《類器官在化學(xué)品毒性測試中的應(yīng)用技術(shù)規(guī)范（征求意見稿）》編制說明

——地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明一、目的意義開展化學(xué)物質(zhì)健康風(fēng)險評估是國家發(fā)展的重要需求2019年，國務(wù)院印發(fā)《關(guān)于實施健康中國行動的意見》，提出積極推進將健康融入所有政策；有效識別環(huán)境中的健康有害因素、開展精準(zhǔn)預(yù)防，是最經(jīng)濟、有效的健康策略。近年來，隨著經(jīng)濟飛速發(fā)展，以化學(xué)物污染為主的環(huán)境危害問題日益突出。據(jù)統(tǒng)計，僅2017年，環(huán)境有害因素導(dǎo)致我國死亡人數(shù)分別為：不良膳食風(fēng)險因素310萬、煙草250萬、空氣污染120萬、其他環(huán)境風(fēng)險因素40萬、職業(yè)風(fēng)險因素30萬，而許多環(huán)境因素的健康危害是可以預(yù)防和控制的。2022年，國務(wù)院辦公廳印發(fā)了《新污染物治理行動方案》，明確指出，“要研究制定化學(xué)物質(zhì)環(huán)境風(fēng)險篩查和評估方案，開展環(huán)境與健康危害測試和風(fēng)險篩查”。因此，開展化學(xué)物質(zhì)的環(huán)境暴露健康風(fēng)險評估尤為重要。長期以來，傳統(tǒng)的毒性測試主要通過對實驗動物（主要是嚙齒類動物）進行不同途徑、不同期限的染毒并檢測各種毒性終點的試驗，從而確定無害作用水平（NoObservedAdverseEffectLevel,NOAEL）、毒性類型、靶器官、劑量反應(yīng)關(guān)系。然而常規(guī)的毒性測試方法的耗時長、人力物力消耗巨大及由外推不確定性的局限性導(dǎo)致其在面對當(dāng)前日益嚴(yán)峻的環(huán)境化學(xué)物毒性測試評價中難以為繼，因此從3R原則到2007年美國國家研究委員會發(fā)布的《21世紀(jì)毒性測試：愿景與策略》（ToxicityTestinginthe21stCentury:AVisionandaStrategy），這不僅是對實驗動物福利的考慮，更是說明我們應(yīng)該提出全新的毒理學(xué)研究思路與毒性測試方法，從整體動物實驗為基礎(chǔ)逐漸轉(zhuǎn)向細(xì)胞體外測試與計算毒理相結(jié)合。在此背景下，我們可以利用構(gòu)效關(guān)系模型QSAR（quantitativestructure-activityrelationship）對化合物的毒性進行預(yù)測和評估；基于生理的藥代動力學(xué)模型（physiologicallybasedpharmacokineticmodelling,PBPK）則可以較好的實現(xiàn)高劑量到低計量的外推和預(yù)測化學(xué)在體內(nèi)的分布濃度。為實現(xiàn)該報告中的目標(biāo)，美國毒環(huán)保署（EPA）的Toxcast和Tox21項目，旨在對成千上萬的化學(xué)物進行高通量體外試驗，獲取高質(zhì)量、高精度毒性通路擾動數(shù)據(jù)，同時建立公共數(shù)據(jù)庫，開發(fā)基于高通量實驗數(shù)據(jù)的計算毒理學(xué)評估方法，為化學(xué)品毒性識別、風(fēng)險評估和AOP發(fā)展提供了扎實的基礎(chǔ)和巨大的便利。此外新的毒性測試方法也在不斷涌現(xiàn)，如高通量體外篩選、細(xì)胞成像技術(shù)和高內(nèi)涵篩選、組學(xué)方法（基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)）、生物信息學(xué)和可視化工具（如GeneSpring）、計算毒理學(xué)等，這些方法的提出和綜合應(yīng)用將大大減少化合物安全評估的成本和時間，顯著減少或盡可能避免大量的動物實驗。然而，上述新的毒性測試方法獲得的體外數(shù)據(jù)大多基于單個細(xì)胞系的研究，未能完全考慮到組織內(nèi)多個細(xì)胞的相互作用和影響。類器官在化學(xué)品毒性測試中的優(yōu)勢毒理學(xué)測試，先后經(jīng)歷了2D單層細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞球模型和類器官模型。