臨床常見微生物的鑒定-螺旋體、支原體、衣原體、立克次體鑒定

立克次體

立克次體（Rickettsia)是一類嚴格細胞內(nèi)產(chǎn)生的原核細胞型微生物，為紀念從事斑疹傷寒研究工作受感染而犧牲的美國醫(yī)生HowardTaylorRicketts而命名。特點：1.G-有細胞壁，多形性，專性活細胞內(nèi)寄生2.含有DNA和RNA兩種類型的核酸，二分裂3.大小介于細菌和病毒之間，光鏡下可見4.以節(jié)肢動物為媒介或為寄生/儲存宿主5.人畜共患病的病原體，引起發(fā)熱出疹性疾病6.對抗生素敏感。細胞中的立克次體立克次體穿入細胞立克次體主要生物學性狀形態(tài):多形態(tài)(球狀短桿狀絲狀)

大小:0.3～0.6um×0.8～

2.0um

染色:

革蘭染色:陰性(不易著色)Giemsa染色:紫紅色兩端濃染培養(yǎng)須活體細胞內(nèi)培養(yǎng)(9～

12小時繁殖一代)

所致疾病:立克次體病

斑疹傷寒

Q熱埃立克次體病巴通體病貓抓病主要病原性立克次體

種類 傳染源媒介昆蟲主要臨床表現(xiàn)免疫力

普氏立克次體

人人體虱發(fā)熱、頭痛、皮疹持久（流行性斑疹傷寒）神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)損傷斑疹傷寒立克次體鼠等鼠蚤發(fā)熱、頭痛、皮疹持久（地方性斑疹傷寒）

鼠虱

恙蟲病立克次體鼠等恙螨局部黑色焦痂持久（恙蟲熱）發(fā)熱、頭痛、皮疹內(nèi)臟損害貝納柯克斯體家畜蜱發(fā)熱、頭痛一定程度（動物間）心內(nèi)膜炎

抗原構造——外斐氏反應（斑疹傷寒、斑點熱、恙蟲?。┑挚沽εc細菌類似，對抗生素敏感（禁用磺胺）

不同立克次體在細胞內(nèi)位置不同

普氏立克次體：細胞質(zhì)分散恙蟲病立克次體：細胞質(zhì)近核處成堆貝納柯克斯體：細胞質(zhì)空泡五日熱巴通體：細胞外表面血清學反應外斐反應---非特異性適用:與變形桿菌抗原OX19OX2OXk有交叉的立克次體。(斑疹傷寒/恙蟲病)(滴度≥1:160或4倍增長---陽性)

間接免疫熒光實驗

ELISA

其他斑疹傷寒斑點熱貓抓病恙蟲病皮膚焦痂

蜱

螺旋體

螺旋體（spirochete）是一類細長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動活潑的原核細胞型微生物。

與細菌相似——有細胞器、原始核、二分裂、對抗生素敏感。與原蟲相似——運動有賴于內(nèi)鞭毛的屈曲與收縮。對人有致病性的螺旋體有三個屬：密螺旋體屬、疏螺旋體屬、鉤端螺旋體屬。

疏螺旋體密螺旋體鉤端螺旋體第一節(jié)鉤端螺旋體一生物學性狀G—，常用鍍銀染色呈褐色，運動活潑唯一可人工培養(yǎng)的致病性螺旋體，營養(yǎng)要求較復雜，常用含10%兔血清的柯氏（Korthof）培養(yǎng)基，生長緩慢液體——云霧狀生長固體——扁平透明菌落抵抗力較弱分兩種問號鉤體（寄生性、致病性）雙曲鉤體（腐生性、無致病性）二、致病性與免疫性致病物質(zhì)內(nèi)毒素樣物質(zhì)溶血素細胞毒性因子致細胞病變物質(zhì)

