生物化學(xué)實驗一蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)

可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！實驗一蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)目的要求驗證蛋白質(zhì)特性；學(xué)習(xí)和掌握蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)的原理和方法；學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。實驗原理蛋白質(zhì)中的某些化學(xué)鍵或氨基酸殘基中的某些化學(xué)基團(tuán)可以與某些特殊試劑形成特定的有色物質(zhì)。這些反應(yīng)稱為蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)。各種蛋白質(zhì)的氨基酸殘基不完全相同。因此，呈色反應(yīng)產(chǎn)物的顏色也不完全一樣。呈色反應(yīng)不是蛋白質(zhì)所特有，一些非蛋白物質(zhì)也能呈現(xiàn)類似的呈色反應(yīng)。因此，不能僅以呈色反應(yīng)結(jié)果來判別被測物質(zhì)是否為蛋白質(zhì)。呈色反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)1.原理兩分子尿素經(jīng)加熱至180°C后可以縮合成一分子雙縮脲，并放出一分子氨。雙縮脲在堿性溶液中與銅離子結(jié)合生成紫紅色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。多肽及所有蛋白質(zhì)均具有肽鍵，與雙縮脲分子中亞酰胺鍵結(jié)構(gòu)相同，也能發(fā)生此反應(yīng)，因此，蛋白質(zhì)在堿性溶液中與銅離子也能呈現(xiàn)出類似于雙縮脲的顏色反應(yīng)。2.器材與試劑1)器材試管、藥匙、電爐、試管夾、滴管。2)試劑〈1〉蛋白質(zhì)溶液(10%卵清蛋白溶液)：吸取雞蛋清溶液10ml，加蒸餾水稀釋，定容至100ml?！?〉10%氫氧化鈉溶液。〈3〉1%硫酸銅(CuSO4)溶液?！?〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液：稱0.1g甘氨酸溶于蒸餾水中，稀釋至100ml。〈5〉結(jié)晶尿素。3.實驗步驟雙縮脲反應(yīng)實驗可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！(1)制備雙縮脲：取結(jié)晶尿素少許(約火柴頭大小)，放入干燥的小試管中。微火加熱至尿素熔解至硬化，剛硬化時立即停止加熱，尿素放出氨，此時雙縮脲即已形成。冷卻后作為雙縮脲樣品(1號管)。(2)另取3支試管，與1號管一起按表加樣，混勻，觀察各管顏色變化，記錄結(jié)果并解釋現(xiàn)象。茚三酮反應(yīng)1.原理蛋白質(zhì)或氨基酸在弱堿性條件下，其上的氨基與茚三酮共熱可產(chǎn)生藍(lán)紫色縮合物。此反應(yīng)為一切蛋白質(zhì)和α-氨基酸所共有，具有亞氨基的脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)產(chǎn)生特征性的黃色化合物，含有氨基的其他化合物也能呈此反應(yīng)。2.器材與試劑1)器材濾紙、試管、試管夾、藥匙、電爐、滴管、吸管、水浴鍋。2)試劑〈1〉卵清蛋白溶液100ml：與雙縮脲反應(yīng)相同?！?〉0.1%甘氨酸(Gly)溶液?！?〉0.1%茚三酮水溶液?！?〉0.1%茚三酮-乙醇溶液：0.1g茚三酮溶解于乙醇中并用乙醇定容至100ml。3.實驗步驟與結(jié)果觀察(1)取兩支試管，按表加樣。茚三酮反應(yīng)實驗(2)另取一張濾紙，滴一滴0.1%Gly溶液，風(fēng)干后，在原處滴一滴0.1%茚三酮-乙醇溶液，在微火旁烘干顯色，觀察紫紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)。黃色反應(yīng)1.原理在蛋白質(zhì)分子中，具有芳香環(huán)的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)殘基上的芳香環(huán)經(jīng)硝酸作用可生成黃色的硝基化合物，后者在堿性條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)殚冱S色的硝醌衍生物。多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以有黃色反應(yīng)，苯丙氨酸不易硝化，需加入少許濃硫酸后才會有黃色反應(yīng)。2.器材與試劑1)器材同茚三酮反應(yīng)2)試劑可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！〈1〉卵清蛋白溶液100ml：與雙縮脲反應(yīng)相同。〈2〉10%氫氧化鈉溶液?！?〉頭發(fā)?！?〉指甲。〈5〉0.5%苯酚溶液?！?〉濃硝酸。〈7〉0.3%色氨酸(Trp)溶液。〈8〉0.3%酪氨酸(Tyr)溶液。3.實驗步驟與結(jié)果觀察取6支試管，按表加入試劑，觀察各管出現(xiàn)的現(xiàn)象，有的試管反應(yīng)慢，可置沸水浴加熱5min。蛋白質(zhì)的黃色反應(yīng)實驗待各管出現(xiàn)黃色后于室溫下逐滴加入10%氫氧化鈉溶液至堿性，觀察顏色變化。實驗結(jié)果：雙縮脲反應(yīng)：1號管紫紅色，2號管淺紫色，3號管藍(lán)紫色，4號管藍(lán)紫色。因為多肽及所有蛋白質(zhì)分子均具有肽鍵，與雙縮脲分子中亞酰胺鍵結(jié)構(gòu)相同，也能發(fā)生此反應(yīng)，因此，蛋白質(zhì)在堿性溶液中與銅離子也能呈現(xiàn)出類似雙縮脲的顏色反應(yīng)。茚三酮反應(yīng)：觀察紫紅色斑點(diǎn)可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！可復(fù)制、編制，期待你的好評與關(guān)注！黃色反應(yīng)：1號、2號、3號、4號、5號、6號試管都出現(xiàn)黃色。于室溫下逐滴加入10