2D細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞球模型常用單一的特定細(xì)胞系，與體內(nèi)多細(xì)胞組織及其生理功能差異較大。所謂類器官(organoid)，指的是由誘導(dǎo)多能干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞或成體干細(xì)胞在體外自組織并經(jīng)歷一定程度的細(xì)胞分化形成的3D結(jié)構(gòu)，具備體內(nèi)組織器官的部分典型功能，具有較為穩(wěn)定的表型和遺傳學(xué)特性。器官模型可模擬組織器官的復(fù)雜空間形態(tài)，突破了細(xì)胞間單純的物理接觸和聯(lián)系，表現(xiàn)出細(xì)胞間和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用，與體內(nèi)組織器官具有更相似的生理反應(yīng)。類器官模型與2D單層細(xì)胞模型或細(xì)胞球模型相比，能更好地用于模擬器官組織的發(fā)育過程及生理病理狀態(tài)，因而能更好地反映體內(nèi)毒性效應(yīng)。綜上所述，類器官在毒性測試中的包括以下優(yōu)勢：更接近人體：類器官的組織結(jié)構(gòu)和功能與人體器官相似，因此更接近人體反應(yīng)，可以更準(zhǔn)確地預(yù)測毒性。更快速：因類器官可在較短時間內(nèi)模擬器官的生長發(fā)育，因此可更快地獲得毒性測試結(jié)果。更經(jīng)濟：使用類器官進行毒性測試比使用動物進行測試更經(jīng)濟。更可靠：因在在相同的環(huán)境下使用類器官進行毒性測試，因此可減少測試結(jié)果的變異性。更易推廣：使用類器官開展毒性測試，可大幅度減少實驗動物的使用，更符合“3R”原則，因此更易推廣。建立類器官在化學(xué)品毒性測試中的技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)的必要性類器官模型構(gòu)建方法的改進及其標(biāo)準(zhǔn)化是類器官毒理學(xué)研究的根本任務(wù)。盡管類器官在模擬體內(nèi)器官形態(tài)和功能上相比2D細(xì)胞模型有了極大的提升，但和體內(nèi)組織器官的成熟度和復(fù)雜性仍有較大差距。在類器官的培養(yǎng)過程中，隨著細(xì)胞的大小和體積的增加，簡單擴散過程使得為核心部分細(xì)胞提供的氧氣和營養(yǎng)不足，核心部分細(xì)胞代謝廢物排出也受到限制。類器官通常缺乏基底、組織駐留免疫細(xì)胞和血管，限制了類器官的發(fā)育和成熟。此外，類器官變化迅速，在不同培養(yǎng)階段所需培養(yǎng)條件不同。優(yōu)化細(xì)胞組合類型、培養(yǎng)基組成以及結(jié)合微流控技術(shù)等有望改善類器官模型的功能。類器官的尺寸和細(xì)胞組成變異性較大，構(gòu)建方法標(biāo)準(zhǔn)化有助于改善毒理學(xué)評價結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。為滿足化學(xué)品毒理學(xué)評價的巨大需求，高產(chǎn)量構(gòu)建方法是類器官毒理學(xué)的基本要求。因此，建立類器官在化學(xué)品毒性測試中的技術(shù)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)的十分迫切且很有必要。二、任務(wù)來源江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)《類器官在化學(xué)品毒性測試中的應(yīng)用技術(shù)規(guī)范》由江蘇省市場監(jiān)督管理局于2023年7月份批準(zhǔn)立項（蘇市監(jiān)標(biāo)[2023]24號）。本地方標(biāo)準(zhǔn)由南京醫(yī)科大學(xué)提出，主要起草單位有南京醫(yī)科大學(xué)、同濟大學(xué)附屬東方醫(yī)院、蘇州市疾病預(yù)防控制中心。三、編制過程2023年7月，江蘇省市場監(jiān)督管理局同意《類器官在化學(xué)品毒性測試中的應(yīng)用技術(shù)規(guī)范》立項。項目團隊2023年8月召開研討會，對該標(biāo)準(zhǔn)的立項背景、編制目的、意義以及標(biāo)準(zhǔn)中涉及的技術(shù)要求等相關(guān)內(nèi)容進行了詳細(xì)介紹，項目團隊對初稿進行了深入的交流和討論，進一步明確了該項標(biāo)準(zhǔn)編制方向，規(guī)范了標(biāo)準(zhǔn)編寫格式。