1次，培養(yǎng)結(jié)束后肉眼觀察菌絲球密集、培養(yǎng)液澄清、無異味，鏡檢無雜菌。5.4.4.1感官要求采用“看、旋、嗅”的步驟進(jìn)行檢查，應(yīng)符合表1的規(guī)定。表2桑黃液體菌種感官要求5.4.4.2生理指標(biāo)5.4.4.2.1鏡檢5.4.4.2.1.1取樣接種前，在無菌操作狀態(tài)下將液體菌種取到滅菌后的三角瓶中。5.4.4.2.1.2裝片取一滴液體菌種，帶少量菌球，滴在載玻片上，蓋上蓋玻片。5.4.4.2.1.3觀察在400倍下觀察菌絲和液體的狀態(tài)，重點(diǎn)觀察菌絲分枝、隔膜、粗細(xì)、鎖狀聯(lián)合等是否正常，觀察是否有酵母菌、細(xì)菌等異常微生物。5.4.4.2.1.4判斷根據(jù)觀察結(jié)果，判斷是否染菌，做出檢測(cè)報(bào)告。5.4.4.2.2取樣接種取少量桑黃菌液，接種于霉菌、細(xì)菌和酵母菌專用培養(yǎng)基中，在22℃~26℃條件下恒溫培養(yǎng)2d～3d，觀察菌絲生長(zhǎng)情況。表3桑黃液體菌種生理指標(biāo)56貯藏桑黃液體菌種生產(chǎn)后應(yīng)立即使用，如不能立即使用應(yīng)進(jìn)行貯藏。貯藏條件：在