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[8-10]。2.3.3棉花幼苗脅迫環(huán)境下抗氧化酶試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定棉花幼苗在鹽脅迫環(huán)境下,需要采用各種過(guò)氧化酶對(duì)棉花幼苗中的細(xì)胞膜進(jìn)行破壞性測(cè)試,進(jìn)而獲得幾種棉花幼苗抗鹽的能力的差異性[11-12]。(1)MDA含量測(cè)定:稱取樣品1g,加少許石英砂,加入三氯乙酸研磨,將提取液3000r?min-1離心,離心時(shí)間設(shè)置10min,上清液保存?zhèn)溆茫蝗?mL上清液,加入硫代巴比妥酸(TBA),充分混勻,30min沸水浴自然冷卻離心處理10min·3000
r?min-1。取適量上清,分別于600nm、532nm、450nm三個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。(2)POD含量測(cè)定:加入20mmol/L的KH2PO4溶液對(duì)0.2g棉花幼苗的新鮮葉片進(jìn)行溶解搖勻,采用離心機(jī)(12000rpm)離心15分鐘,提取上部液體,采用紫外光/可見(jiàn)光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)試記錄。2.3.4棉花幼苗鹽脅迫環(huán)境下滲透物質(zhì)試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定棉花幼苗在此項(xiàng)測(cè)試中主要是對(duì)可溶性糖(SS)、游離脯氨酸(Pro)等物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,(1)游離脯氨酸(Pro)含量測(cè)定:從每個(gè)處理組中取0.5g凍干粉并加入燒杯中,然后將5ml3%的磺基水楊酸溶液加入燒杯中。充分混合,然后在水浴中加熱15分鐘,以制備提取物。將2ml冰醋酸和2ml的茚三酮酸性溶液添加到制備的提取物中,并將溶液搖勻。再次將其放入水浴中,加熱0.5h以顯色。冷卻溶液,加5ml甲苯,然后在無(wú)光線的環(huán)境中放置5h。提取甲苯層并測(cè)量520nm處的吸光度。使用上述方法的步驟,對(duì)各種濃度的脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行顯色。測(cè)量吸光度以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,并通過(guò)外標(biāo)法測(cè)量葉片中的Pro含量。(2)可溶性糖(SS)含量測(cè)定:采用蒽酮乙酸乙酯法以及考馬斯亮藍(lán)法等測(cè)試方法,使用到的試劑及工具主要是蒸餾水以及離心機(jī)[13-14]。摘取新鮮棉花葉片0.1g,放置在玻璃試管內(nèi),加5ml蒸餾水,然后加塞煮沸45分鐘,提取過(guò)濾至25ml容量瓶?jī)?nèi),吸取0.5ml試液,在加入蒸餾水進(jìn)行測(cè)定。3結(jié)果分析3.1鹽脅迫環(huán)境對(duì)棉花幼苗生長(zhǎng)結(jié)果分析鹽脅迫環(huán)境對(duì)棉花幼苗出苗率的影響:在0.6%鹽濃度環(huán)境下,4種測(cè)試種子出苗率均超過(guò)75%,海島棉與陸地棉差異不明顯。在0.8、1.0%鹽濃度環(huán)境下,四個(gè)品種的出苗率均出現(xiàn)了明顯的下降趨勢(shì),一些幼苗出苗后出現(xiàn)了死亡的現(xiàn)象。陸地棉與海島棉的出苗率在高濃度的環(huán)境下,出苗率出現(xiàn)明顯的差異,海島棉要優(yōu)于陸地棉,在1.0%鹽濃度下,出苗率可以達(dá)到65%、45%,而陸地棉在該環(huán)境下的出苗率僅僅為23%、35%。隨著鹽濃度從0%-1%的升高,海島棉和陸地棉的株高均下降(見(jiàn)表1)。在0.8鹽濃度環(huán)境下,新陸早50株高變化最為明顯,達(dá)3.81cm。同濃度下相比,陸地棉的株高要高于海島棉。通過(guò)數(shù)據(jù)對(duì)比也能發(fā)現(xiàn),在0.6%鹽濃度下,對(duì)四個(gè)品種的鮮重影響都比較小,當(dāng)濃度逐漸上升后,幼苗鮮重開(kāi)始明顯下降。同濃度對(duì)比,海島棉的稱重影響要小于陸地棉。