性病實驗室檢測方法

性病(xìngbìng)的實驗室診斷共五十三頁性病(xìngbìng)實驗室診斷技術(shù)性病是一組主要通過(tōngguò)性接觸而傳播的一種傳染性疾病。包括細菌、真菌、病毒、衣原體、支原體、螺旋體、原蟲和寄生蟲等

性病實驗室診斷為臨床正確診斷提供科學(xué)依據(jù)2共五十三頁病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼(shāyǎn)衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒－－－病種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴(línbā)肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－性傳播疾病(STD)/性傳播感染(STI)共五十三頁

主要常見性病實驗室檢測(jiǎncè)介紹梅毒(méidú)淋病共五十三頁常用梅毒檢測(jiǎncè)方法病原學(xué)檢測(jiǎncè)血清學(xué)檢測共五十三頁病原學(xué)檢查(jiǎnchá)原理：一期、二期梅毒(méidú)時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒(méidú)螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。方法：病原學(xué)檢查的主要方法有暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法共五十三頁暗視野顯微鏡檢查(jiǎnchá)標(biāo)本采集部位：一期或二期梅毒的皮膚或粘膜損害有痂者去痂，先用無菌棉球或紗布蘸生理鹽水，將皮損拭凈，輕壓皮損至滲液（避免出血）。然后用載玻片印取滲液，立即(lìjí)檢查，未破潰者用手術(shù)刀刮破皮疹，取滲出液。淋巴結(jié)穿刺液以無菌操作法用注射器吸取0.3-0.5ml生理鹽水，穿刺入淋巴結(jié)，再回吸數(shù)次，最后將吸取液涂玻片上，立即檢查。共五十三頁暗視野顯微鏡檢查(jiǎnchá)制片標(biāo)本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗室中于暗視野顯微鏡上油鏡觀察觀察先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光，螺旋整齊，運動(yùndòng)規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運動）共五十三頁9非特異性類脂體抗原血清試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗梅毒血清學(xué)檢測(jiǎncè)方法共五十三頁梅毒(méidú)實驗室操作要求梅毒血清學(xué)試驗操作和結(jié)果分析⑴標(biāo)本的采集和分離①編號或姓名登記②采血、分離血清(xuèqīng)和貯存10共五十三頁梅毒實驗室操作(cāozuò)要求⑵試劑準(zhǔn)備①溫度、器具的校正(jiàozhèng)②試劑、血清和反應(yīng)板恢復(fù)到試驗溫度③試劑鑒定11共五十三頁梅毒實驗室操作(cāozuò)要求⑶試驗操作①血清(xuèqīng)量的控制②試劑量的控制③旋轉(zhuǎn)儀速度和時間的控制12共五十三頁非梅毒螺旋體抗原血清(xuèqīng)試驗1、原理：梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者(huànzhě)血中的抗類脂抗原的抗體2、方法：

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)

甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）共五十三頁RPR

定性試驗?在紙卡圓圈中加入50μL待檢血清，涂滿整個圓圈?使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液?旋轉(zhuǎn)(xuánzhuǎn)100rpm8min?立即判斷結(jié)果共五十三頁RPR

定量(dìngliàng)試驗?待檢血清用生理鹽水在紙卡圓圈中作6個稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32?按定性試驗步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報告結(jié)果共五十三頁

RPR定量(dìngliàng)試驗

中等至大的凝塊為陽性(yángxìng)（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性共五十三頁非梅毒螺旋體抗原血清試驗的優(yōu)缺點：優(yōu)點：*敏感性特異性好

*不需要(xūyào)昂貴設(shè)備，簡單易行*適用于大量人群的血清篩查*有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。*20分鐘可獲得實驗結(jié)果。*試劑與方法均已標(biāo)化，各實驗室間結(jié)果可比較。*試驗可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進行。缺點：*敏感性和特異性低于螺旋體抗原試驗，BFP反應(yīng)和前帶現(xiàn)象共五十三頁

