《長三角地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素抗性菌株的產(chǎn)生及污染問題研究》7800字（論文）

第頁共10頁長三角地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素抗性菌株的產(chǎn)生及污染問題研究1引言 22水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素抗性菌株的產(chǎn)生及污染 22.1抗性菌株的產(chǎn)生 22.2抗性基因的污染來源 33水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗性基因的傳播擴散及方法 43.1抗性基因的傳播擴散 43.2抗性基因的檢測方法 64開展此研究的必要性 7結(jié)論 8參考文獻 9摘要：我國是世界第一水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，約占世界養(yǎng)殖總產(chǎn)量的70%.但近年來由于水產(chǎn)養(yǎng)殖污染加劇，造成養(yǎng)殖環(huán)境質(zhì)量不斷惡化,導(dǎo)致病原生物種類增多和傳播速度加快，養(yǎng)殖病害日趨嚴重，水產(chǎn)養(yǎng)殖中的病害問題特別是細菌性病害在密集型養(yǎng)殖系統(tǒng)中發(fā)生頻繁且影響嚴重，這極大地限制了我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，目前病害防治的主要方法是使用抗生素類藥物。本文選取著名的水產(chǎn)養(yǎng)殖地——長三角作為研究對象，分析抗生素造成污染的原因。關(guān)鍵詞：抗生素；抗性菌株；長三角地區(qū)1引言抗生素除了防治疾病之外，還有促進生長以及節(jié)約營養(yǎng)成分等方面的作用.目前抗生素作為飼料添加劑在動物養(yǎng)殖業(yè)中使用非常普遍.抗生素的長期濫用很可能會誘導(dǎo)動物體內(nèi)產(chǎn)生抗生素抗性基因(Antibioticsresistancegenes,ARGs),ARGs經(jīng)排泄后將對養(yǎng)殖區(qū)域及其周邊環(huán)境造成潛在基因污染.目前在不同的環(huán)境介質(zhì)如水體、沉積物、水生生物和細菌體內(nèi)等均已檢出ARGs的存在，并且有研究還發(fā)現(xiàn)ARGs能夠通過可移動的遺傳元件(Geneticmobileelements)在細菌之間傳播，進而在環(huán)境中擴散，這將會對公共健康和食品安全構(gòu)成嚴重的威脅.針對以上問題，本文對抗生素抗性基因在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的來源、污染現(xiàn)狀、潛在的傳播途徑及其機制和相關(guān)的檢測方法進行了系統(tǒng)綜述，并指出了當前形勢下我國開展水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗生素抗性基因研究的必要性和重要性，建議政府和有關(guān)機構(gòu)盡快開展水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗生素抗性基因的污染機理與控制對策研究。2水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素抗性菌株的產(chǎn)生及污染2.1抗性菌株的產(chǎn)生目前，由于缺乏科學(xué)的管理和相應(yīng)制度上的制約，一些養(yǎng)殖業(yè)主盲目追求產(chǎn)量，長期在飼料中添加抗生素以促進生長，因此近年來抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的濫用現(xiàn)象越來越嚴重，直接后果是在水產(chǎn)環(huán)境和養(yǎng)殖動物體內(nèi)誘導(dǎo)出抗性菌株.Kerry等(1996)從美國東南部的水產(chǎn)養(yǎng)殖池塘中.分離出了革蘭氏陰性菌(主要是類志賀鄰單胞菌和嗜水氣單胞菌)，發(fā)現(xiàn)與未使用抗生素的河流相比，使用過抗生素的池塘中抗四環(huán)素、氯霉素、氨比西林和呋喃妥英的抗性細菌的數(shù)量明顯增多.