圖1鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗出苗率的影響表1鹽脅迫環(huán)境下海島棉、陸地棉幼苗生長(zhǎng)影響品種鹽濃度%株高鮮重(g/株)干重(g/株)新海21017.322.350.410.615.332.090.380.812.881.700.28111.651.310.22新海34015.022.220.350.612.391.590.280.89.761.090.2018.390.590.12新陸早50019.012.200.360.615.011.530.230.811.200.930.1619.590.280.10新陸早57016.792.250.360.613.491.660.250.810.621.120.1819.260.480.103.2鹽脅迫環(huán)境對(duì)棉花幼苗光合作用結(jié)果分析通過(guò)檢測(cè),鹽濃度環(huán)境發(fā)生變化后,棉花幼苗葉片中的葉綠素含量也發(fā)現(xiàn)了變化,表2為幼苗葉片葉綠素測(cè)定結(jié)果,通過(guò)數(shù)據(jù)對(duì)比也能發(fā)現(xiàn),在0.6%鹽濃度下,四個(gè)品種的葉綠素影響都比較小,當(dāng)濃度逐漸上升后,葉綠素的含量開(kāi)始明顯下降,海島棉的葉綠素含量要優(yōu)于陸地棉,光合作用也比較好。在鹽脅迫的環(huán)境下,棉花幼苗的葉綠素含量出現(xiàn)了下降,尤其是高濃度環(huán)境下,對(duì)幼苗光合作用的影響更是明顯,海島棉兩個(gè)品種的幼苗葉綠素含量的降低水平要由于陸地棉,并且在1.0%濃度環(huán)境下,陸地棉兩個(gè)品種的葉片葉綠素測(cè)量已經(jīng)檢測(cè)不出來(lái),海島棉兩個(gè)品種更加適合在鹽漬化土壤環(huán)境下生長(zhǎng),在一定鹽濃度環(huán)境下,該品種的棉花還可以進(jìn)行正常的光合作用,進(jìn)而保證了棉花的生長(zhǎng)。表2鹽脅迫環(huán)境下海島棉、陸地棉幼苗葉綠素影響品種鹽濃度%葉綠素a(mg/g)葉綠素b(mg/g)總?cè)~綠素(mg/g)新海2101.660.452.110.61.300.361.660.80.800.281.0810.600.170.77新海3402.500.793.290.61.840.552.390.81.650.432.0810.670.260.93新陸早5002.110.822.930.61.500.502.000.80.880.301.181///新陸早5702.010.902.910.61.510.612.120.80.890.391.281///3.3鹽脅迫環(huán)境對(duì)棉花幼苗抗氧化酶結(jié)果分析丙二醛(MDA)對(duì)比分析;在鹽脅迫環(huán)境下,棉花幼苗葉片的組織通過(guò)反應(yīng)分解出MDA,通過(guò)檢測(cè)可以得出,海島棉與陸地棉的MDA含量在鹽濃度上升后,但是,陸地棉MDA含量增加的幅度要高于海島棉,鹽濃度上升越快,增加幅度越高。(2)過(guò)氧化酶(POD)測(cè)試對(duì)比;通過(guò)檢測(cè),棉花幼苗的POD活性在鹽濃度逐步增加后,POD呈現(xiàn)出先上升后下降的狀態(tài),在0.6%鹽濃度環(huán)境下,四個(gè)品種的葉片POD值均達(dá)到峰值,然后活性逐步下降。圖2鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗葉片中MDA含量影響圖3鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗葉片中POD含量影響在正常農(nóng)業(yè)土壤環(huán)境下,棉花根莖葉中的超氧陰離子處于動(dòng)態(tài)平衡下,對(duì)棉花自身的細(xì)胞不會(huì)產(chǎn)生傷害,一旦離子自由基出現(xiàn)變化,會(huì)導(dǎo)致植物的細(xì)胞膜出現(xiàn)氧化反應(yīng),進(jìn)而產(chǎn)生POD等產(chǎn)物。植物自身的氧化酶會(huì)通過(guò)一系列的反應(yīng)將超氧陰離子代謝反應(yīng)成水,進(jìn)而為自身的生長(zhǎng)提供環(huán)境。在本次試驗(yàn)過(guò)程中,0.6%鹽濃度下,幾個(gè)測(cè)試品種的反應(yīng)均比較好,也說(shuō)明在該環(huán)境下,棉花作物可以正常的生長(zhǎng),活性氧積累的含量不好超過(guò)太多,都具有耐鹽的能力。當(dāng)鹽濃度上升后,陸地棉品種的耐鹽能力則大大降低,遠(yuǎn)不如海島棉的耐鹽能力。