所致疾?。恒^端螺旋體病（鉤體?。﹤鞑シ绞绞?、豬（儲存宿主）——傳染源腎臟繁殖（隱性感染）尿排菌污染水源、土壤人接觸感染（皮膚、黏膜、眼結膜、垂直）——途徑病程潛伏期敗血癥血管損傷期恢復期7-10天1-3天4-10天輕重不一輕：類似上感，自限重：黃疸、出血、休克、死亡受損器官不同肺出血期流感傷寒型黃疸出血型腎功衰竭型起病急、高熱、乏力、全身酸痛、眼結膜充血、腓腸肌壓痛、表淺淋巴結腫大三、微生物學檢查法實驗室檢測

發(fā)病10天內(nèi)取血液;1周后取尿液;有腦膜刺激者取腦脊液1、直接鏡檢2、分離與鑒定接種至Korthof培養(yǎng)基，置28℃孵育。陽性標本在2周內(nèi)可見培養(yǎng)液呈輕度混濁→暗視野顯微鏡檢查→有→則用已知診斷血清鑒定其血清群和血清型。陰性標本:分離培養(yǎng)應連續(xù)觀察4個月，仍無生長者。

5、血清學診斷病初和發(fā)病后第3～4周各采血清一次。有腦膜刺激癥狀者采取腦脊液方法:

顯微鏡凝集試驗(MAT)

間接凝集試驗

3、動物接種

4、分子生物學方法

四、防治原則防鼠、滅鼠，加強對帶菌家畜的管理。在常年流行地區(qū)，對易感人群和與疫水接觸者宜接種包含當?shù)亓餍兄暝趦?nèi)的多價鉤端螺旋體疫苗。第二節(jié)密螺旋體屬——梅毒螺旋體

又稱蒼白密螺旋體——梅毒的病原體一生物學性狀菌體細長，兩端尖直，8-14個螺旋，鍍銀染色呈褐色，運動活潑（暗視野）人工培養(yǎng)不成功抵抗力極弱（溫度、干燥），抗生素敏感抗原結構

表面特異性抗原→凝集，制動，或溶解抗體

(屬特異性抗原)

類屬抗原→抗心磷脂抗體(反應素):與牛心肌類脂Ag發(fā)生非特異性反應(無保護作用，僅用作血清學診斷)

二、致病性和免疫性致病物質(zhì)（不十分明確）所致疾病——梅毒傳染源：病人傳播途徑：性行為——獲得性（后天性）梅毒垂直傳播——先天性梅毒（梅毒兒）梅毒病程Ⅰ期（初期）梅毒：感染性極強，破壞性小感染后3周左右局部出現(xiàn)無痛性硬下疳，多見于外生殖器，一般4～8周后，常自愈。Ⅱ期梅毒：感染性強，破壞性小發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后2～8周。蒼白亞種螺旋體血癥，全身皮膚、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴結腫大，有時亦累及骨、關節(jié)、眼及其他臟器。Ⅲ期(晚期)梅毒：感染性小，破壞性大發(fā)生于感染2年以后，亦可長達10～15年的。病變可波及全身組織和器官?；緭p害為慢性肉芽腫，局部組織壞死。損害常進展和消退交替出現(xiàn)。皮膚、肝、脾和骨骼常被累及?？晌＜吧Ｏ忍煨悦范玖鳟a(chǎn)、死胎梅毒兒（馬鞍鼻、皮膚病變、鋸齒形牙、角膜炎、先天耳聾）免疫性——傳染性免疫三、微生物學檢查與防治原則病原學檢查血清學試驗（檢查病毒抗體）檢測核酸防治加強性教育，嚴格社會管理梅毒確診后青霉素徹底治療（3月-1年抗體轉(zhuǎn)陰治愈）標本下疳滲出液梅疹液淋巴結抽取液暗視野觀察鍍銀染色免疫熒光非特異性：非密螺旋體抗原試驗抗原(正常牛心肌的心脂質(zhì))→血清中的反應素(抗脂質(zhì)抗體)