非特異性血清試驗的假陰性：1）有25%~40%的未治梅毒在晚期隱性期可自然逆轉(zhuǎn)為陰性，約30%的心血管和神經(jīng)梅毒呈陰性。2）前帶現(xiàn)象（theprozonphenomenon）,即為抗原抗體量比例不適，抑制陽性反應(yīng)。一般易發(fā)生在滴度在1：500以上的標(biāo)本中。1%的II期梅毒會出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。3）操作人員應(yīng)注意實驗的溫度，試劑盒從冰箱取出后應(yīng)恢復(fù)至室溫，室溫過低（〈10℃）可能(kěnéng)出現(xiàn)假陰性或結(jié)果不準(zhǔn)確。共五十三頁

非特異性血清試驗生物學(xué)假陽性0.25%~0.86%陽性標(biāo)本為生物學(xué)假陽性，主要出現(xiàn)在自身免疫疾病的患者如內(nèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、其它病原體感染（病毒性肺炎、惡性腫瘤和麻風(fēng)）、妊娠婦女。

應(yīng)排除(páichú)技術(shù)性、生理性和生物學(xué)假陽性，并用特異性試驗來證實。共五十三頁非梅毒(méidú)螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法(fāngfǎ)簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。共五十三頁梅毒螺旋體抗原(kàngyuán)血清試驗1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋白為抗原，檢測梅毒患者血中

特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體2、方法：

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收(xīshōu)試驗（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒IgM抗體檢測（IgM）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）共五十三頁梅毒螺旋體顆粒(kēlì)凝集試驗(TPPA)原理：將梅毒的精致菌體成分(chéngfèn)包被在人工載體明膠顆粒上，這種致敏粒子和檢測樣品中的梅毒螺旋體抗體進行反應(yīng)發(fā)生凝集，產(chǎn)生粒子凝集反應(yīng)，由此可以檢測出血清和血漿中的梅毒螺旋抗體。共五十三頁TPPA的結(jié)果(jiēguǒ)判讀+試劑盒內(nèi)部陽性對照(duìzhào)1、1：25602、陰性3、1：1604、陰性5、1：320共五十三頁梅毒(méidú)螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗原理：用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原，或重組抗原包被固相，檢測(jiǎncè)特異性梅毒螺旋體抗體共五十三頁快速試驗(shìyàn)-免疫滲濾法在試紙條上包被螺旋體特異性抗原成份，如47kD、15kD抗原，利用免疫滲濾技術(shù)，將試紙條插入待測血清(xuèqīng)，觀察血清(xuèqīng)與特定抗原成份的反應(yīng)?可在10分鐘之內(nèi)得到結(jié)果，快速、方便?是特異性螺旋體實驗?需要進一步驗證方可用于臨床診斷共五十三頁梅毒螺旋體抗原血清(xuèqīng)試驗臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如TRUST等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分(qūfēn)既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進行診斷。共五十三頁梅毒(méidú)血清學(xué)試驗結(jié)果的臨床意義總匯

TRUSTTPPA意義

RPRTP-ELISA

__排除梅毒一期梅毒的早期(zǎoqī)

++現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)+-生物學(xué)假陽性

-+早期梅毒經(jīng)治療后共五十三頁淋病(lìnbìng)淋病(lìnbìng)是指由淋病(lìnbìng)奈瑟菌(Neisseriagonorrhoeae,簡稱淋球菌)引起的各種化膿性感染，是一種經(jīng)典的常見的性傳播疾病.淋球菌為革蘭陰性雙球菌，大小約0.6~0.8μm。通常成對生長，形如雙腎樣，兩菌接觸面平坦。淋球菌與奈瑟屬的另一種致病菌腦膜炎球菌及其他共棲奈瑟菌在生物學(xué)上有許多相似性，可通過生化特性加以鑒別共五十三頁淋病(lìnbìng)的實驗室診斷方法直接(zhíjiē)顯微鏡檢查，觀察淋球菌細胞；分離培養(yǎng)淋球菌；非培養(yǎng)技術(shù)檢測淋球菌細胞成份如抗原或DNA（EIA,PCR/LCR）