其他相關(guān)研究也證明在使用過抗生素后，抗性菌株普遍存在1990年前英國在漁業(yè)生產(chǎn)上從未使用過阿莫西林，因此在這以前從水產(chǎn)養(yǎng)殖地區(qū)分離的殺鮭氣單胞菌均對阿莫西林敏感;幾年之后阿莫西林開始用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，結(jié)果在一次癤病爆發(fā)中分離出了抗阿莫西林的菌株。隨著各種抗生素的過度使用，細菌對抗生素的抗藥性已由單一抗藥逐漸發(fā)展為多重抗藥，目前的研究也發(fā)現(xiàn)大多數(shù)抗性菌株的表現(xiàn)型為多重抗藥性.多重抗藥就是(MultipleDrugResistance,MDR)系指一種微生物同時對多種常用的抗生素類藥物產(chǎn)生抗藥性(張偉等，2008).細菌多重抗藥性的產(chǎn)生與環(huán)境中的抗生素多重選擇的壓力密切相關(guān).Novick(1981)指出在動物養(yǎng)殖業(yè)中使用亞治療劑量的抗生素也會促進產(chǎn)生多重抗藥性菌株.已有很多研究報道在水產(chǎn)養(yǎng)殖場的動物體內(nèi)和環(huán)境中發(fā)現(xiàn)多重抗藥菌株的存在.Tendencia和DeLaPena(2001)在菲律賓的一個養(yǎng)蝦池塘中發(fā)現(xiàn)與未使用過抗生素的池塘比較，使用過惡喹酸的蝦塘里抗多重藥物(至少兩種)的弧菌很常見.Schmidt等(2000)從虹鱒魚養(yǎng)殖場分離出的氣單胞菌株除了抗四環(huán)素外，大部分也抗磺胺嘧啶或甲氧芐氨嘧啶;Jun等(2004)從韓國患流行病的養(yǎng)殖魚(包括比目魚和鰻魚)體內(nèi)分離得到127個臨床菌株，其中有20個抗四環(huán)素的愛德華遲鈍菌株，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)20個菌株都具有多重抗藥性，除了抗四環(huán)素外，這些菌株對惡喹酸、萘啶酸、氯霉素、氨比西林、卡那霉素和鏈霉素等抗生素也有抗性;Penders和Stobberingh(2008)在荷蘭南部的室內(nèi)鯰魚和鰻魚飼養(yǎng)場利用能動氣單胞菌作為指示細菌測定出氨比西林和土霉素的抗藥率是100%，磺胺甲惡唑是24%，甲氧芐氨嘧啶是3%，環(huán)丙沙星和氯霉素分別是10%.由此可見在使用過抗生素的環(huán)境中普遍存在著多重抗藥性菌株。細菌多重耐藥性的產(chǎn)生除了與環(huán)境中多種抗生素同時存在產(chǎn)生的選擇壓力有關(guān)外，主要原因是多重抗藥性基因可以在環(huán)境中微生物之間進行連鎖傳播，推測其機制與質(zhì)粒(Plasmind)等可移動的遺傳元件有關(guān)(Sunetal,2009).質(zhì)粒大都攜帶某種抗性基因，并且不同大小的質(zhì)粒含有的抗性基因不同.Udo和Grubb(1991)報道4.4kb質(zhì)粒與鏈霉素耐藥有關(guān)，23.8kb質(zhì)?？赡軘y帶多種抗菌藥的抗性基因.Akinbowale等(2006)在86個至少對一種抗生素有抗性的菌株中發(fā)現(xiàn)74.4%的含有質(zhì)粒，數(shù)量在1~10個之間，大小為2~51kbp.此外質(zhì)粒還可以作為轉(zhuǎn)座子(Transposon)及整合子(Integron)/基因盒(Genecassette)的載體，使得質(zhì)粒DNA上的抗性基因通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)、結(jié)合等方式在同種屬甚至不同種屬細菌的質(zhì)粒與質(zhì)粒間、質(zhì)粒與染色體間不斷轉(zhuǎn)移，并通過特異性的整合和重組使多種耐藥基因聚集到細菌的耐藥質(zhì)粒上，致使細菌產(chǎn)生多重耐藥性在抗生素選擇壓力下，質(zhì)粒和與之相關(guān)的轉(zhuǎn)座子使耐藥性的轉(zhuǎn)移和傳播更加迅速，水平獲得耐藥基因的亞群可發(fā)展成優(yōu)勢菌群并將其垂直遺傳給子代(李曉云等，2008).此外，整合子作為繼質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子之后人類發(fā)現(xiàn)的又一重要的細菌多重耐藥及水平傳播機制，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它的存在和多重抗性的表現(xiàn)型之間有較大的關(guān)聯(lián)(Leverstein-vanHalletal.,2002)2.2抗性基因的污染來源抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的濫用不僅會引起水生動物體內(nèi)的抗生素殘留，而且在使用過程中未被水生生物吸收的抗生素、以及隨水生生物糞便排泄的抗生素和穿過網(wǎng)箱未被生物食用的飼料中的抗生素最終溶入海水或隨懸浮物沉降匯集于底部沉積物。