方法:VDRL和RPR試驗。適用于大量過篩。特異性：密螺旋體抗原試驗抗原（Nichols株螺旋體）→螺旋體特異抗體優(yōu)點：特異性強，可用作梅毒證實試驗常用方法：FTA-ABS試驗和MHA-TP試驗梅毒疹夏科關節(jié)?。á笃诿范荆R鞍鼻（先天性梅毒）Hutchinson’s門齒（先天性梅毒）第三節(jié)疏螺旋體伯氏疏螺旋體一、生物學性狀G—（不易著色），常用Giemsa染色，螺旋疏松，運動活潑可進行人工培養(yǎng)，但營養(yǎng)要求較高，生長緩慢有3-10個稀疏而不規(guī)則的螺旋，呈波浪狀伯氏疏螺旋體萊姆病回歸熱疏螺旋體回歸熱吸血昆蟲二、致病性與免疫性所致疾病—萊姆?。ㄗ匀灰咴葱詡魅驹矗﹤鞑シ绞絻Υ嫠拗鳎喊鬃闶蟆⒙箓鞑ッ浇椋河豺纾ú下菪w在其腸中繁殖）傳播方式：叮咬（蜱糞便、唾液感染傷口）病程潛伏期（3-30天）及表現(xiàn)叮咬處慢性移行性紅斑（2-3W）早期癥狀：頭痛、發(fā)熱、肌痛等晚期癥狀：皮膚、神經(jīng)、關節(jié)、心臟，一個或多個系統(tǒng)損害萊姆病的傳播媒介三、微生物學檢查和防治血清學檢查及分子生物學診斷技術加強防護，防止硬蜱叮咬人用疫苗仍在研制中。回歸熱螺旋體回歸熱是多種疏螺旋體引起的疾病虱傳回歸熱（流行性回歸熱）—回歸熱疏螺旋體蜱傳回歸熱（地方性回歸熱）—其他15種疏螺旋體急起急退的高熱，反復發(fā)作，肌肉酸痛，黃疸、肝脾腫大、出血傾向等體液免疫為主高熱期涂血片查螺旋體

衣原體

衣原體（Chlamydia)是一類嚴格細胞內(nèi)產(chǎn)生，又獨特發(fā)育周期，能通過細胞濾器的原核細胞型微生物。共同特征1形態(tài)：G—圓形或橢圓形2結構：具有肽聚糖組成的細胞壁3發(fā)育：獨特發(fā)育周期，二分裂繁殖，形成包涵體4核酸：有DNA和RNA兩種核酸5代謝：自身無能量來源，嚴格細胞內(nèi)寄生6抗生素：敏感主要生物學性狀一、形態(tài)及發(fā)育周期球形或橢圓形，Giemas染色呈紫紅色，光鏡下可見兩種形態(tài)原體（紫色）——小而致密，位于胞外，有核質(zhì)及細胞壁，為成熟典型衣原體，有感染性，無繁殖力始體（網(wǎng)狀體，藍色）——大而疏松，位于胞內(nèi)，無核質(zhì)及細胞壁，為衣原體分裂階段，無感染性，正在繁殖發(fā)育周期

原體吸附侵入→發(fā)育增大為始體→始體二分裂增值并成熟為原體→釋放包涵體（深紫色）——在宿主細胞內(nèi)增值成形成網(wǎng)狀體和子代原體空泡（增值場所）有助于診斷

二、抵抗力對理化因素的抵抗力不強耐低溫，-70℃保存數(shù)年常用消毒劑短期內(nèi)將其殺滅對大環(huán)內(nèi)脂類抗生素敏感三、抗原成分

衣原體LPS和外膜蛋白

LPS---屬特異性補體結合抗原位于細胞壁外膜蛋白---種特異性抗原(MOMP)

