《釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法》

ICS01.040.65

CCSB04

TB

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/NAIAXXX—XXXX

釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽

的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

DeterminationofchlorateandperchlorateinGrapesandWine

Liquidchromatography-massspectrometry

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實(shí)施

寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)發(fā)布

釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定

液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方

法。

本文件適用于釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版

本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

BJS201706食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測(cè)定

SN/T4089出口食品中高氯酸鹽的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒(méi)有界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4原理

試樣采用不同體積比的乙腈水溶液高速勻漿提取，勻漿液經(jīng)離心后，樣液用一定量的

C18和石墨化炭黑(GCB)分散凈化，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)，保留時(shí)間和離子對(duì)定

性，基質(zhì)外標(biāo)法定量。

5試劑

除非另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

5.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

5.2乙酸（CH3COOH）：色譜純。

5.3甲酸銨（HCOONH4）：液質(zhì)聯(lián)用級(jí)。

5.4石墨化炭黑(GCB)：120-400目。

5.5C18:40～63μm,100gm。

5.6標(biāo)準(zhǔn)品：氯酸鈉(CAS登錄號(hào)CDAA-S-200074-SD，純度＞99%)、高氯酸鈉(CAS登

錄號(hào)CDAA-S-200052S，純度＞99%)。

5.7甲酸銨溶液配制

5.7.120mmol/L甲酸銨溶液：稱取0.6306g甲酸銨（5.4），用超純水溶解并稀釋至500

mL，混勻。

5.7.250%乙腈+1%乙酸溶液：量取50mL乙腈（5.1）于250mL燒杯中，加入50mL

去離子水，再加入1.00mL乙酸（5.2），混勻。

5.8標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

5.8.1混合標(biāo)準(zhǔn)中間液：分別準(zhǔn)確量取1000mg/L的氯酸鹽和高氯酸鹽標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.25

mL，于25.0mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，制成10.0mg/L氯酸鹽、高氯酸

鹽混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4℃保存。

5.8.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液2.50mL，用超純水稀釋至刻

度，搖勻，制成1.0mg/L的氯酸鹽、高氯酸鹽混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，4℃保存。

5.8.3基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要分取適量混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入一定量的空白基質(zhì)

溶液，混勻?；|(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。

6儀器和設(shè)備

6.1液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。

6.2渦旋混合器。

6.3高速勻質(zhì)器。

6.4組織搗碎機(jī)。

6.5離心機(jī)：4000r/min。

6.6電子天平：感量分別為0.0001g和0.01g。

6.7具塞離心管：50mL。

6.8濾膜：0.22μm，有機(jī)相。

7試樣制備與保存

釀酒葡萄樣品去除果梗、雜物后，用組織搗碎機(jī)打漿，置于樣品瓶中，-18℃冷凍備

用。葡萄酒樣充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝

入潔凈容器中，密封并標(biāo)記，于4℃避光保存。

8測(cè)定步驟

8.1樣品提取

準(zhǔn)確稱取5.00g（精確至0.01g）樣品于50mL具塞離心管中，準(zhǔn)確加入50%乙腈

+1%乙酸溶液（5.7.2）20mL，在勻質(zhì)器中以100000r/min勻漿2min，4000r/min常溫離

心3min，取上清液待凈化。

8.2凈化

釀酒紅葡萄：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好150mgC18和50mgGCB)

渦旋凈化，離心2min，凈化液過(guò)0.20μm有機(jī)相濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

釀酒白葡萄：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好100mgC18和50mgGCB)

渦旋凈化，離心2min，凈化液過(guò)0.20μm有機(jī)相濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

葡萄酒：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好50mgC18和10mgGCB)渦旋

凈化2min，離心2min，凈化液過(guò)0.20μm有機(jī)相濾膜，用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。

8.3測(cè)定

8.3.1液相色譜參考條件

（a）色譜柱：AcclaimTRINITYP1復(fù)合離子交換柱（100mm×2.1mm，3μm），或性能

相當(dāng)者。

（b）流動(dòng)相：A為乙腈，B為20mmol/L甲酸銨溶液。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