殘留在生物體內(nèi)和進入環(huán)境中的抗生素會在養(yǎng)殖生物的腸道細菌內(nèi)和環(huán)境細菌內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生攜帶抗性基因的抗藥菌株，經(jīng)過質(zhì)粒的水平轉(zhuǎn)移等機制將ARGs傳播給其它的細菌，造成抗性基因在水生環(huán)境中的擴散,這是抗性基因的一種污染來源。為了實現(xiàn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，更加合理地開發(fā)利用養(yǎng)殖資源，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)正在由傳統(tǒng)的粗放型養(yǎng)殖場向集約式方向邁進，而集約式養(yǎng)殖場較傳統(tǒng)養(yǎng)殖場更容易誘導(dǎo)產(chǎn)生抗性細菌.集約式養(yǎng)殖場通常使用的是食用過抗生素飼料的陸地動物的糞便，而糞便中可能含有殘留的抗生素和抗性菌株，因此采自此類養(yǎng)殖場底泥中的細菌和魚腸道內(nèi)的細菌抗性水平可能會比傳統(tǒng)養(yǎng)殖場的要高(Petersenetal,2002;PetersenandDalsgaard,2003a;2003b).這一方面由糞便中殘留的抗生素所產(chǎn)生的選擇壓力所致，另一方面，可能是糞便中含有攜帶抗性基因的腸球菌將轉(zhuǎn)座子(包括接合轉(zhuǎn)座子)、抗性質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到受體細菌所致.這些細菌進入魚塘后，通過水平遷移等機制將抗性基因轉(zhuǎn)移到水產(chǎn)環(huán)境和水產(chǎn)動物的腸道細菌體內(nèi)而獲得抗性.Petersen等人(2002)研究了集約式漁牧混養(yǎng)場對細菌抗藥率的影響，發(fā)現(xiàn)從水底泥的混合樣品中分離的指示菌不動細菌屬對6種不同的抗生素的抗藥率與實驗之前相比有很大的提高，實驗之前的抗藥率是1~5%，兩個月后對土霉素和磺胺甲惡唑的抗藥率達到100%，對丙氟哌酸的抗藥率大于80%。目前，除了水產(chǎn)養(yǎng)殖外，畜牧養(yǎng)殖業(yè)也廣泛使用抗生素，禽畜動物腸道內(nèi)被誘導(dǎo)出攜帶抗性基因的抗性菌株，這些抗性菌株最終通過地表徑流和糞便的滲濾進入地下水、河流地表水和近岸海水中，由于水產(chǎn)養(yǎng)殖大多以河流地表水為供水水源，因此，河流中的抗性菌株進入水產(chǎn)環(huán)境內(nèi)，通過細菌間的質(zhì)粒交換，抗性基因進入水產(chǎn)動物的致病菌體內(nèi)，造成潛在的抗性基因污染.圖1ARGs種類3水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗性基因的傳播擴散及方法3.1抗性基因的傳播擴散目前所知的細菌抗藥的基因機制有兩個途徑:1)自身基因突變.該類抗藥性來源于細菌固有的(自然發(fā)生)特征，即本身就有抗藥基因存在于其染色體上，也叫染色體介導(dǎo)的抗藥性，在自然界的耐藥菌中占次要地位;2)抗藥基因的獲得.細菌主要通過4種方式獲得，即轉(zhuǎn)化(Transformation)、轉(zhuǎn)導(dǎo)(Transduction)、接合(Conjugation)和轉(zhuǎn)座(Transposion).細菌的抗藥性多為外在環(huán)境誘導(dǎo)下經(jīng)可動遺傳因子，如質(zhì)粒(Plasmid)、轉(zhuǎn)座子(Transposon)、噬菌體(Bacteriophage)、整合子(Integron)/基因盒(Genecassette)等的傳遞而獲得.這種方式獲得抗藥性機率高，形成后較穩(wěn)定，是引起抗藥性散播的主要原因(曹文斌等，2005)Akinbowale等(2006)在澳大利亞的水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)分離的86個抗性菌株中發(fā)現(xiàn)74.4%的菌株含有不同數(shù)量和大小的質(zhì)粒.