型特異性抗原包涵體培養(yǎng)特性雞胚、小鼠、細胞培養(yǎng)（與病毒相似）

抵抗力較弱，抗生素敏感（大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類）沙眼亞種:湯飛凡，1955，雞胚卵黃囊接種法,14個血清型第一節(jié)沙眼衣原體所致疾病傳播方式主要表現(xiàn)沙眼生物亞種沙眼接觸（眼-眼、眼-手-眼）早期（初次）：流淚、粘性膿性分泌物、結膜充血、濾泡增生）后期（重復）纖維增生、斑痕萎縮、失明包涵體結膜炎經(jīng)產(chǎn)道接觸泳池、性接觸（性-手-眼）病理：上皮細胞內(nèi)包涵體新生兒包涵體結膜炎成人包涵體結膜炎泌尿生殖道感染性途徑占NGU第一位（STD）沙眼衣原體肺炎呼吸道性病淋巴肉芽腫亞種性病淋巴肉芽腫性途徑化膿性淋巴結炎及慢性淋巴肉芽腫（瘺管）鼠亞種不感染人類微生物學檢查法直接涂片鏡檢采用Giemsa、碘液或熒光抗體染色鏡檢，檢查上皮細胞內(nèi)有無包涵體。分離培養(yǎng)接種雞胚卵黃囊或傳代細胞核酸檢測沙眼衣原體檢驗程序

包涵體含糖原，被碘液染為棕褐色沙眼第二節(jié)肺炎衣原體形態(tài)呈梨狀，只有一個血清型（TWAR）引起人類急性呼吸道感染（咽炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎）及結膜炎、心包炎、心肌炎等與冠狀動脈硬化性心臟病的發(fā)生有關（病灶內(nèi)有此病原體）第三節(jié)鸚鵡熱衣原體自然宿主為鳥類，并引起鳥類禽類感染（呼吸道、消化道）傳播途徑接觸、呼吸道所致疾病——鸚鵡熱輕重不一輕者——上感典型——發(fā)熱、咳嗽、胸悶、肺炎重者（雷擊型）——全身中毒癥狀、昏迷死亡（3日內(nèi)）

支原體支原體（mycoplasma）能獨立生活的最小的原核細胞型微生物特點：沒有細胞壁，多形性，常呈絲狀，多分支狀（故名）能通過濾菌器二分裂繁殖含有DNA和RNA固體培養(yǎng)基——油煎蛋菌落（與L型相似）1.形態(tài)及染色大小:0.2～0.3um無細胞壁,呈多形態(tài)(球形桿形絲狀體)染色性:革蘭染色陰性(不易著色)姬姆薩(Giemsa)染色:淡紫色2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求:較一般細菌高需加入10%～20%的小牛血清PH:7.6～

8.0溶脲脲原體:最適PH5.5～

6.5氣體:有氧/無氧均可初分離:微需氧(5%CO2，90%N2)

繁殖方式:二分裂(分節(jié)斷裂出芽分枝)

生長速度:緩慢固體基:3～

5天后出現(xiàn)菌落；液體基:無明顯混濁

生長溫度:35℃～

37℃

菌落特征:油煎蛋樣(核心較厚,向下長入培養(yǎng)基,周邊為一層薄的透明區(qū))

需用低倍顯微鏡觀察3.抵抗力對理化因素敏感,尤其對干燥敏感,耐冷70℃/液氮可長期保存,對干擾蛋白質(zhì)合成的生素敏感(紅霉素,螺旋霉素,交沙霉素)4.生化反應大多數(shù)支原體能利用葡萄糖/精氨酸作為能源肺炎支原體和生殖道支原體:發(fā)酵葡萄糖人型支原體:水解精氨酸解脲脲原體:利用尿素顏色變化單位(CCU):液體培養(yǎng)時,把能看到有顏色變化的最高稀釋倍數(shù)定為含有一個顏色變化單位支原體支原體粘附于呼吸道黏膜上皮支原體與細菌L型的區(qū)別性狀支原體細菌L型形態(tài)多形性多形性大小0.2~0.3um0.6~1.0um細胞壁無無細胞膜含膽固醇不含膽固醇菌落油煎蛋狀油煎蛋狀通過濾器能能遺傳性與細胞無關與原細菌相同回復成細菌不能能對青霉素不敏感不敏感致病性支原體肺炎等慢性感染第一節(jié)肺炎支原體高度多形性，Giemas染色淡紫色，培養(yǎng)為油煎蛋菌落引起呼吸道外源性感染——支原體肺炎（原發(fā)