（c）流速：0.4mL/min。

（d）柱溫：35℃。

（e）進(jìn)樣量：2μL。

表1梯度洗脫程序

時(shí)間(min)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)

07030

0.27030

3.09010

7.09010

8.07030

10.07030

8.3.2質(zhì)譜參考條件

（a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

（b）檢測(cè)方式：采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式采集數(shù)據(jù)。

（c）掃描方式：負(fù)離子模式掃描。

（d）離子源溫度：500℃。

（e）霧化氣壓力（GSI）：20psi。

（f）氣簾氣壓力（CUR）：40psi。

（g）離子化電壓（IS）:-4500V。

（h）質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

表2氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對(duì)和質(zhì)譜分析參數(shù)

化合物母離子（m/z）子離子（m/z）去簇電壓（V）碰撞能量（eV）

83.067.0*-120-22

氯酸根

85.069.0-120-25

99.083.0*-120-25

高氯酸根

101.085.0-120-30

*定量離子對(duì)。

8.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

分別準(zhǔn)確量取1.0mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)工作液0μL、25μL、50μL、125μL、200μL、

500μL、700μL、1000μL，用空白基質(zhì)溶液稀釋并定容至1.0mL。氯酸鹽、高氯酸鹽系列

基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度依次為：0、2.5ng/mL、5.0ng/mL、12.5ng/mL、20.0ng/mL、50.0

ng/mL、70.0ng/mL、100ng/mL。

將混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按儀器參考條件進(jìn)行測(cè)定。以混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐

標(biāo)，以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

8.3.4定性測(cè)定

在相同試驗(yàn)條件下測(cè)定試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸

鹽、高氯酸鹽的色譜保留時(shí)間，以相對(duì)于最強(qiáng)離子豐度的百分比作為定性離子的相對(duì)離子

豐度。若試樣中檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時(shí)間一致的色譜峰，且其

定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度相比，偏差不超過(guò)表3規(guī)定

的范圍，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)的氯酸鹽、高氯酸鹽。標(biāo)準(zhǔn)工作液和待測(cè)樣液中目

標(biāo)物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi)。

表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差

相對(duì)離子豐度（%）>50>20~50>10~20≤10

允許的相對(duì)偏差（%）±20±25±30±50

8.3.5定量測(cè)定

按照儀器條件，試樣檢出與混合標(biāo)準(zhǔn)工作液一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據(jù)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)

工作曲線外標(biāo)法計(jì)算含量。

8.4空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按試樣制備方法操作。

9結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

CV

X………….(1)

m

式中：

X—試樣中各待測(cè)組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg)；

c—從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測(cè)組分的濃度，單位為納克每毫升

（ng/mL）；

V—試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m—稱樣量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留三位有效

數(shù)字。

10方法的定量限

本方法的定量限氯酸鹽、高氯酸鹽為10.0μg/kg。

11準(zhǔn)確度

本方法在10-100μg/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為60.3%-98.0%。添加濃度和回收率范

圍見(jiàn)附錄A。

12精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。

AA

附錄A

(資料性)

氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖

Chlorate-1Chlorate-2

83.0/67.085.0/69.0

Prechlorate-1Prechlorate-2

99.0/83.0101.0/85.0

圖A.1氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖（100mm×2.1mm，3μm規(guī)格色譜柱）

附錄B

(規(guī)范性)

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

表C.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性要求

被測(cè)組分含量精密度

mg/kg%

≤0.00136

>0.001≤0.0132

>0.01≤0.122

>0.1≤118

>114

附錄C

(資料性)

氯酸鹽及高氯酸鹽回收率范圍

表D.1氯酸鹽及高氯酸鹽在釀酒葡萄、葡萄酒中的添加濃度及回收率范圍(%)

氯酸鹽高氯酸鹽

樣品

加標(biāo)濃度加標(biāo)濃度