這表明細菌表現(xiàn)為抗藥性很可能是因為有些細菌體內(nèi)攜帶抗性基因，而這些抗性基因則位于質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)座子上，如sul2基因通常位于質(zhì)粒上，并且具有廣泛的宿主性(Scholzetal.1989;Smallaetal,2000);tet(M)通常和接合性轉(zhuǎn)座子Tn1545-Tn916相結(jié)合，Tn1545-Tn916是一個廣宿主的轉(zhuǎn)座子，它可以在52個種24個屬的細菌之間轉(zhuǎn)移(ChopraandRoberts,2001;Clewelletal.,1995;Salyersetal.,1995)），這使得抗性基因可以通過染色體垂直傳播或者質(zhì)粒或轉(zhuǎn)座子水平傳播而在環(huán)境中廣泛傳播造成污染.由于抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中長期的濫用,在養(yǎng)殖動物腸道內(nèi)誘導(dǎo)出抗性菌株，這些編碼抗生素抗性基因的菌株是水產(chǎn)環(huán)境中抗生素抗性基因最重要的來源.-旦微生物具有了這種抗性基因，它們能通過例如質(zhì)粒交換來水平轉(zhuǎn)移基因從而傳播抗性基因.有些生物腸道菌中的抗性基因位于質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子等可動遺傳因子(MobileGeneticElement).上，能夠通過基因交換水平擴散到底泥和海水中的其它種的細菌中(羅義和周啟星，2008).例如sul基因可以通過整合子和轉(zhuǎn)座子或是利用噬菌體和移動質(zhì)粒作為它們傳播的工具(SmallaandSobecky,2002).許多研究表明某些tet基因也可以被接合性質(zhì)?；蜣D(zhuǎn)座子攜帶而在環(huán)境中進行傳播(Junetal.,2004;Agers覬etal.,2007;ChopraandRoberts,2001;Clewelletal.,1995;Salyersetal.,1995).不僅同菌屬.間可以進行質(zhì)粒的交換，研究還發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒的交換也可以發(fā)生在不同菌屬.Rhodes等(2000)發(fā)現(xiàn)編碼四環(huán)素抗性基因的相關(guān)質(zhì)?？梢栽诓煌臍鈫伟鷮俸痛竽c埃希氏菌中傳播.Twiddy和Reilly(1995)在東南亞的一個常使用抗生素的魚塘中發(fā)現(xiàn)對抗生素產(chǎn)生抗性的沙門氏菌、嗜水氣單胞菌和類志賀鄰單胞菌，并發(fā)現(xiàn)編碼抗性的質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子會從一種菌傳播到另一種.菌，最終會將抗性質(zhì)粒傳播到在水產(chǎn)環(huán)境中不常見的致病菌體內(nèi).Akinbowale等(2006)從澳大利亞的水產(chǎn)地區(qū)分離的12個抗土霉素菌株中，有5個菌株可以將它們的R質(zhì)粒轉(zhuǎn)移到來自雞、豬和人類的大腸桿菌受體中，而且tet(A)、tet(D)和tet(M)可以轉(zhuǎn)移，tet(E)不可以，這可能是因為tet(E)基因通常是與非接合性質(zhì)粒連接在一起的，此外在海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖中，海水中的細菌也有可能將抗性基因轉(zhuǎn)移到魚腸道的細菌里(Nonakaetal.,2000)，也有報道當處于無抗性壓力的條件下時，海洋細菌會在幾代之后丟失質(zhì)粒DNA(Chadnrasekaranetal.,1998).整合子是近年來在細菌中發(fā)現(xiàn)的天然克隆表達系統(tǒng)，它是一種基因片段，具有位點特異性重組功能，能識別、俘獲及表達外來移動性基因盒，使得抗藥基因在環(huán)境中發(fā)生擴散(劉婷婷和李鳳云，2006).當整合子不能移動時，它便趨向于與轉(zhuǎn)座子或是接合性質(zhì)粒相連接，作為它們傳播的工具(Ployetal,2000).