2023年8月團隊開展標(biāo)準(zhǔn)實驗和制定工作，包括腦、心、肺、腸、肝類器官的構(gòu)建和毒性評價方法的建立。2023年11月，項目團隊外請20位專家征求該標(biāo)準(zhǔn)意見，情況如下：①發(fā)送“征求意見稿”的單位/專家數(shù)20個，收到“征求意見稿”后，回函的單位/專家數(shù)20個，收到“征求意見稿”后，回函并有建議的單位/專家數(shù)20個，提出意見20條；②通過互聯(lián)網(wǎng)征集意見0條；③通過研討會、專家咨詢會征求意見0條；共收到意見34條，其中采納29條，部分采納2條，不采納3條；最終形成標(biāo)準(zhǔn)預(yù)審稿。2024年4月，本標(biāo)準(zhǔn)在江蘇省疾病預(yù)防控制中心召開預(yù)審會，預(yù)審專家包括朱寶立（江蘇省疾病預(yù)防控制中心）、倪春輝（南京醫(yī)科大學(xué)康達學(xué)院）、張婷（東南大學(xué)）、卞倩（江蘇省疾病預(yù)防控制中心）、徐酩（江蘇省疾病預(yù)防控制中心）及江蘇省衛(wèi)生健康標(biāo)委會秘書長楊丹丹、江蘇省衛(wèi)生健康標(biāo)委會秘書徐佳南等。與會專家對本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容高度認(rèn)可，并提出了中肯的修改意見。項目起草團隊對專家意見進行了逐一答復(fù)和修改。2024年6月-9月，組織3家有資質(zhì)的實驗室進行驗證。根據(jù)影響方法的精密度和準(zhǔn)確度的主要因素和數(shù)理統(tǒng)計學(xué)的要求，編制方法驗證報告，驗證數(shù)據(jù)主要包括檢出限、測定下限、精密度以及加標(biāo)回收率等。驗證單位及驗證人員信息如下：江蘇衛(wèi)生健康職業(yè)學(xué)院（王莉）、江蘇雅信昆成檢測科技有限公司（丁潔）、廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院（楊曉波、農(nóng)惠蕓）。四、主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了類器官（心、腦、肺、肝、腸）在化學(xué)品毒性測試中的技術(shù)規(guī)范。本標(biāo)準(zhǔn)適用于評價各類化學(xué)物對相應(yīng)組織系統(tǒng)的實驗原理、試劑耗材、儀器設(shè)備、試驗方法和類器官毒性測試評價。范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了類器官（腦、心、肺、腸、肝）在化學(xué)品毒性測試中的應(yīng)用技術(shù)規(guī)范。本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展各類化學(xué)品對相應(yīng)組織器官來源的類器官的毒性測試。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。術(shù)語和定義類器官（organoid）：由干細(xì)胞或前體細(xì)胞體外培養(yǎng)形成，由組織器官特異性的多種細(xì)胞組成，具有特定組織器官關(guān)鍵結(jié)構(gòu)和功能特性的三維細(xì)胞培養(yǎng)物。毒性測試（toxicitytesting）：給受試物進行不同途徑、不同時間的染毒，檢測各種毒性終點的實驗。實驗原理通過構(gòu)建腦、心、肺、腸、肝類器官，檢測化學(xué)品處理下，類器官各指標(biāo)的變化情況，以反映化學(xué)品相應(yīng)靶器官毒性大小。試劑和耗材試驗中所用的試劑，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑；所使用的水，在未說明規(guī)格時，應(yīng)符合GB/T6682中純水的規(guī)定。試劑和耗材宜包括但不限于：DMEM/F12培養(yǎng)基、PGM1多能干細(xì)胞培養(yǎng)基、Essential6?培養(yǎng)基、Neurobasal?-A培養(yǎng)基、小鼠肺類器官培養(yǎng)基、小鼠腸類器官培養(yǎng)基、小鼠肝類器官培養(yǎng)基、TeSR?E8?