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DB51DB51/T1793—2014青稞黑穗病檢疫鑒定方法2014-07-25發(fā)布2014-09-01實施四川省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I 1 1 1 1 2 2 2 4 4 51青稞堅黑穗病菌[Ustilagohordei(Pers.)菌界[Fungi]，擔子菌綱[Basidiomycetes]，蕉孢亞綱[Teliosporae]，黑粉菌目[Ustilaginales],黑粉菌科2）：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGGA-3’5’-TGTGGCTCGCACCTGTCCAAC-3’套，在離田塊四邊4~10步（米）遠的各處，隨機選擇5個點取樣,每點用無菌剪刀剪下2個病穗，置于無3孢子呈球形或橢圓形，表面光滑，綠褐色至深褐色，一邊顏色稍淡，直徑4~9μm，萌芽生圓柱型），（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGGA-3’0.1mM的后引物（5’-（5’-TGTGGCTCGCACCTGTCCAAC-3’0.1mM的后引步：循環(huán)第二步40~45次；第四步：72℃延伸2min。42%瓊脂糖凝膠檢測，加入溴酚藍和二甲苯青作為電泳指示劑，Goldenview染色DNA，以100bpLadderDNAMarker為條帶大小參照標準，電壓增產(chǎn)物顯示單一條帶，760bp，判定為含有散黑穗病菌病穗外觀癥狀和病原菌孢子形態(tài)符合7.1.2.1和7.2.3.1描述者，即可鑒定為青稞堅黑穗病菌。按病穗外觀癥狀和病原菌孢子形態(tài)符合7.1.2.2和7.2.3.2描述者，即可鑒定為青稞散黑穗病菌。按5培養(yǎng)基和試劑A.1.1成分A.1.2制法將上述成分混合加熱溶解，分裝，121℃滅菌15min。取出后冷卻至45℃~50℃,傾注平板。A.2.1成分A.2.2制法將上述成分混合加熱溶解，分裝，121℃滅菌15m

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