3.4鹽脅迫環(huán)境對(duì)棉花幼苗滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)結(jié)果分析(1)游離脯氨酸(Pro):海島棉與陸地棉對(duì)比分析,棉花幼苗Pro含量在不同鹽濃度的環(huán)境下呈現(xiàn)出不斷增加的狀態(tài),0.6%鹽濃度下海島棉、陸地棉四個(gè)品種Pro含量比0狀態(tài)下上升了45%、39%、20.5%、14%;在0.8%鹽濃度下比0濃度下上升了79%、59%、38%以及27%,這也表明,在不同鹽濃度環(huán)境下,海島棉的Pro含量均要比陸地棉的含量要高。(2)可溶性糖(SS):在鹽脅迫環(huán)境下,四個(gè)測(cè)試棉花幼苗的SS含量在前期處于增加的狀態(tài),當(dāng)鹽濃度到0.8%、1.0%鹽濃度環(huán)境下成型先上升后下降的趨勢(shì),棉花幼苗葉片中的SS含量在0.6%濃度下為最高值,通過(guò)測(cè)試也能發(fā)現(xiàn),海島棉的耐鹽性要優(yōu)于陸地棉。圖4鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗葉片中Pro含量影響圖5鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗葉片中SS含量影響棉花植物的滲透調(diào)節(jié)是由于在鹽脅迫環(huán)境下產(chǎn)生的反應(yīng),通過(guò)自身主動(dòng)的滲透調(diào)節(jié)來(lái)保證細(xì)胞液的濃度,進(jìn)而適應(yīng)環(huán)境,本次試驗(yàn)中,棉花幼苗在鹽脅迫環(huán)境下,體內(nèi)主動(dòng)產(chǎn)生了一些物質(zhì)降低了鹽脅迫環(huán)境對(duì)自身細(xì)胞上海,并且海島棉的根系中脯氨酸的含量降低比較明顯,葉片中的脯氨酸含量增加比較顯著。可溶性糖則是棉花幼苗生長(zhǎng)能量的來(lái)源,在鹽脅迫環(huán)境下,棉花幼苗中的可溶性糖處于增加狀態(tài),當(dāng)濃度不斷上升,可溶性糖的含量不斷下降,這是由于棉花幼苗自身呼吸作用導(dǎo)致的。在本次試驗(yàn)當(dāng)中,鹽脅迫環(huán)境下,棉花幼苗的幾個(gè)品種滲透調(diào)節(jié)都出現(xiàn)了失衡的狀態(tài),棉花的幼苗需要提升自身的可溶性糖以及其他的物質(zhì)來(lái)增強(qiáng)抗鹽性,鹽濃度處于0.6%的環(huán)境下,幾種棉花幼苗有具有很好的滲透調(diào)節(jié)能力,能夠抵抗鹽脅迫環(huán)境,但是當(dāng)鹽濃度上升后,棉花幼苗的抗鹽性則大大降低,但是本次試驗(yàn)也表明,海島棉的抗鹽性要由于陸地棉,品種的差異性比較明顯。4結(jié)論農(nóng)業(yè)一直國(guó)家重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容,農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量以及質(zhì)量一直受到人們的重點(diǎn)關(guān)注,我國(guó)自身也是農(nóng)業(yè)大國(guó),農(nóng)用土地的整治處理一直是難點(diǎn)以及重點(diǎn),為此,我們也在不斷的對(duì)抗鹽作物進(jìn)行優(yōu)選。鹽堿對(duì)于農(nóng)作物的產(chǎn)量有著極大的影響,對(duì)農(nóng)業(yè)的發(fā)展產(chǎn)生了較大的影響。棉花屬于抗鹽作物,但是在不同生長(zhǎng)階段其耐性也存在差異性。本文對(duì)鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗的生長(zhǎng)以及各項(xiàng)生長(zhǎng)特性開(kāi)展了研究:(1)棉花幼苗在鹽脅迫環(huán)境生長(zhǎng)的影響;在鹽脅迫環(huán)境下,四個(gè)品種的棉花幼苗生長(zhǎng)受到了較大的影響,并且鹽濃度上升后,幼苗生長(zhǎng)的影響更大,在0.6、0.8、1.0%三個(gè)鹽濃度的試驗(yàn)環(huán)境下,陸地棉以及海島棉的出苗、株高、鮮重以及干重等均時(shí)呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì),鹽濃度越高,下降的趨勢(shì)越明顯。