培養(yǎng)基、B27培養(yǎng)基；Matrigel基質(zhì)膠；Accutase消化液、EDTA溶液；胎牛血清（FBS）；細(xì)胞篩（30μm、70μm、100μm）；青霉素、鏈霉素、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（GDNF）、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）、B?27添加劑（不含維生素A）、成纖維細(xì)胞生長因子2（FibroblastGrowthFactor2，F(xiàn)GF2）、激活素A（ActivinA）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白4（BMP4）、6-[[2-[[4-（2，4-二氯苯基）-5-（5-甲基-1H-咪唑-2-基）-2-嘧啶]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶甲腈（CHIR?99021）、表皮生長因子（EGF）、中性蛋白酶（Dispase）、IV型膠原酶、ROCK抑制劑（Y-27632）、肝素、成纖維細(xì)胞生長因子9（FGF9）、4-[4-（1,3-苯并二氧雜環(huán)戊醇-5-基）-5-吡啶-2-基-1H-咪唑-2-基]苯甲酰胺（SB431542）、dorsomorphin、XAV-939、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺溶液（GlutaMAX）、神經(jīng)營養(yǎng)因子-3（NT-3）、Wnt-C59；磷酸鹽緩沖液（PBS）、紅細(xì)胞裂解液、DNA酶溶液；T25培養(yǎng)瓶（poly-HEMA包被）、Elplasia96孔板、低粘附孔板、細(xì)胞培養(yǎng)皿、transwell小室。儀器設(shè)備儀器設(shè)備至少應(yīng)包括：生物安全柜；激光共聚焦顯微鏡；離心機；細(xì)胞培養(yǎng)箱；低速圓周搖床；倒置顯微鏡；移液槍；無菌細(xì)胞培養(yǎng)皿；多功能酶標(biāo)儀； 醫(yī)用冰箱。試驗方法（類器官構(gòu)建、類器官毒性測試評價）類器官構(gòu)建腦類器官構(gòu)建腦類器官宜采用人胚胎干細(xì)胞H9構(gòu)建，培養(yǎng)于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中，通過定向分化為背側(cè)前腦類器官。當(dāng)H9干細(xì)胞生長匯合度約80%~90%后，用0.5mMEDTA溶液消化為單細(xì)胞，用含有10μMY27632的PGM1多能干細(xì)胞培養(yǎng)基重懸。將300μL共含有75萬個細(xì)胞的懸液轉(zhuǎn)移至Elplasia96孔板中（Elplasia96孔板需提前加入含有10μMY27632的PGM1多能干細(xì)胞培養(yǎng)基以500g×3min進行離心浸潤，排除微孔底部的空氣）。將孔板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6~12h后，觀察到干細(xì)胞形成邊緣光滑的球體后，轉(zhuǎn)移到低粘附的6孔板中。Day0~6背側(cè)前腦類器官形成：將培養(yǎng)基替換為預(yù)熱的Essential6?培養(yǎng)基（10μMSB431542、2.5μMdorsomorphin、2.5μMXAV-939、1%青霉素/鏈霉素），每孔2mL液體，前兩天維持穩(wěn)定不更換培養(yǎng)基，后面每天換液。D6~25背側(cè)前腦類器官擴增：將培養(yǎng)基替換為預(yù)熱的Neurobasal?-A培養(yǎng)基（含1%100×GlutaMAX、2%50×B27、1%青霉素/鏈霉素、20ng/mLEGF、20ng/mLFGF2），每孔2mL液體，前10天每天更換培養(yǎng)基液，后面九天隔天更換培養(yǎng)基。D25~D43背側(cè)前腦類器官分化：將培養(yǎng)基替換為預(yù)熱的Neurobasal?-A培養(yǎng)基（含1%100×GlutaMAX、2%50×B27、1%青霉素/鏈霉素、20ng/mLBDNF、20ng/mLNT3），每孔2mL液體，隔天換液。D44~:背側(cè)前腦類器官維持：將培養(yǎng)基替換為預(yù)熱的Neurobasal?-A培養(yǎng)基（含1%100×GlutaMAX、2%50×B27、1%青霉素/鏈霉素），每孔2mL液體，3~4天換液。心臟類器官構(gòu)建心臟類器官宜采用人胚胎干細(xì)胞H9構(gòu)建，培養(yǎng)于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中。