已有研究表明氣單胞菌屬攜帶整合子，而整合子可以獲得或丟失抗生素抗性基因(FluitandSchmitz,1999)有些地區(qū)的水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)某種抗生素雖然已經(jīng)被禁止使用很長時間，但仍可以在環(huán)境中追蹤檢測到此類抗生素的抗性細菌存在.Dang等(2006a)在中國北方的一個海參和海膽的養(yǎng)殖場內(nèi)，從海參中分離的抗氯霉素菌株中，有65%的菌株含有catIV或catlI基因，而從海膽中分離的抗氯霉素菌株中，35%的含有catlI基因，而且所有對cat呈陽性的菌株還攜帶一個或兩個tet(B)、tet(D)或tet(A).此外Dang等(2006b)在對中國一個海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖場的研究中發(fā)現(xiàn)，分離出的多重抗藥菌株中cat基因與tet(B)基因的出現(xiàn)有很好的相.關(guān)性.而早在1999年氯霉素在中國就已經(jīng)被禁止用于海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因有兩個，一方面可能是因為氟苯尼考的使用，它是氯霉素的一種衍生物，另一方面可能是由于土霉素的交叉選擇而導(dǎo)致產(chǎn)生交叉抗藥性(CrossDrugResistance).交叉抗藥性是指某種病原菌對一種藥物產(chǎn)生耐藥性后，往往對同一類的藥物也具有耐藥性的現(xiàn)象，產(chǎn)生這-現(xiàn)象的原因是因為同類的藥物往往具有相同的作用靶位，而不同種類的藥物結(jié)構(gòu)不同，作用靶位也不同(CourvalinandTrieu-Cuot,2001).因此cat基因的出現(xiàn)極有可能是土霉素共同選擇的結(jié)果，Courvalin和Trieu-Cuot(2001)推測其基因機制可能是tet基因與cat基因位于同一個可移動遺傳因子，比如質(zhì)粒、轉(zhuǎn).座子或整合子，這種推斷尚需要進一步的研究證實.研究表明環(huán)境中攜帶抗性基因的細菌可以將抗性基因轉(zhuǎn)移到人體致病菌中.例如腸球菌可以轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)座子(包括接合性轉(zhuǎn)座子)、抗性質(zhì)粒到很多受體菌體內(nèi)(Morrisonetal.,1997)，所以它們可能會成為革蘭氏陽性菌(包括人類致病菌)的抗性基因庫.Furushita等(2003)在日本3個不同的漁場采集的魚中檢測出抗四環(huán)素菌株，結(jié)果顯示魚的菌株中攜帶的抗四環(huán)素基因的序列和從人類臨床分離的菌株中存在的抗四環(huán)素基因的序列呈現(xiàn)出高度的相似性.Rhodes等(2000)研究發(fā)現(xiàn)土霉素抗性質(zhì)粒在水產(chǎn)和醫(yī)院分離的菌株之間發(fā)生了轉(zhuǎn)移，這為抗性質(zhì)粒在氣單胞菌和大腸桿菌中轉(zhuǎn)移提供了直接的證據(jù).這些資料充分說明水產(chǎn)環(huán)境中的抗性菌可能會將抗性基因傳播到人體內(nèi)病原菌，使人致病菌攜帶抗性.另有研究表明，攜帶ARGs的微生物菌株死亡后，攜帶ARGs的DNA可釋放到環(huán)境中并持久存在(Blumetal.,1997;HillandTop,1998;Crecchioetal.,2005)，原因是在脫氧核糖核酸酶(DNase)的保護下，防止其被降解.依此推斷，水生環(huán)境中裸露的DNA分子最終可能會轉(zhuǎn)入到其他生物體細胞內(nèi)，造成抗性基因在水生環(huán)境中的傳播和擴散，并可能通過直接接觸或污染食物鏈等多種途徑進入人體，增加人體的抗生素抗藥性，使細菌感染性疾病的治療更加棘手.抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的大量使用,使水和土壤環(huán)境不僅成為抗性基因的儲庫，也成為抗性基因擴展和演化的媒介.圖2抗生素抗生基因種類3.2抗性基因的檢測方法抗性基因作為-種新型的污染物已經(jīng)在不同的環(huán)境體系如河流底泥、海水、灌溉渠、污水處理場的出水、農(nóng)場的瀉湖等被檢測出(Prudenetal.,2006;Aminovetal.,2001;2002;Smithetal,2004;Peietal.,2006;Kimetal.,2004;Henriquesetal.,2006)，最終可能會通過食物鏈進入人體內(nèi)，對食品安全和人體健康構(gòu)成嚴重的威脅，因此建立環(huán)境中抗性基因的檢測方法就顯得尤為重要.