DB5117T 30-2020 達州黃花組織培養(yǎng)繁育技術規(guī)程　　

DB5117TechnicalRegulationOfTissueCultureAndPropagati達州市市場監(jiān)督管理局發(fā)布本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的本文件第4.2.2章節(jié)—MS培養(yǎng)基配制，由于日常購買的白砂糖和瓊脂質(zhì)量存在差異，在規(guī)定濃度范本文件第4.3章節(jié)—不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配制，在愈傷誘導培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基和生本文件第4.10.2章節(jié)—繼代培養(yǎng)，需控制愈傷組織大小，將直徑大于2cm的愈傷組織切成直徑2cm本文件第5章節(jié)—煉苗，營養(yǎng)缽中基質(zhì)成分及比例為泥炭土：珍珠巖：蛭達州黃花組織培養(yǎng)繁育技術規(guī)程GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和LY/T1882界定的以及下列術語和定義適用在無菌培養(yǎng)基上，對植物離體器官、組織或細胞進行培養(yǎng)，以形成再生植株，或培養(yǎng)新的育種材組培苗tissueculturese利用外植體，在無菌和適宜的人工條件下，采用植物組織培養(yǎng)技術，培育出的完整植在植物組織培養(yǎng)中，外植體由于自身分泌的酚類化合物被氧化產(chǎn)生褐色醌類物質(zhì)，導致外植體褐4黃花組織培養(yǎng)繁育技術流程4.2培養(yǎng)基配制4.2.1母液配制按GB/T603、GB/T6682的規(guī)定執(zhí)行。將培養(yǎng)基所需的大量元素、鐵鹽、有機成分配制成比使用濃度高100倍的母液，微量元素配制成比使用濃度高1000倍的母液，均用棕色玻璃瓶保明母液號、配制倍數(shù)、日期，保存在冰箱冷藏按GB/T603、GB/T6682的規(guī)定執(zhí)行。配制MS培養(yǎng)基時將四種母液按比例混合后，加入白砂糖、瓊脂和水。所需白砂糖濃度為20g/L～30g/L，瓊脂粉濃度為4g/L4.3不同培養(yǎng)階段培養(yǎng)基配制4.3.1愈傷誘導培養(yǎng)基4.3.2繼代培養(yǎng)基4.3.3分化培養(yǎng)基4.3.4生根培養(yǎng)基4.5培養(yǎng)基分裝和滅菌4.5.1培養(yǎng)基分裝4.5.2培養(yǎng)基滅菌4.6培養(yǎng)室消毒將培養(yǎng)室清掃干凈，關閉門窗，按每立方米空間用高錳酸鉀16g，福爾馬林32ml，水16ml瓦器皿中混合產(chǎn)生蒸氣進行消毒，消毒時間10～12h。4.7材料選取選擇春苗生長期健壯無病斑的黃花幼苗整株，切除根、葉部分，保留約8cm～10cm莖基段，用軟毛4.8材料消毒4.9剝離外植體和接種在超凈工作臺上鋪上無菌濾紙，用無菌鑷子將莖基段剝開直至露出莖尖生長點，在20X的顯微鏡下用無菌解剖針切取0.5mm莖尖1～2個，隨即接種于黃花愈傷誘導培養(yǎng)基上，切口與培養(yǎng)基表面接觸。每4.10組培苗培養(yǎng)4.10.1愈傷誘導培養(yǎng)將接種外植體的愈傷誘導培養(yǎng)基放置在培養(yǎng)架上進行愈傷誘導培養(yǎng)。溫度22℃~25℃,光照強度4.10.2繼代培養(yǎng)長出愈傷組織后，轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)，每2-3周繼代一次。溫度22℃~25℃,光照4.10.3分化培養(yǎng)選擇致密型愈傷組織轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基上進行不定芽的分化培養(yǎng)。溫度22℃~25℃,光照強度4.10.4生根培養(yǎng)光照強度2000lx～