使用Accutase消化液將H9細(xì)胞解離成單細(xì)胞并進行計數(shù)，并用含有10μMY27632的TeSR?E8?培養(yǎng)基重懸，然后以10000細(xì)胞/孔的量，將細(xì)胞接種到低吸附處理的96孔板中，300g離心4min。24h后（記為Day-1），更換不含Y27632的TeSR?E8?培養(yǎng)基24小時。Day0使用含有1ng/mLActivinA、1.25ng/mLBMP-4、4μMCHIR-99021的B27培養(yǎng)基（不含胰島素）處理24h。Day1更換B27培養(yǎng)基（不含胰島素）24h。Day2利用含有2μMWnt-C59的B27培養(yǎng)基（不含胰島素）培養(yǎng)2d。Day4更換B27培養(yǎng)基（不含胰島素）繼續(xù)培養(yǎng)2d。Day6更換B27培養(yǎng)基培養(yǎng)24h。Day7用2μMCHIR-99021的B27培養(yǎng)基處理1小時；之后每2d更換一次B27培養(yǎng)基，直到Day16培養(yǎng)結(jié)束。肺類器官構(gòu)建肺類器官宜采用小鼠肺組織構(gòu)建，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將小鼠用75%酒精徹底消毒皮膚，無菌分離肺組織并置于預(yù)冷的無菌PBS溶液中漂洗，清除結(jié)締組織及肺內(nèi)主支氣管，分離肺葉，清洗2次～3次去血。無菌鑷子轉(zhuǎn)移清洗后的肺葉于新的培養(yǎng)皿中，吸除殘留的PBS，用眼科手術(shù)剪將肺組織均勻剪成約1mm3的組織塊，轉(zhuǎn)移至預(yù)熱的膠原酶消化溶液中，37℃恒溫?fù)u床（100轉(zhuǎn)r/min）消化45min～60min。加入等量的含有10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻后，使用100μm細(xì)胞篩過濾；過濾液4℃300g離心5min，棄上清。加入3mL紅細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞沉淀，室溫孵育1min~2min，加入6mLDMEM/F12培養(yǎng)基混勻，4℃300g離心5min，棄上清；重復(fù)上述步驟2次，直至細(xì)胞沉淀變白。加入4mLDNA酶溶液（20U/mL）重懸細(xì)胞沉淀，室溫手搖3min～5min；加入6mLDMEM/F12培養(yǎng)基混勻，4℃300g離心5min，棄上清。按照2×107/mL細(xì)胞數(shù)量重懸于40μLMatrigel基質(zhì)膠中，并接種至24孔板中央。待Matrigel基質(zhì)膠凝固后，加入600μL小鼠肺類器官培養(yǎng)基，每隔2d天更換培養(yǎng)基，第14d即得到肺類器官。腸類器官構(gòu)建腸類器官宜采用小鼠腸組織構(gòu)建，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在靠近小鼠胃的一端取長度約20cm小腸，去除腸道絨毛、血管和脂肪。將腸段縱向切開，用預(yù)冷的PBS輕輕洗滌腸道，直至清洗干凈。將腸組織剪成2mm片段，用預(yù)冷的PBS反復(fù)沖洗，直至上清液澄清。除去上清液，將組織碎片重懸于4mL含有5mMEDTAPBS中。用槍頭吹打、重懸含有消化液的組織碎片，使組織反復(fù)穿過移液管以產(chǎn)生機械剪切力，從而使腸隱窩與基底層分離。加入4mL小鼠腸類器官培養(yǎng)基終止消化。用100μm細(xì)胞篩過濾組織懸液，過濾液4℃300g離心5min，棄上清。顯微鏡下計數(shù)腸隱窩數(shù)量。按照每10μLMatrigel基質(zhì)膠含200個～600個腸隱窩密度，接種至24孔板中。待Matrigel基質(zhì)膠凝固后，加入600μL小鼠腸類器官培養(yǎng)基，每隔2d更換培養(yǎng)基，第7d天即得到腸類器官。肝類器官構(gòu)建肝類器官宜采用小鼠肝組織構(gòu)建，置于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取小鼠肝臟，放入預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基中漂洗2次。使用無菌剪刀將肝臟剪碎至1mm3大小，轉(zhuǎn)移至離心管中，靜置2min后，去除上清。放入消化液10mL（Dispase、IV型膠原酶、DMEM/F12培養(yǎng)基，按1：1：6配比），37℃水浴20min。