目前的抗性基因檢測方法主要有兩種，傳統(tǒng)的方法是利用抗性平板法篩選出抗性細菌，對其進行總量的測定，并鑒定出抗性細菌的種屬，然后從菌體中提取DNA,再用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)檢測環(huán)境中的抗性基因.由于環(huán)境中許多微生物難以平板培養(yǎng)，主要是因為對其最適生長溫度、pH、氧、營養(yǎng)成分等不十分清楚.因此，以傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)的方法評價抗性難免低估了微生物的種類.因此，發(fā)展了直接在環(huán)境樣品中提取總DNA，再利用PCR方法分析環(huán)境中的抗性基因的方法.該方法與細胞抽提法相比較，優(yōu)點是提取DNA率高，簡便快捷(陳竹等，2007)，但從環(huán)境樣品中直接提取的DNA樣品難免會殘存腐殖酸和一些酚類物質(zhì)，對后續(xù)的實驗如PCR、限制性內(nèi)切酶等反應(yīng)有一些影響，因此在提取的過程中需要對其進行純化處理.細菌的總量測定一般采用最大可能數(shù)法(MPN)，這是一種應(yīng)用概率理論來估算細菌濃度的方法.種屬鑒定包括傳統(tǒng)的生理生化鑒定和分子生物學(xué)鑒定方法.其中16SrDNA和BIOLOG就是較為常見的分子生物學(xué)鑒定技術(shù).近年來，在傳統(tǒng)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上，發(fā)展了Realtime-PCR(RTQ-PCR)技術(shù)，實現(xiàn)了從定性到定量的飛躍.該技術(shù)的基本原理是在反應(yīng)體系中加入熒光探針，運用Taq酶的5'-3'外切酶活性和熒光能量傳遞技術(shù)，巧妙地把核酸擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術(shù)結(jié)合在一起，借助熒光信號的積累來實時監(jiān)測整個進程，最后通過標準曲線對未知核酸模板進行定量分析的方法.Realtime-PCR技術(shù)的發(fā)展和完善，為環(huán)境中存在的抗生素抗性基因的研究提供了方法學(xué).上極大的可能.除了上述常見的方法以外，有的研究(PhuongHoaetal.,2008;Mirandaetal,2003)也利用Southern印記雜交法龍ok(SouthernBlotting)和DNA-DNA雜交法(DNA-DNAHybridization)進行抗性基因的定性和定量.4開展此研究的必要性隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來越廣泛，水產(chǎn)業(yè)的病害問題是制約其發(fā)展的一個重要因素，目前在世界范圍內(nèi)通用的防治措施是使用抗生素.目前歐美已經(jīng)通過許可監(jiān)督程序?qū)λa(chǎn)品中的抗生素藥殘進行監(jiān)測和控制，從而達到對抗生素使用的有效監(jiān)管，我國作為水產(chǎn)業(yè)大國，水產(chǎn)養(yǎng)殖的年產(chǎn)出量不斷增長決定了抗生素的使用不會迅速退出歷史舞臺，但我國尚未制訂嚴格的監(jiān)管措施，盡管有些藥品(如氯霉素)屬禁用藥品，但在部分地區(qū)并未真正做到令行禁止，直接導(dǎo)致水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素使用管理混亂，因此在我國由抗生素誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗性基因?qū)Νh(huán)境造成的污染可能比世界其它各國更為嚴重，加之藥品生產(chǎn)和使用監(jiān)管力度不足，抗生素在養(yǎng)殖業(yè)中濫用的情況十分嚴重，直接后果即導(dǎo)致養(yǎng)殖動物體內(nèi)抗性菌株的產(chǎn)生，并極有可能在環(huán)境中進行傳播和擴散，對人體健康構(gòu)成潛在威脅(Hunteretal.,1994;朱力軍，2001).已有證據(jù)表明，畜牧活動能導(dǎo)致動物體內(nèi)的抗性菌株擴散進入環(huán)境并將其攜帶的抗性基因傳播給環(huán)境微生物(Chee-Sanford,2001;lsaacsonandTorrence,2002;Furushitaetal.,2003).