共五十三頁標(biāo)本的采集(cǎijí)和運送-取材部位男性

異性戀者:采集尿道標(biāo)本，有口淫史者加取咽部標(biāo)本；同性戀者:采集尿道、直腸及咽部標(biāo)本.女性

采集宮頸標(biāo)本，必要時從尿道、直腸、咽部、前庭大腺和尿道旁腺取材(qǔcái)；幼女

采集陰道分泌物；新生兒眼炎患者

采集眼結(jié)膜分泌物，對其母親采集宮頸、尿道及直腸標(biāo)本。

共五十三頁標(biāo)本的采集(cǎijí)和運送-運送淋球菌的抵抗力弱，對熱敏感，不耐干燥。取材后標(biāo)本若不能立即接種于選擇性培養(yǎng)基上時(shànɡshí)，需采用運送系統(tǒng)。置于非營養(yǎng)型運送培養(yǎng)基中的標(biāo)本應(yīng)在12小時內(nèi)送到實驗室，接種于選擇性培養(yǎng)基，分離陽性率可達90%以上。超過24小時則分離陽性率下降。共五十三頁直接(zhíjiē)顯微鏡檢查染色(rǎnsè)方法:革蘭染液美蘭染液姬姆薩染液熒光抗體

共五十三頁直接(zhíjiē)顯微鏡檢查原理：男性淋菌性尿道炎患者(huànzhě)常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。共五十三頁革蘭染色：細胞(xìbāo)內(nèi)革蘭陰性雙球菌共五十三頁美蘭染色(rǎnsè)共五十三頁直接(zhíjiē)顯微鏡檢查的臨床意義男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本

敏感性及特異性可高達95%～99%，具診斷價值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時

敏感性僅40～70%。

不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞(xìbāo)外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長(shēngzhǎng)出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點：敏感性81~100%。特異性100%共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)培養(yǎng)法為診斷(zhěnduàn)淋病的金標(biāo)準(zhǔn).對女性淋病的確診應(yīng)做淋球菌培養(yǎng)從選擇性培養(yǎng)基上分離出淋球菌即可診斷淋病。培養(yǎng)的敏感性81~100%。培養(yǎng)的優(yōu)點有：

—特異性極高（100%）；

—可發(fā)現(xiàn)無癥狀淋球菌感染患者；

—可確診兒童性虐待；

—可用于進一步作藥敏試驗；

—可用于治療后的判愈試驗。共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-選擇性培養(yǎng)基評價(píngjià)培養(yǎng)基質(zhì)量的一個重要指標(biāo):

男性淋菌性尿道炎標(biāo)本的革蘭染色與培養(yǎng)的符合率應(yīng)達95%～100%。如果革蘭染色陽性/培養(yǎng)陰性的比率較高則表明選擇性培養(yǎng)基的質(zhì)量欠佳共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-接種標(biāo)本取材后標(biāo)本應(yīng)盡可能及早接種。培養(yǎng)基應(yīng)先置于室溫(shìwēn)中預(yù)溫。將取材的拭子轉(zhuǎn)動涂布于平皿的上1/4范圍，然后用接種環(huán)分區(qū)劃線，以保證獲得較純的單個菌落。共五十三頁接種標(biāo)本(biāoběn)-四區(qū)劃分接種共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-培養(yǎng)條件共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-觀察結(jié)果培養(yǎng)24小時后檢查平皿，此時沒有菌生長的平皿應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至48小時，仍無菌生長才可丟棄，作出淋球菌培養(yǎng)陰性(yīnxìng)的報告。對選擇性培養(yǎng)基上分離的直徑在0.5～1mm，無色、灰白色的半透明菌落應(yīng)作進一步鑒定。共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-觀察結(jié)果共五十三頁共五十三頁淋球菌氧化酶陽性(yángxìng)共五十三頁淋球菌培養(yǎng)(péiyǎng)-淋球菌的確證試驗糖發(fā)酵試驗免疫學(xué)試驗

-熒光抗體染色

-協(xié)同凝集(níngjí)試驗

酶底物試驗DNA探針試驗

共五十三頁糖發(fā)酵(fājiào)試驗糖發(fā)酵試驗檢測奈瑟球菌分解特定糖類(葡萄糖、麥芽糖、乳糖及蔗糖(zhètáng))產(chǎn)酸的能