機械吹打后，靜置1min，去除上清。上述步驟重復(fù)3次，收集上清液，冰上保存。用70μm細(xì)胞篩過濾組織懸液，收集過濾液。用30μm細(xì)胞篩過濾，收集細(xì)胞篩網(wǎng)截留的肝細(xì)胞。按照2×107/mL細(xì)胞數(shù)量重懸于40μLMatrigel基質(zhì)膠中，并接種至24孔板中央。待Matrigel基質(zhì)膠凝固后，加入600μL小鼠肝類器官培養(yǎng)基，每隔2d更換培養(yǎng)基，第14d即得到肝類器官。類器官毒性測試評價評價方法采用類器官培養(yǎng)基，將受試化學(xué)品按一定比例（推薦1：4）逐級稀釋，生成具有梯度濃度的稀釋液。小心吸出培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基（不要觸碰膠滴），加入含受試化學(xué)品的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。根據(jù)類器官種類不同，檢測相應(yīng)的指標(biāo)，以反映化學(xué)品對類器官毒性的大小。評價指標(biāo)腦類器官檢測指標(biāo)應(yīng)包括但不限于下列內(nèi)容。a) 類器官生長速率。b) 檢測腦類器官標(biāo)志物表達水平，包括：1) 神經(jīng)元標(biāo)志物，如微管相關(guān)蛋白2（MAP2）；2) 膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，如膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）。心臟類器官檢測指標(biāo)應(yīng)包括但不限于下列內(nèi)容。a) 類器官生長速率。b) 檢測心類器官標(biāo)志物表達水平，包括：1)肌成纖維細(xì)胞，如鈣調(diào)蛋白（calponin）；2)內(nèi)皮細(xì)胞，如血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（CD31）、VE-鈣粘蛋白（CD144）。肺類器官檢測指標(biāo)應(yīng)包括但不限于下列內(nèi)容。a) 類器官生長速率。b) 檢測肺類器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：1)上皮標(biāo)志物，如上皮細(xì)胞粘附分子（EpCAM）；2)增殖標(biāo)志物，如Ki-67；3)分化標(biāo)志物，如AcetylatedTubulin。腸類器官檢測指標(biāo)應(yīng)包括但不限于下列內(nèi)容。a) 類器官生長速率。b) 檢測腸類器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：1) 杯狀細(xì)胞，如黏蛋白2（Muc2）；2) 潘氏細(xì)胞，如溶菌酶（Lyz）；3) 吸收細(xì)胞，如鈣調(diào)肌動蛋白（Villin）。肝類器官檢測指標(biāo)應(yīng)包括但不限于下列內(nèi)容。a) 類器官生長速率。b) 檢測肝類器官分子標(biāo)志物變化水平，包括：1) 白蛋白（ALB）；2) 甲胎蛋白（AFP）；3) 細(xì)胞角蛋白19（CK19）。五、技術(shù)指標(biāo)確定的依據(jù)適應(yīng)性：貫徹國家的法律、法規(guī)、方針、政策及國家、行業(yè)地方強制性標(biāo)準(zhǔn)。積極采取國家、行業(yè)、地方推薦性標(biāo)準(zhǔn)；企業(yè)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)有在確定必要時才能制定，避免沒有實際意義的要求形成標(biāo)準(zhǔn)。可行性：全世界每天新增約26萬種新化學(xué)物，絕大多數(shù)化學(xué)物未經(jīng)過毒理學(xué)安全評價就應(yīng)用到生產(chǎn)生活中，并可通過多種途徑進入人體，增加人群健康風(fēng)險。據(jù)世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)統(tǒng)計，每年因環(huán)境污染導(dǎo)致的死亡人數(shù)超1400000人。因此，亟需開展化學(xué)物對健康危害評估，以較好地識別高危高毒性化學(xué)物，保護我國人民健康。