一旦獲得了抗藥性，這些環(huán)境微生物可通過多種方式傳播進入人體，對人類健康構(gòu)成潛在的威脅，而且我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖點多位于沿海灘涂，這使得抗性菌株和抗性基因更容易擴散進入公海水域，不但會對整個水生生態(tài)系統(tǒng)造成威脅，甚至對相鄰國家的水域也會造成抗性基因的污染，這將直接有損我國在國際上進出口貿(mào)易的國際形象和經(jīng)濟收益(羅義和周啟星，2008).抗生素作為水產(chǎn)養(yǎng)殖中重要的抗細菌性疾病藥物，在現(xiàn)階段仍具有不可替代的作用.因此，針對我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)大量使用抗生素這一現(xiàn)狀，開展?jié)O業(yè)環(huán)境抗生素抗性基因污染的研究，揭示抗生素抗性基因在漁業(yè)環(huán)境中的擴散和傳播規(guī)律，對于評價抗生素抗性基因的生態(tài)風(fēng)險十分必要，不僅能確保我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展，而且對于我國的生態(tài)安全和經(jīng)濟發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義目。結(jié)論目前，在我國對于抗生素抗性基因在環(huán)境中的來源、傳播和擴散機制等研究數(shù)據(jù)還尚處于空白，水產(chǎn)養(yǎng)殖中抗性基因的污染尚未引起人們的足夠重視，我國又是一個水產(chǎn)養(yǎng)殖大國，在抗生素的使用種類和數(shù)量方面還沒有相應(yīng)規(guī)章制度的約束，而且有些漁民缺乏這方面的知識，造成抗生素的濫用現(xiàn)象十分嚴重，直接導(dǎo)致環(huán)境中抗性基因的產(chǎn)生和傳播擴散，所以呼吁政府和有關(guān)部門門]應(yīng)加強對這一類新型環(huán)境污染物的重視，加強監(jiān)管.相關(guān)研究應(yīng)該集中在以下幾個方面:1.養(yǎng)殖業(yè)中抗生素抗性基因的RTQ-PCR檢測標準方法體系的構(gòu)建;2.對國內(nèi)重點水產(chǎn)養(yǎng)殖場進行針對性調(diào)查，確認我國水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中抗生素抗性基因的種類和污染水平，分析ARGs與抗生素環(huán)境選擇壓力之間的關(guān)系;3.開展養(yǎng)殖環(huán)境抗生素抗性基因的來源、擴散和傳播規(guī)律研究，分析環(huán)境因素的變化如光照、溫度、pH以及氧對ARGs傳播擴散的影響及機制;4.加強抗生素抗性基因?qū)游锖腿梭w的健康風(fēng)險研究，研究抗生素抗性與養(yǎng)殖動物和人致病菌之間的關(guān)系，建立抗生素抗性基因生態(tài)環(huán)境安全評價和預(yù)警體系.參考文獻[1]SapkotaA,SapkotaAR,KucharskiM,etal.Aquaculturepracticesandpotentialhumanhealthrisks:currentknowledgeandfuturepriorities[J].EnvironmentInternational,2008,34(8):1215-26.[2]VanBoeckelTP,BrowerC,GilbertM,etal.Globaltrendsinantimicrobialuseinfoodanimals[].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2015,112(18):.5649-5654.[3]ZhangQQ,YingGG,PanCG,etal.ComprehensiveevaluationofantibioticsemissionandfateintheriverbasinsofChina:sourceanalysis,multimediamodeling,andlinkagetobacterialresistance[J].Environmentalscience&technology,2018,49(11):6772-6782.[4]TatavarthyA.ComparisonofantibioticsusceptibilityprofilesandmoleculartypingpatternsofclinicalandenvironmentalSalmonellaentericaserotypeNewport[J].JournalofFoodProtection,2019,(4):74