T-GXAS 488-2023 A型塞尼卡病毒與O型、A型、亞洲I型口蹄疫病毒鑒別檢測方法

GXASI 2 2 2 2 3 3 4 2本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1A型塞尼卡病毒與Ο型、A型、亞洲I型口蹄疫病毒鑒別檢測多重RT-PCR和多重qRT-PCR法NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范FMDV：口蹄疫病毒（Foot-andRT：反轉(zhuǎn)錄（ReverseTranscripPCR：聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReactRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscriptionPolymerqRT-PCR:實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（QuantitativeRealCt值：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)（Cyc的多重RT-PCR。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用，從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DN接受的熒光信號，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分2應(yīng)按照普通PCR儀和實(shí)時(shí)熒光PCR儀的不同型號選取合適的PCR和qRT-PCR擴(kuò)增試劑。組織樣品、水泡液、食道-咽喉分泌物(Ο-P液）等樣品采集按NY/T541執(zhí)行。9.1反轉(zhuǎn)錄（RT）39.2.1反應(yīng)體系的配制加完試劑后瞬時(shí)離心混勻。將PCR反應(yīng)管置于普通PCR儀內(nèi)，設(shè)置如下反應(yīng)參數(shù)：94℃3min；用重組質(zhì)粒pSVA-3D、pΟ-VP1、pAs412.1.2.1當(dāng)陰性對照無任何擴(kuò)增帶，而陽性對照在460bp、320bp、24注：多重RT-PCR檢測電泳圖見圖A.1根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整，以閾值線剛好超過正5ACAAGGCCCTCCATCTAGCCCCACGCACGTCATTGACACCCGCGCCGCGAGAGACCAGCCCAAGAGCACCCAAACCCACGGCGGTCTTGTGTGGTGTC6TTAAAGAATTTGGAAGCCAAACAGATTGCAGCTTCTCGAGTAGCY5-CCTACTTCAAACCAGGAAAACAGCTGAGGAYTTYGTGAGCFAM-AACGGTTCTTCAAAACCCACCTGTT-BHTXR-TGCCCCAGGCCACTACTGGCA-BJOE-CGAAAACATCACTGAGCTGCTGATCCG-7