類器官因具有天然的組織同源性及結(jié)構(gòu)功能相似性，建立標(biāo)準(zhǔn)化的類器官構(gòu)建方法和相應(yīng)的毒性測試流程具有較大的市場潛能。六、重大分歧意見的處理過程和依據(jù)無。七、與相關(guān)法律法規(guī)和國家標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)符合相關(guān)法律法規(guī)要求，目前尚無相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。八、推廣實施建議可用于醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)、化學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域，用于類器官（心、腦、肺、肝、腸）在化學(xué)品毒性測試中的技術(shù)規(guī)范。九、起草單位和起草人員信息及分工起草單位信息南京醫(yī)科大學(xué)：南京醫(yī)科大學(xué)是國家“雙一流”建設(shè)高校，首批教育部、國家衛(wèi)生健康委與江蘇省人民政府共建醫(yī)學(xué)院校，教育部高水平公共衛(wèi)生學(xué)院建設(shè)高校，江蘇高水平大學(xué)建設(shè)高峰計劃A類建設(shè)高校；學(xué)校擁有國家重點學(xué)科3個、國家重點（培育）學(xué)科1個、國家臨床重點?？?4個、江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科（四期）6個。在新一輪全國學(xué)科評估中整體實力穩(wěn)中有進；13個學(xué)科位列ESI全球排名前1%，其中，臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科、藥理學(xué)與毒理學(xué)學(xué)科位列ESI全球排名前1‰。學(xué)校建有生殖醫(yī)學(xué)與子代健康全國重點實驗室、環(huán)境與人類健康國際聯(lián)合研究中心、腫瘤個體化醫(yī)學(xué)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心等30多個國家級、省部級重點實驗室（工程研究中心、創(chuàng)新中心）。擁有國內(nèi)一流的醫(yī)學(xué)模擬教育中心和江蘇省醫(yī)藥動物實驗基地，建有省內(nèi)唯一的省級衛(wèi)生政策智庫—江蘇省健康研究院。學(xué)校積極面向生命健康領(lǐng)域的國家重大需求，組建了基礎(chǔ)科學(xué)中心、創(chuàng)新研究群體等重大科技創(chuàng)新團隊；承擔(dān)各類重大、重點國家科技計劃項目近百項；代表性研究成果在《自然》《科學(xué)》等頂級學(xué)術(shù)期刊發(fā)表，獲得了以國家自然科學(xué)二等獎為代表的一批國家級和省部級科研成果獎項。同濟大學(xué)附屬東方醫(yī)院：始建于1920年，是一個集醫(yī)療、教學(xué)和科研于一體的大型三級甲等綜合性醫(yī)院，全國文明單位，2023年入選上海公立醫(yī)院黨建工作“示范醫(yī)院”創(chuàng)建單位。東南大學(xué)：東南大學(xué)現(xiàn)有36個院系、90個本科專業(yè)，有41個博士學(xué)位一級學(xué)科授權(quán)點、52個碩士學(xué)位一級學(xué)科授權(quán)點，有10個博士專業(yè)學(xué)位授權(quán)點類別、30個碩士專業(yè)學(xué)位授權(quán)點類別。有全日制在校生40220人，其中本科生16931人，研究生23289人；在校留學(xué)生2005人，其中學(xué)歷留學(xué)生1750人。學(xué)校建有四牌樓、九龍湖、丁家橋等校區(qū)，占地面積5888畝，其中九龍湖校區(qū)3752.35畝，總建筑面積約90.89萬平方米。學(xué)校圖書館面積6.69萬平方米，藏有各類紙本圖書資料478萬冊，可訪問數(shù)據(jù)庫檢索平臺149個（二級數(shù)據(jù)庫234個）。學(xué)校還設(shè)有無錫校區(qū)和蘇州校區(qū)。東南大學(xué)是一所以工科為主要特色的綜合性、研究型大學(xué)，涵蓋哲學(xué)、經(jīng)濟學(xué)、法學(xué)、教育學(xué)、文學(xué)、理學(xué)、工學(xué)、醫(yī)學(xué)、管理學(xué)、藝術(shù)學(xué)、歷史學(xué)等多個學(xué)科。學(xué)校12個