在1.0%鹽濃度的環(huán)境下,棉花幼苗的第一片真葉損害比較嚴(yán)重,并且海島棉與陸地棉的葉片形狀也存在差異性,葉片總體比較小、并且出現(xiàn)了發(fā)黃枯萎的現(xiàn)象,海島棉與陸地棉在高濃度鹽脅迫環(huán)境下葉片還表現(xiàn)了增厚的現(xiàn)象。(2)鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗葉片中葉綠素以及光合作用受到的影響;在鹽脅迫的環(huán)境下,幾種棉花幼苗的葉片葉綠素含量以及光合作用特性都有一定的影響,在0.6%鹽濃度環(huán)境下,測(cè)試的棉花幼苗葉片的葉綠素含量的下降相對(duì)不明顯,但是鹽濃度上升后,陸地棉受到的影響要大于海島棉。(3)鹽脅迫環(huán)境下棉花幼苗抗氧化酶以及滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)變化分析;在鹽脅迫環(huán)境下,幾種品種的棉花幼苗均存在滲透調(diào)節(jié)失衡的現(xiàn)行,在高濃度環(huán)境下,幼苗的損失均比較大,但是在0.6%鹽濃度環(huán)境下,海島棉幼苗的反應(yīng)機(jī)制更加靈敏,也能比較好的適應(yīng)鹽環(huán)境。鹽脅迫環(huán)境下的棉花幼苗生長(zhǎng)試驗(yàn)對(duì)棉花品種的耐鹽性以及選種具有較好的研究意義,通過(guò)試驗(yàn)也能篩選出耐鹽性比較好的品種,為棉花在鹽漬化農(nóng)用地中的高產(chǎn)提供一定的建議。本次試驗(yàn)通過(guò)盆栽的方式對(duì)種子的發(fā)芽、滲透調(diào)節(jié)等進(jìn)行了研究,能夠模擬棉花在鹽堿地環(huán)境的生長(zhǎng)情況,但是,對(duì)于棉花在開(kāi)花結(jié)果等方面未進(jìn)行深入的研究,也需要進(jìn)一步的開(kāi)展研究,分析不同棉花品種在不同鹽脅迫環(huán)境下產(chǎn)生的耐鹽性差異。參考文獻(xiàn)[1]阿曼古麗·買買提阿力,拉扎提·努爾布拉提,高麗麗,等.鹽脅迫對(duì)海島棉和陸地棉幼苗生長(zhǎng)及生理特性的影響[J].植物學(xué)報(bào),2017,52(4):465-473.[2]阿曼古麗·買買提阿力,王立紅,鄭慧,等.鹽脅迫對(duì)海島棉幼苗生長(zhǎng)的影響[J].干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究,2017,35(2):121-126.[3]陳亞華,沈振國(guó),劉友良,等.NaCl脅迫下棉花幼苗的離子平衡[J].棉花學(xué)報(bào),2016,13(4):225-229.[4]方志紅,董寬虎.NaCl脅迫對(duì)堿蒿可溶性糖和可溶性蛋白含量的影響[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(16):147-149.[5]馮棣,張俊鵬,孫池濤,等.不同生育階段鹽分脅迫對(duì)棉花生長(zhǎng)和水分生理指標(biāo)的影響[J].生態(tài)學(xué)雜志,2014(5):1195-1199.[6]AlaminM,ZengDD,SultanaMH,etal.Photosynthesis,cellulosecontentsandultrastructurechangesofmutantriceleadingtoscrewflagleaf[J].Plantgrowthregulation,2018,85(1):1-13.[7]高麗麗,拉扎提,田立文,等.鹽脅迫對(duì)海島棉和陸地棉幼苗生長(zhǎng)及生理特性的影響[J].植物學(xué)報(bào),2017,52(4):465-473.[8]高俊鳳.植物生理學(xué)試驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京:高等教育出版社,2006.[9]郭麗麗,郝立華,賈慧慧,等.NaCl脅迫對(duì)兩種番茄氣孔特征、氣體交換參數(shù)和生物量的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2018,29(12):3949-3958.[10]羅以篩.鹽脅迫下植物質(zhì)膜和液泡膜H+-ATPase活性的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(3):1263-1265.[11]高雁,婁愷,李春.
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